Fo do A A a RE + pa. » ms À re Cee oa MA a e oom qa aaa “ E - ot wa Le = , ‘ d pm o vues sh A A late We , poten dt o Y ld»! criada iad mv per PP ? y Les pé: C o sun dr 3 fadas ores A à y so Ss E e k ity wine ES vere valo e V ‘ ™ ; ATA 0 idad te A NC o) CPI CS Rene Cel wow nant sc um + LAURE Nee TRE Phare res es pe) Sat oh ca me cdo Hs shined ink é À ri pre na de me € ema, mas ar pes . = - reve - ai pr Mark à ot 4070 ages y - fe rater 0h “te come am SO 02 LIBRARY OF THE HOPKINS UNIVERSITY PRESENTED BY DISPOSED OF BY THE LIBRARY THE JOHNS HOPKINS UNIVERSITY See IF, e Ge eee E Ce >> Bs o ye + Si à FAS de + 0 ima ON Se » ce > ES = HE + os à E TINY Y Ce eo ‘ CRUE rs Cw © EN CGE) RES = x, ( A> A A, =. 7 (e. 4 S Ez Sy EA A ee ES 2 Me = Odo 2 õ CORT . eZ SAE MEMORIAS DO Ro OSWALDO CRUZ TOMO | COM 13 ESTAMPAS E 22 FIGURAS NO TEXTO BP TEIN RIO DE JANEIRO - MANGUINHOS 1909 £5 y PRP” PAEZ dij 9 i Wana EN BEGE, —— co — FACICULO I GIEMSA (G.) e GODOY (A.) — Sobre a iis a Pesquizas tendentes a obter a concentração do sôro antidifterico (1 figura no texto) . $ ‘ é É É A : E 5 Drs. ADOLPHO LUTZ e ARTHUR NEIVA — Erephopsis “auricincta. Uma nova mutuca, da subfamilia: Paz- goninae (Estampa 1) E E - - É c E E ; E Dr. FIGUEIREDO VASCONCELLOS — O sôro anti- - pestozo Drs. ADOLPHO LUTZ e ARTHUR NEIVA — Contribuições para o conhecimento da fauna indijena de Tabanidas Dr. H. DE BEAUREPAIRE ARAGÃO — Sobre a Amoeba diplomitotica n. sp. Contribuição para o estudo da divizão nuclear nas amebas (Estampa 2) Drs. H. de BEAUREPAIRE ARAGÃO e ARTHUR NEIVA — Contribuição para o estudo dos parazitas intra- globulares dos lacertidas. Plasmodium diploglossi n. sp. Plasmodium tropiduri n. sp. (Estampa 3) Dr. A. FONTES — Estudos sobre a tuberculoze (2 figuras no texto) . E = o : - - E à . Dr. ARTHUR NEIVA — Contribuição para o estudo dos dipteros. Observações sobre a biolojia e sistematica das anofelinas brazileiras e suas relações com o impaludismo (Estampa 4) . o > 2 - GIEMSA (G.) u. GODOY (A.) — Ueber Filtration und Versuche, mit Hilfe derselben Diphterieserum zu konzen- trieren (1 Text-Figur) . : =: 5 4 4 > : Dr. ADOLPHO LUTZ u. Dr. ARTHUR NEIVA — Érephopsis auricincta. Eine neue Tabanidenart aus der Subfamilie: Pargontinae (Tafel 1) é > 4 e 5 > 5 é a Dr. FIGUEIREDO VASCONCELLOS — Le sérum anti- - pesteux. - y Dr. ADOLPHO LUTZ u. Dr. ARTHUR NEIVA — Beitráge zur Kenntniss der einheimischen Tabanidenfauna a Dr. H. DE BEAUREPAIRE ARAGÃO — Ueber eine neue Amoebenart, Amoeba diplomitotica. Beitrag zum Studium der Kernteilung bei den Amoeben (Tafel 2) - Drs. H. DE BEAUREPAIRE ARAGÃO and ARTHUR NEIVA — Two new species of Plasmodium, Pl. diplo- glosst and Pl. tropidurt. A contribution to the study of the endoglobular parasites os the lizards (Plate 3) Dr. A. FONTES — Etudes sur la tuberculose (2 Text-Figuren) . Dr. ARTHUR NEIVA — Beitrag zur Kenntniss der Dipteren. Beobachtungen über die Biologie 1 und Systematik der brasilianischen Anophelinen und deren Beziehungen mit der Malaria (Tafel 4) . a y : FACICULO II Dr. S. von Se — Contribuição para o estudo do dezenvolvimento do “Spirochaeta gallinarum” (7 fi- guras no texto : = 6 - > É o 4 E E = Dr. ALCIDES GODOY — Multiplicação dos bacterios em cultura. I. Constante de velocidade de multiplicação Dr. GOMES EE ARE — Echinostomum COUPE pnagae, n. sp. Novo parazito do ant azul, GORE maior. L. (Estampa 5 Dr. S. von PROWAZEK — - Duplicidade morfolojica nos infuzorios ciliados (Estampa 6). a Dr. ARTHUR MOSES — Da pesquiza de antijeno e de anticorpo pela fixação de com lemento . : : Dr. ADOLPHO LUTZ — Contribuição para o conhecimento das especies brazileiras do genero “Simulium” Drs. S. von PROWAZEK e H. DE CE Era ARAGÃO — Estudos sobre a variola (2 figuras no texto e estampas 7 e 8). FRA. +. Dr. CARLOS CHAGAS — Nova tripanozomiaze humana. f Estudos sobre a morfolojia “e o ciclo evolutivo do Schizotrypanum cruzi n. gen., n. Sh., ae etiolójico de nova 'entidade morbida do homem ag eas no texto e estampas 9—13 . - Ê : . 5 - - : Dr. S. von PROWAZEK — Zur Entwicklung von “sirgehaeta gallinarum” (7 Text-Fignren). Dt. ai oe — Ueber die Vermehrung der Bacterien in den Culturen. I. Die Constante ihrer Ge- schwindigkeit . A Dr. GOMES DE FARIA — Echinostomum crotophagae, n. sp. ‘A new parasite of the blue an, Crotophaga maior. L. (With plate 5) . . Dr. S. von PROWAZEK — Formodimorphismus bei ciliaten Infusorien (Tafel 6) 3 Dr. ARTHUR MOSES — Ueber den Nachweis von Antigen und Antikôrper durch Komplementablenkung Dr. ADOLPHO LUTZ — Beitrag zur Kenntniss der brasilianischen Simuliumarten . : > Drs. S. von PROWAZEK und H. DE BEAUREPAIRE ARAGÃO — Variola- Untersuchungen. (2 Text- Figuren und Tafel 7 und 8). Dr. CARLOS CHAGAS — Ueber eine neue Trypanosomiasis des Menschen. Studien über Morphologie und Ent- wicklungszyklus des Schrzotrypanum cruzi n.gen., n. - ; nn gd einer neuen Krankheit des Menschen (10 Text-Figuren und Tafel 9-—13) E - : : 3 : E 79 81 99 105 109 124 147 159 79 81 99 105 109 124 147 159 ne Rr Pa ) À ERR Sa À ER q a) ai MOURUT + TRES NX O ‘ Ma dt oe pater A h ar MN ul) al oft Soe fi hh A RAA tal ur E A IT hive art.” is te Ñ F NS NO TTL {2e rit A NO PR Mn al A tie tnt FM, SH PAP NT AN CN PLU LES | [a eet a Sey, nr he rh AN Pd Nove Date 2 ne tae vo RO RL ea ENT a A re tale he By iota Seven gh ek ey RAR k O A IA NÓ 1 VA { F dd ANA iw RUA i} 7 Li i, fl E A ey o EA é i 4 im SAT Pas Fila PELO HONTE AS A m0 UE OT L as ty arf ‘iy ee e + TNA TENUE US MOTS Te M y A É TOMO I FACICULO I MEMORIAS DO INSTITUTO OSWALDO CRUZ CRI LAE Za RIO DE JANEIRO — MANGUINHOS ABRIL DE 1909 SUMARIO: I — GIEMSA (G.) e GODOY (A.) — Sobre a ultrafiltração. Pesquizas tendentes a obter a concentração do sôro antidifterico (1 figura no texto) . E E 4 o 5 = 2 E 5 II — Drs. ADOLPHO LUTZ e ARTHUR NEIVA — Ee popa memo Uma nova mutuca, da subfa- milia: Pangoninae (Estampa 1) . 2 : : o - o : - ; : 12 HI — Dr. FIGUEIREDO VASCONCELLOS — O sôro Tire: > > 14 IV — Drs. ADOLPHO LUTZ e ARTHUR NEIVA — ie para o coubecinrenty da fautin indiena de Tabanidas é 28 V — Dr. H. DE BEAUREPAIRE ARAGÂO — Se a nc diplomitotica n. Sp. Contribuição a o estudo da divizão nuclear nas amebas (Estampa 2) 5 £ 33 VI — Drs. H. DE BEAUREPAIRE ARAGÃO e ARTHUR NEIVA — Contribuição cara o Estudo a pane zitas intraglobulares dos lacertidas. Plasmodium diploglossi n.sp. Plasmodium tropiduri n.sp. (Est. 3) 44 VII — Dr. A. FONTES — Estudos sobre a tuberculoze (2 figuras no texto) a : a - 5 6 : 51 VIII — Dr. ARTHUR NEIVA — Contribuição para o estudo dos dipteros. Observações sobre a biolojia e sistematica das anofelinas brazileiras e suas relações com o impaludismo (Estampa 4) . : 5 69 SOMMAIRE: I — GIEMSA (G.) u. GODOY (A.) — Ueber filtration und Versuche, mit Hilfe derselben Diphterieserum zu konzentrieren (1 Text-Figur) . E - - 5 = . - = 3 II — Dr. ADOLPHO LUTZ u. Dr. ARTHUR NEIVA — Ee pie Echo Eine neue Tabanidenart aus der Subfamilie: Pangoninae (Tafel 1) - : A : 5 - - o . 5 12 HI — Dr. FIGUEIREDO VASCONCELLOS — Le sérum awe erie : a 14 IV — Dr, ADOLPHO LUTZ u. Dr. ARTHUR NEIVA — oe zur EI Er NICOLE Tabani- denfauna 5 28 V — Dr. H. DE BEAUREPAIRE ARAGÁO — ee eine neue Romans Acocks ooh Beitrag zum Studium der Kernteilung bei den Amoeben (Tafel 2) . a 33 VI — Drs. H. DE BEAUREPAIRE ARAGÃO and ARTHUR NEIVA — Two | new tes of SEER o, Pl. diploglossi and Pl. tropiduri. A contribution to the TÁ of the endoglobular parasites of the lizards (Plate 3) . E 4 : : - 3 E 5 : 44 VII — Dr. A. FONTES — Etudes sur a berne) (2 Text-Figuren) > > 51 VII — Dr. ARTHUR NEIVA — Beitrag zur Kentniss der Dipteren. a über die Biologia und Systematik der brasilianischen Anophelinen und deren Beziehungen mit der Malaria (Tafel 4) E 69 AN 120) As « MEMORIAS» serão publicadas em faciculos, que não aparecerão em datas fixas e que formarão volumes de mais ou menos 200 paji- nas. No minimo, aparecerá um volume por ano. Na parte escrita em portuguez foi adotada a grafia aconselhada pela Academia de Le- tras do Rio de Janeiro. Toda correspondencia relativa ás « MEMORIAS » deverá ser dirijida ao “Diretor do Instituto Oswaldo Cruz - Caixa postal 926 - Manguinhos - Rio de Janeiro”. AVIS Les « MEMOIRES» seront publiés par fascicules qui ne paraitront pas en o __ epoques determinées et qui formeront des volumes d'a peu près 200 pages. Il paraitra chaque année, au moins, un volume. La partie portugaise est écrite selon la graphie adoptée par l’Académie de Lettres de Rio de Janeiro. Toute correspondance doit être adressée au “Directeur de l’Institut Oswaldo Cruz — Caisse postale 926 - Manguinhos - Rio de Janeiro”. UNA AS us. E Abril 1909 Tomo I — n.º 1 Sobre à ultrafilivração. Pesquizas tendentes a outer a concentração do sóro antidifterico pelos Drs. G. Giemsa e A. Godoy Veber Filtration und Versuche, mit Hilfe derselben Diphtherieserum zu konzentrieren von G. Giemsa und A, Godoy A filtração de coloides dissolvidos atravez | | lerte, mit welcher sich zuerst Martin (1), Mal- de gelatina de que se ocuparam já Martin, Bechholds, Malfitano, e Duclaux, tem adqui- rido, especialmente depois dos interessantes trabalhos de Bechholds, extraordinaria impor- tancia. De notavel valor são as pesquizas de Bech- holds, em que, com o aparelho por elle con- struido e chamado de ultrafiltração, mostrou pela primeira vez que se podia variar a per- meabilidade do filtro com modificar a con- centração da geléa, e que, por filtros de di- ferentes permeabilidades se podia em filtra- ções fracionadas separar uns dos outros col- oides de diferentes tamanhos de particulas. A tão promissoras perspectivas, que para a bioquimica em geral abria este metodo de filtração, já Bechholds se referiu em seu tra- balho. Será talvez de interesse lembrar aqui que no dominio da microbiolojia, notadamente no | estudo dos chamados ajentes ultraviziveis, a filtração pelos gelatino-coloides já se mostrou de vantajem. Assim poderam Prowazek e Giemsa demonstrar, que pela ultrafiltração de material nativo de Hiihnerpest, o qual como 2 se sabe é infeciozo, mesmo na diluição de | 1:1000 milhões, é o virus retido pelo filtro de modo a se obter sempre um filtrado com- | Die Filtration gelóster Kolloide durch Gal- fitano (3), Borrel (3), Manca (3) und Du- claux (3) beschaftigten, hat bekanntlich durch die interessanten Arbeiten Bechholds (2) aus- serordentlich an Bedeutung gewonnen. Von besonderer Wichtigkeit sind die Ver- suche Bechholds, in denen er mit Hilfe eines von ihm konstruierten sog. Ultrafiltrationsap- * parates als Erster nachweisen konnte, dass sich die Filterdichte durch Aenderung der Gal- lertkonzentration beliebig variiren lasst und dass sich durch verschieden dichte Filter Kol- loide verschiedener Teilchengrôsse durch frak- tionierte Filtrationen voneinander trennen las- | sen. Auf die überaus mannigfachen Perspek- | tiven, die uns diese Filtrationsmethode für die | gesamte Biochemie etc. erdffnet, hat Bechhold bereits in seinen Arbeiten hingewiesen. Es diirfte vielleicht von Interesse sein, an dieser Stelle zu erwähnen, dass die Filtration durch Kolloidgallerte auf parasitologischem Gebiete, namentlich beim Studium sogenann- ter ultravisibiler Erreger, bereits Vorteilhaftes geleistet hat. So konnten Prowazek und Giem- sa (4) zeigen, dass es bei der Ultrafiltration von frischem Hiihnerpestmaterial, das bekannt- lich noch in einer Verdiinnung von 1:1000 Millionen infektiós ist, mit absoluter Sicher- heit gelingt, das Virus im Filter zuriickzuhal- pletamente inocuo; pela filtração em vela Chamberland- Pasteur isto acontece raras ve- zes, e pelo uzo de filtros mais grosseiros nunca se dá. O mesmo tem lugar para o cauzador da variola descrito por Prowazek e Aragão. Requerem-se as condições seguintes para demonstração em estado puro desses micro- organismos: filtrar primeiramente atravez uma vela esteril de largos póros, porem verificada im- permeavel para as bacterias (por ex. uma vela de porcelana comum de Berkefeld;), separa- se assim as bacterias existentes, podendo-se, então, supor que no filtrado só se encontra o chamado germen ultravizivel em estado de pureza, com o qual se poderá, daí por de- ante, proceder de modos diversos. Por pro- cesso semelhante se conseguiu, como re- salta no mesmo trabalho, izolar os ajentes da variola e da Hühnerpest até aí desconhe- cidos ou ainda não diagnosticados com segu- rança. Aquilo que resta na ultrafiltração so- bre a camada superficial de um filtro de gran- des poros coberto de agar, lavado com agua fiziologica de clorureto de sodio, com o fim de separar o mais possivel a parte seroza, é finalmente tornado por esse meio sucetivel de coloração, e a cor revela nitidamente como formas muito pequenas. Indicações exatas sobre a membrana de agar aí empre- gada — vela de Pukal coberta com agar a 3 °/, — funcionando por pressão reduzida, são encontradas nos orijinais referidos. A operação com este filtro não é sómente muito mais comoda, mas oferece notaveis vantajens sobre o aparelho de Bechholds como pudemos verificar. Podia ser que este metodo fosse tambem utilizavel em estudos soro-biolojicos, e então, na experiencia, se conseguisse, com o em- prego de filtros de diferentes graus de per- meabilidade, obter o enriquecimento dos an- ticorpos existentes no soro antidifterico, si- multaneamente com a separação dos compo- nentes do soro sem importancia para a sua ação curativa. Como vantajens de nosso me- todo de filtração pelo vacuo podemos indi- car as seguintes: ten und stets ein vollkommen unschädliches steriles Filtrat zu erhalten, während dies be- kanntlich bei der Filtration durch Chamber- land-Pasteur-Kerzen nur selten, bei Anwen- dung noch gróberer Bakterienfilter nie gelingt. Dasselbe gilt für den von Prowazek und Ara- gão (5) beschriebenen Erreger der Variola. Hieraus sind aber auch folgende fiir die Rein- darstellung dieser Mikroorganismen wichtigen Schlüsse zu ziehen: Filtriert man das in einer genügenden Menge physiologischer Kochsalz- lósung aufgeschwemmte Material zunáchst durch ein steriles, weitporiges, aber bekannter- weise fiir Bakterien dichtes Filter, z. B. durch eine gewóhnliche Berkefeld'sche Kieselgur- kerze, siebt man auf diese Weise die Bakte- rien gewissermassen ab, so muss man anneh- men, dass man es im Filtrat nunmehr mit einer Reinkultur der sogenannten ultravisibilen Erreger zu thun hat, mit der man dann nach den verschiedensten Richtungen hin weiter operieren kann. Auf ähnliche Weise gelang es denn auch, wie aus denselben Arbeiten hervorgeht, die bis dahin unbekannten, bezw. noch nicht mit geniigender Sicherheit diagnos- tizierten Erreger der Hiihnerpest und Variola zunächst zu isolieren, sie durch Ultrafiltration auf der obersten Schicht einer weitporigen Agargallerte zurückzuhalten, durch Auswa- schen mit physiologischer Kochsalzlósung von den serósen Bestandteilen móglichst zu tren- nen, und sie schliesslich, nachdem sie so für die färberische Darstellung geeigneter gemacht worden waren, durch Tinktion als äusserst kleine Gebilde sehr schôn zur Anschauung zu bringen. Genaue Angaben bezüglich der da- mals benutzten Gallertmembranen — mit 1 bezw. 3°/,-igem Agar úberschichtete Pukal- kerzen etc. —, bei denen mit Minusdruck ge- arbeitet wurde, befinden sich in den betreffen- den Originalien. Da sich das Operieren mit diesen Filtern nicht nur sehr bequem gestaltete, sondern dem Arbeiten mit dem Bechhold'schen Apparat ge- geniiber manch andere bemerkenswerte Vor- teile zu bieten schien, entschlossen wir uns, diese Methode auch serobiologischen Studien nutzbar zu machen und zwar zunächst zu ver- suchen, ob es gelânge, bei Anwendung ver- STE Re 1) Observámos já em pesquizas preliminares, que pelo emprego do nosso aparelho — ao menos no que se refere á filtração de soro de cavalo — não se dá separa- ção ou gelatinização do coloide, como por exemplo, observou Bechholds na ul- tra-filtração de soro de coelho nem soli- dificação no sentido de Duclaux. Pelo nosso metodo de filtração, o soro con- serva, mesmo quando pela ultrafiltração foi concentrado até a consistencia xaro- póza, o estado de liquido homojeneo e o filtro possue, como resalta da aproxi- mada igualdade do reziduo seco em cada uma das frações da filtração, do começo ao fim a mesma permeabilidade para os soroproteinas. Se esta observação rezulta unicamente do vazio regular obtido pela trompa de agua ou, mais provavelmente da diferença essencial da ação da pressão ou do vacuo, só outras pesquizas poderão decidir. 2) Nosso aparelho torna superfluo o em- prego de um ajitador, porque os coloides concentrados em virtude de um maior pezo especifico decem da superficie da vela para o fundo e aí se reunem, em- quanto que o filtro é sempre envolvido por soro diluido que se adiciona. 3) O trabalho pelo vacuo permite seguir exa- tamente com a vista todo o curso da fil- tração, quer no soro filtrado, quer no res- tante. 4) Nosso aparelho é extraordinariamente ba- rato e facil para se preparar. A camada de agar sobre a vela de Pukal obtem-se com facilidade; todo o aparelho não difere esencialmente do já descrito por Prowa- zek e Giemsa, e compreende-se sem dificuldade pelo dezenho junto. E” esterilizado no auto- clave; depois de frio mergulha-se a vela 3—4 vezes em agar liquefeito e esfriado a 500, de- pois, com o fim de solidificar o coloide, co- loca-se a vela em um cristalizador esfriado por gelo e no fundo agua para que náo se- que a camada de agar. Com algum exercicio obtem-se facilmente por este modo uma ca- schieden dichter Filter im Diphterieserum eine Anreicherung von Antikórpern zu erzielen un- ter gleichzeitiger Abscheidung der für die Heil- wirkung irrelevanten Serumbestandteile. Die Vorteile unserer Vacuum -Filtrationsmethode glauben wir hauptsächlich in folgenden Punk- ten erblicken zu müssen. 1) Wie wir schon gelegentlich einiger Vorver- suche beobachteten, findet bei dem Arbei- ten mit unserem Apparat — wenigstens soweit es sich um die Filtration von Pfer- deblutserum handelt — ein Abscheiden bezw. ein Gelatinieren des Kolloids, wie es z. B. Bechhold bei der Ultrafiltration von Kaninchenserum beobachtete, eine sog. So- lidifikation im Sinne Duclaux’s nicht statt. Bei unserer Filtration bewahrte das Serum, selbst wenn es bis zu Sirupdicke durch Ultrafiltration eingeengt war, stets seinen homogenen flüssigen Zustand und die Fil- ter zeigten dementsprechend, wie aus den annáhernd gleichbleibenden Trockenriick- stânden der einzelnen Filtratsfraktionen hervorgeht, am Anfang wie am Ende der Filtration ziemlich dieselbe Durchlássigkeit fiir die Serumproteine. Ob diese Beobach- tung lediglich auf den mássigen, durch die Wasserstrahlluftpumpe erzielbaren Druck zurückzuführen ist, oder, was wahrschein- licher ist, auf prinzipielle Unterschiede, die zwischen der Wirkung von Druck bezw. Minusdruck obwalten, muss späteren Un- tersuchungen vorbehalten bleiben. 2) Unser Apparat macht einen Rührer über- flüssig, da das konzentrierte Kolloid des hóheren spezifischen Gewichtes wegen am Kerzenrand zu Boden sinkt und sich dort ansammelt, wahrend das Filter immer mit dem nachfliessenden diinneren Serum um- spilt wird. 3) Das Arbeiten im Vacuum gestattet es, den ganzen Verlauf des Filtrationsprozesses, sowohl was Filtrat, wie Rückstand anbe- langt, mit dem Auge genau verfolgen zu konnen. 4) Unser Apparat ist ausserordentlich leicht und wohlfeil herzustellen. mada homojenea de agar. À camada de agar comporta-se um pouco dezigualmente, segun- do a sua espessura, não no que diz respeito ao tamanho dos seus póros, que é o que só- mente tem importancia. Durante a formação da camada, a torneira a deve se conservar aberta para que o calor que transmite o agar á vela de Pukal não determine pressão al- guma no aparelho e por conseguinte a forma- ção de bolhas na camada de agar solidificado. Pequenas bolhas de ar que se formam so- bre o agar, rezultantes de introdução muito Das Ueberschichten der Pukalzellen mit Agar wurde folgendermassen bewerkstelligt: Der ganze Apparat, der in der Hauptsache dem bereits friiher von Prowazek und Giem- sa (4) beschriebenen gleicht und dessen An- ordnung ohne weiteres aus der beigegebenen Zeichnung ersichtlich ist, wurde zunächst im Dampftopf sterilisiert, darauf abgekiihlt und die Zelle etwa bis d abwechselnd 3—4 mal bald in die fliissige, auf 500 abgekiihlte Agar- lósung hineingetaucht, bald behufs Erstarrens des Kolloids in einen eisgekühlten Zylinder rapida do filtro no coloide, podem facilmente eliminar-se pela aproximação de um fio de pla- tina incandecente do logar em que ellas se en- contram, quer a massa esteja liquida, quer já solidificada. Para se obter filtrados estereis é necessario intercalar entre o tubo que tem a torneira a e o tubo aspirador uma pequena bola cheia de algodão antes de se fazer a es- terilização no autoclave. No tubo b coloca- se um pedaço de tubo de borracha com o fim de evitar que seja perfurado o filtro na introdução do capilar. Em lugar do filtro de Pukal pode-se, naturalmente, empregar ou- gebracht, dessen Boden mit Wasser bedeckt war, um das Eintrocknen der Agargallerte zu verhindern. Bei einiger Uebung lässt sich | auf diese Weise leicht eine homogene Ueber- schichtung erzielen. Die Gallerte fallt zwar bezüglich der Dicke der Schicht etwas un- gleich aus, nicht jedoch, worauf es in erster Linie ankommt, beziiglich ihrer Porengrósse. Wahrend des Ueberschichtens ist Hahn a zu ôffnen, damit sich infolge der Wárme, die sich von der Agarlósung auf die Pukalkerze überträgt, kein Ueberdruck im Apparat und als Folge hiervon Blasen in der erstarrenden 7 tro como o de Berkefeld, Chamberland etc. assim tambem a forma pode ser outra qual- | quer, alem da reprezentada no dezenho, tal como a cilindrica. A preparação da camada de celoidina é feita do mesmo modo, somente, porem, é a propria filtração limitada em vir- tude da penetração de grande quantidade de agua nos póros do coloide solidificado que continha o meio dissolvente. Para a prepa- ração da solução de agar uza-se somente agua distilada. Para o modo de se comportar du- rante a filtração não é indiferente empregar- se como suporte da camada de coloide que depois deve ser solidificada uma vela humida ou seca. No primeiro cazo, temos uma ca- mada superficial; ao contrario, no segundo, em que uma camada se forma penetrando na vela, observa-se que a filtração se procede mais rapidamente não se dando a imbibição. Este fato é interessante não só teorica como praticamente. Uma camada melhor se obtem esfriando previamente a vela de Pukal em agua gelada antes de mergulhar no agar pouco quente. A gelatina, devido ao tempo para se solidificar, apropria-se pouco, ou mesmo nada, para o revestimento. Diversas pesquizas preliminares feitas com celoidina, gelatina e agar nos mostraram que o ultimo é o que mais se apropria ao nosso fim; ao contrario da gelatina consegue-se fa- cilmente que o agar se solidifique, mesmo quando a temperatura ambiente é alta; em contrapozição com a celoidina, no agar não é o liquido intermicelar facilmente volatil, de modo que com elle se pode obter um filtro esteril e de tamanho avaliavel de póros. Para se fazer idéa da permeabilidade do material de filtro que uzámos, filtramos sore de cavalo atravez de membranas de agar de diferentes grandezas de póros, assim como de celoidina, á passajem de metade da quantidade pri- mitiva atravez do filtro com a camada. A tabella I rezume os rezultados obtidos, e ai assinalámos os reziduos solidos na sua maio- ria constituidos por substancias albuminoides e o reziduo da incineração indicando os sães | inorganicos correspondentes ao soro filtrado e ao concentrado. durante o tempo necessario | | Agarschicht bilden. Kleine Luftbläschen, die mitunter infolge zu schnellen Fintauehens des Filters in den Agar auf der Gallerte entste- hen, lassen sich leicht durch Annäherung ei- nes gliihenden Platindrahtes an die betreffen- den Stellen der fliissigen oder in Erstarrung begriffenen Masse entfernen. Um sterile Fil- trate zu erzielen, ist es notwendig, zwischen dem Rohr, an welchem Hahn a angebracht ist, und dem Saugschlauch eine mit Watte gefüllte Vorlage anzubringen, bevor die Ste- rilisation des ganzen Apparates im Dampftopf erfolgt. Am Rohr b ist ein Gummischlauch angebracht, der ein Durchstossen der Filter- | zelle beim Einfügen der Capillare verhindert. Anstatt der Pukalfilter kann man natürlich auch solche nach Berkefeld, Chamberland etc. benutzen, ebenso ist man durchaus nicht an die in der Zeichnung angegebene Form des Filters gebunden, sondern kann auch mit Zy- lindern u. dergl. arbeiten. Die Zelloidiniiber- schichtung geschah in ähnlicher Weise, nur wurde vor der eigentlichen Filtration das in den Poren des erstarrenden Kolloids befind- liche Lósungsmittel durch Hindurchsaugen | grôsserer Wassermengen verdrängt. Zur Be- | reitung der Agarlósung diente ausschliesslich destilliertes Wasser. Für den zeitigen Verlauf der Filtration war es nicht ganz gleichgültig, ob man die Kolloidlósung, die spater zur Fil- | tergallerte erstarren sollte, auf einer feuchten oder trockenen Pukalkerze zum Gelatinieren gebracht hatte. In ersterem Falle, in welchem | man es mit einem Ueber- anstatt mit einem Durchschichten der Kerze zu thun hat, beob- achtet man, dass die Filtration stets schneller | vonstatten geht als bei durchtränktem Pukal. | Diese Tatsache ist ebenso theoretisch interes- sant wie praktisch bedeutsam. Das Ueberschichten mit Agar gelingt am besten, wenn man die Pukalkerze vor dem | Eintauchen in die mássig warme Agarlósung in Eiswasser kiihlt. Gelatine eignet sich we- | gen ihres langsamen Erstarrens zum Ueber- schichten wenig oder garnicht. Verschiedene Vorversuche, die mit Cozelloi- din-, Gelatine- und Agarfiltern angestellt wur- den, liessen uns erkennen, dass sich letztere am besten für unsere Zwecke eigneten; im on, Re Quadro I Soro normal de cavalo Pela filtraçäo Filtração em concentrou-se incineração soro normal de de 10 cc. em gr. | Soro orijinal | 0.924 | | 0.055 | | amarelado Reziduo seco Reziduo de de 10 cc. em gr. Soro concentrado 1.220 0.072 amarelo 200 cc. á 100 cc. Filtrado ?/,0 0.641 0.040 amarelado Filtrado 8/,0 0.639 0.039 amarelado Soro concentrado amarelo escuro 200 cc. á 100 cc. Filtrado 3/57 0.036 quazi incolor Filtrado 8/,0 0.035 quazi incolor | Soro concentrado 1.602 | 0.070 amarelo escuro Celoidina 200 cc. á 100 cc. Filtrado 3/, 0.242 0.046 incolor Filtrado 8/5 | 0.240 0.044 incolor Mtn ae due I] Soro antidifterico Filtração | Pela filtração Reziduo seco Reziduo de Unidades A trou-se de 10 cc. em gr PRESSE imunizantes Su cen nt e * || de 10 cc. em gr. | Soro orijinal | 0.975 | | 0.058 150-200 | amarelado Soro concentrado 2.120 0.099 200 - 300 amarelo 0 Agar fs) 1800 ce. RO ICE | Soro filtrado | 0.670 40-80 amarelado Soro concentrado 2.340 400 - 500 amarelo escuro 0 Agar 3%o [po Sadino, | Soro filtrado | 0.278 pr 0.035 ee menos de 10 | quazi incolor Tabelle I Normalpferdeblutserum Filtration Es wurden vom Trockenrückstand Glührückstand Tone Normalserum durch 10 E 10 a Farbe urch: Filtration eingeengt aus cc. in g. aus cc. in g. Originalserum 0.924 0.055 gelblich Concentr. Serum 1.220 gelb Agar 1% 200 cc. auf 100 cc. Filtrat 3/1 0.641 gelblich Filtrat 8/1 0.639 gelblich Concentr. Serum 1.541 0.078 tiefgelb Agar 3% 200 cc. auf 100 cc. Filtrat 3/,0 0.290 0.036 fast farblos Filtrat 8/4) 0.272 0.035 fast farblos Concentr. Serum 1.602 tiefgelb Zelloidin 200 cc. auf 100 cc. Filtrat 3/ 0.242 0.046 farbloss Filtrat 8/1, 0.240 0.044 farbloss Tabelle 11 Diphtherieserum . : Es wurden Trockenrück- PTE VA ros durch Filtration stand RUES pi Farbe urch: eingeengt aus 10 cc. in g. aus 10 cc. in g. einheitem | Originalserum || 0.975 | | 0.058 | [| 150-200 | gelblich Concentr. Serum 2.120 0.099 200 - 300 gelb 0 BEN CO EEE rt pa | 0.042 40-80 gelblich Concentr. Serum 2.340 0.104 400 - 500 tiefgelb 0 Apartado 200 ce ant OO CE e (gemisciit) 0.278 0.035 | unter 10 || fast farblos E O desecamento foi feito no vacuo sobre acido sulfurico e a incineracáo ao vermelho rubro e em todos os cazos até pezo cons- tante. Debaixo da rubrica 3 do quadro en- contramos a dezignação */,, e */,, que se deve entender como a terceira, ou oitava fracáo de 10 cc do filtrado. O resto do filtrado náo foi minuciozamente pesquizado. Os valores contidos no quadro mostram claramente que possuimos no agar um mate- rial de filtro apropriado para demonstrar com evidencia o fenomeno Bechholds. Aí vemos que, O agar a 1%, é mais permeavel para os coloides do soro que o agar a 3º/,; que o agar a 3%, náo permite a passajem da materia córante do soro o que náo fazem os póros do agar a 1º/,. Um filtro de celoidina mostra-se ainda menos permeavel para a ma- teria córante e para os albuminoides que uma membrana de agar a 3°/,. De mais interesse sáo os rezultados da avaliação do reziduo de incineração. Indi- cam que os valores obtidos no filtrado sáo notavelmente menores que os referentes ao soro concentrado ou ao orijinal. Compreende-se por si, que a só avalia- cáo do pezo náo seja suficiente para respon- der si se dá aqui como fato predominante a adsorcáo do clorureto de sodio aos coloides do soro concentrado ou se os valores a mais se referem simplesmente ás substancias inor- ganicas (fosforo, calcio, etc.) que estando li- gadas aos albuminoides do soro creceriam naturalmente á medida que o soro se con- centrasse, e que, portanto, deveriam ser cal- culados separadamente. A rezolução desta questáo será mais tarde obtida por meio de pesquizas especiais neste sentido e no que se refere em particular á dozagem quantita- tiva exata dos sais inorganicos no filtrado e no soro concentrado, notadamente no que diz respeito ao clorureto de sodio. A filtração do soro antidifterico foi feita de modo semelhante ao do soro normal, sendo porém o aparelho protejido da luz. Servimo-nos aqui tambem do filtro com ca- mada superficial. A compozição do soro ori- jinal, do soro concentrado, e do ultrafiltrado Gegensatz zu Gelatine liess sich der Agar bei der hier herrschenden hohen Lufttemperatur leichter zum Erstarren bringen, im Gegensatz zum Zelloidin besteht bei ihm die intermi- cellare Fliissigkeit nicht aus einem leicht flüch- tigen Medium, sodass bei ihm auf eine sta- bilere, bei wiederholter Filterbereitung immer wieder leicht herzustellende Porengrósse ge- rechnet werden kann. Um uns von der Durchlässigkeit des zu benutzenden Filtermaterials ein Bild machen zu kônnen, wurde zunächst normales Pferde- blutserum durch Agarmembranen verschiede- ner Porengrósse, ferner durch Zelloidin filtriert und zwar solange, bis die Hálfte des urspriing- lichen Serumvolumens durch das «überschich- tete» Filter gegangen war. Beistehende Ta- belle I giebt über die hierbei erzielten Resultate Aufschluss und zwar die dort eingezeichneten Trockenriickstânde über den Gehalt der Fil- trate und der Konzentrationssera am festen, zum gróssten Teil aus Albumin bestehenden Substanzen, die Glührückstände über den an anorganischen Salzen. Das Trocknen wurde im Vacuum über Schwefelsáure, das Glühen bei starker Rotglut vorgenommen und wurde in allen Fällen solange fortgesetzt, bis Gewichts- konstanz erreicht war. Unter den in Rubrik 3 der Tabelle bei den Filtraten stehenden Be- zeichnungen */,, und */,, sind die an dritter bezw. an achter Stelle übergegangenen Frak- tionen von je 10 ccm. zu verstehen. Das übrige Filtrat wurde nicht näher untersucht. Die in der Tabelle enthaltenen Werte zei- gen uns zunächst, dass wir in dem Agar ein Filtermaterial besitzen, das geeignet ist, das Bechhold'sche Phânomen recht gut zur Ver- anschaulichung zu bringen. So sehen wir, dass 1 °/,iger Agar durchlässiger für die Serum- kolloide ist wie 3 °/,iger, dass ferner die Poren des 3°/,igen Agars dem Serumfarbstoff kaum noch den Durchtritt gestatten, wahrend es die des 1%,igen noch thun. Ein Zelloidinfilter wies für Farbstoff und Eiweisskórper noch eine etwas geringere Durchlässigkeit als die 3 °/,ige Agarmembran auf. Von weiterem Interesse sind die Ergeb- nisse der Glührückstandsbestimmung. Sie zeigen, dass die bei den Filtraten erhaltenen RREO | rie) em substancias rezistentes 4 desecação e ao vermelho rubro (reziduo seco e de incinera- ção), assim como o numero de unidades imu- nizantes se encontram no quadro II. Os dados que aí se acham provam que possuimos na ultrafiltração um meio de ele- var até trez vezes o valor antitoxico de um soro, evitando o emprego de temperatura de certo modo elevada ou de ajentes quimicos. Infelizmente é ella inutil para a soro-terapeu- tica, pois com o crecer de unidades imuni- zantes aumenta proporcionalmente a quanti- dade de materias albuminoides no soro enri- quecido, sendo que, apezar de se conservar o soro completamente claro, elle se torna de consistencia xaropoza, de modo a ser pouco proprio para injeções. Além disso, como mostra o quadro, uma separação de albuminoi- des por meio de uma membrana de agar mais permeavel é acompanhada de perda aproxi- madamente equivalente de antitoxina. E’ de notar que na filtração de soro antidifterico não se dá a minima adsorção dos anticorpos ao material do filtro, quando se compara o nu- mero total de unidades imunizantes contidas no soro primitivo com as que existem no soro concentrado e no filtrado, levando em conta os respetivos volumes, se verifica que a perda de antitoxina é minima. A questão está limitada a saber si se póde progredir nesse sentido ou não. Nosso pa- recer seria precoce, dado o numero pequeno de experiencias, e as pesquizas devem ser re- feitas com outra orientação por ver si se ob- terão indicações outras. Porém hoje já pode- mos dizer que a ultrafiltração só terá evidente importancia para a pratica soroterapica quando se conseguir por meio d'ella separar as mate- rias albuminoides ou, ao menos, a sua maior parte dos anticorpos. Esta idéa será realizada no dia em que se descobrir um material de filtro, que se caraterize, de um lado, por uma “capacidade de adsorção para os anticorpos e de outro pela sua solubilidade em tempera- tura não nociva ao imunicorpo. Com o fim de realizar este pensamento procurámos uzar a gelatina não insolubilizada para material de filtro. Não foram porém as pesquizas conti- Werte wesentlich geringer sind als die bei dem eingeengten bezw. Originalserum erzielten. Es leuchtet ohne weiteres ein, dass die Gewichtsfeststellung an und für sich nicht geniigt, um die ebenso theoretisch wie prak- tisch interessante Frage beantworten zu kôn- nen, ob dieser beim konzentrierten Serum erhaltene Mehrbetrag lediglich auf Rechnung der an das Eiweiss chemisch gebundenen anorganischen Substanzen (Phosphor, Cal- cium etc.) zu setzen ist, die ja naturgemäss mit der Konzentration des Serums wachsen miissen, oder ob hier auch die Adsorption des Chlornatriums an das eingeengte Serumkolloid eine wesentliche Rolle spielt. Die Beantwor- tung dieser Frage muss demgemäss späteren, speziell nach dieser Richtung hin vorzuneh- menden Untersuchungen vorbehalten bleiben, bei denen es namentlich auf genaue quanti- tative Bestimmung der anorganischen Salze im Filtrat und Konzentrationsflüssigkeit, insbe- sondere des Chlornatriums ankommen wird. Die Filtration des Diphtherieserums wurde in derselben Weise wie die des Normalserums bewerkstelligt, nur schiitzten wir den Apparat vor Tageslicht. Auch hier bedienten wir uns der «iiberschichteten» Filter. Der Gehalt des Originalserums, des Konzentrationsserums und des Ultrafiltrates an festen bezw. hitze- bestândigen Substanzen (Trocken- und Gliih- rückstand) sowie an Immunitätseinheiten fin- det sich in Tabelle II. Die dort niedergelegten Daten beweisen, dass wir in der Ultrafiltration ein Mittel be- sitzen, um den Antitoxingehalt eines Serums bei Vermeidung hdkerer Warmegrade und chemischer Agentien bis auf etwa das drei- fache zu erhôhen. Leider ist für die sero- therapeutische Praxis hierdurch vorlaufig noch wenig gewonnen, denn mit dem Wachsen der Immunitätseinheiten nimmt gleichzeitig auch der Eiweissgehalt zu und die Fliissigkeit erreicht schliesslich hierdurch, wenn auch unter Beibehaltung vólliger Klarheit, eine der- artig stark viskôse sirupartige Konsistenz, dass sie fiir Injektionszwecke ungeeignet wird. Andererseits ist, wie ein Blick auf die Tabelle lehrt, ein bei der Filtration durch dünnporigere Agargallerte erreichbares Eliminieren von Ei- 11 nuadas, devido á alta temperatura ambiente | que impedia se evitasse a fluidificação da | membrana de gelatina durante a experien- | As pesquizas serão agora retomadas e | praticadas tambem com outras materias fil- | cia. trantes. Literatura 1) MARTIN. Journal of Physiol. Bd. XX, S. 364. 2) H. BECHHOLD. Die Gallertfiltration. Kol- loid-Zeitschrift, 1907, Bd. 2, S. 3 und 33. — Kolloidstudien mit der Filtrationsmetho- de. Zeitschr. f. physikal. Chemie. 1907, Bd. 60, S. 259 und 276. — Ultrafiltration. Biochem. Zeitschrift, 1907, S. 379. 3) J. DUCLAUX. Die Filtration kolloider Lo- sungen. Kolloid-Zeitschrift, 1908, Bd. 3, S. 126. (Zugleich enthaltend Literatur- angaben über die im Jahre 1904 und spater erschienenen Arbeiten von Bor- rel, Manca und Malfitano). 4) G. GIEMSA und VON PROWAZEK. Weitere Untersuchungen über sog. ultramikrosko- pische Infektionserreger. Zur Filtration des Hühnerpestvirus, Münch. med. Wo- chenschrift, 1908, Nr. 29. 5) S. v. PROWAZEK und H. DE BEAUREPAIRE ARAGÃO. Untersuchungen über die Va- | riola. Miinch. med. Wochenschr., 1908, Nr. 44, S. 2265. weiss auch mit einem Verlust einer annähernd äquivalenten Menge von Antitoxin verbunden. Bemerkenswert ist, dass bei der Filtration des Diphtherieserums eine nennenswerte Ad- sorption der Antikôrper durch das Filtermaterial nicht stattfindet, denn vergleicht man die im ursprünglichen unfiltrierten Serum enthaltenen Immunitätseinheiten mit dem der Konzentra- tionssera bezw. Filtrate unter Berücksichtigung der betreffenden Volumina, so findet man, dass der Verlust an Antikôrpern nur ein mini- maler ist. Es drängt sich nun die Frage auf, ob uns die Ultrafiltration überhaupt auf diesem Wege weiterbringen wird. Unserer Ansicht nach wäre es verfrüht, sie auf Grund dieser weni- gen Versuche beantworten zu wollen, vielmehr müssen erneute, von anderen Gesichtspunkten ausgehende Experimente weiteres lehren. So- viel aber lässt sich heute schon sagen: von einschneidender Bedeutung für die serothera- peutische Praxis diirfte die Ultrafiltration erst dann werden, wenn es durch sie gelingt, das fiir die Immunisierung nicht in Betracht kom- mende Serumeiweiss oder wenigstens den gróssten Teil desselben, von den Antikórpern zu trennen. Diese Idee liesse sich vielleicht durch Ausfindigmachen eines Filtermaterials* verwirklichen, welches sich einerseits durch grosse Adsorptionsfähigkeit für die Antikôrper auszeichnet, andererseits die Eigenschaft be- sitzt, spater wieder bei einer mässigen, die Immunkórper nicht schâdigenden Temperatur in Lósung gebracht werden zu kônnen. Von diesem Gedanken ausgehend, versuchten wir zunächst ungehärtete Gelatine als Filtrirmaterial zu verwenden. Leider aber mussten wir die begonnenen Versuche vorlaufig wieder ab- brechen, da es unmôglich war, bei der z. Zt. | hier herrschenden hohen Temperatur die Ge- latinemembran während der ganzen Dauer eines Filtrierprozesses vor Verfliissigung zu schiitzen. Die Versuche sollen jedoch spater wieder aufgenommen und auch auf anderes Filtermaterial ausgedehnt werden. Erephopsis auricincta Uma nova mutuca, da subfamilia: Pangoninae pelos Drs. Adolpho Lutz e Arthur Neiva. (Estampa 1) Erephopsis auricincta Eine neue Tabanidenart aus der Subfamilie: Pangoninae Dr. Adolpho Lutz und Dr. Arthur Neiva. (Tafel 1) Damos em seguida a descrição de uma nova Pangonina pertencente ao genero Ere- phopsis, de Rondani, acompanhada de figura em côres, bastante aumentada e que mostra bem as particularidades desta bela especie. (Esk A: Erephopsis auricincta n. sp. Tamanho geral (sem a tromba) 15—16 mm. Probocida de côr preta, com 6 mm. de comprimento; palpos pardo-ferrujineos; ante- nas com os dois articulos bazilares enegreci- | dos, o terceiro ferrujinozo, um pouco enegre- cido na baze e no apice; face castanho-escura, quazi sem brilho; fronte e vertice com fundo da mesma cor, o ultimo com pelos pretos curtos e ocelos distintos de brilho amarelado | escuro; olhos escuros, com pubecencia ene- grecida; barba castanho-escura de reflexos amarelados e arruivados; occiput com a mar- jem ocular prateada e o resto cinzento com pelos dourados curtos e finos. Torax, em cima enegrecido, com penujem escura de reflexos dourados e trez estrias -lonjitudinais escuras, mais distintas na metade anterior; entre os hombros e os encontros das azas ha pelos mais compridos e completamente escuros; em baixo os pelos têm a côr parecida á da barba; o escutelo é coberto de pelos aveludados, bastante compridos, negros no meio e mais castanhos nas partes laterais. Wir geben im Folgenden die Beschreibung einer neuen Pangonine, die in das Genus Erephopsis Rondani gehórt, zugleich mit einer ziemlich vergrósserten farbigen Figur, welche die Eigenthiimlichkeiten dieser hiibschen Art zeigt. (Taf. 1). Erephopsis auricincta n. sp. Durchschnittslânge (ohne Rüssel) 15—16 mm. Rüssel schwarz, 6 mm. lang; Palpen hell rostbraun; Antennen: die beiden Basalglieder schwärzlich, das dritte rostroth und nur an Basis und Spitze etwas schwärzlich; Unterge- sicht dunkelbraun und fast ohne Glanz; Stirn und Scheitel mit ebenso gefärbtem Grunde, der letztere mit schwarzen Härchen und deut- lichen, dunklen Ocellen mit gelblichem Glanze; Augen dunkel, schwärzlich behaart; Bart dun- kelbraun mit gelblichem und rôthlichem Schim- mer; Hinterkopf mit silberglänzendem Augen- rande, der Rest grau, mit feinen goldenen Här- chen. Thorax oben schwärzlich mit dunklem, goldschimmerndem Flaum und drei dunklen Längsstreifen, welche in der vorderen Halfte deutlicher sind; zwischen den Schultern und den Fliigelwurzeln sind die Haare länger und ganz dunkel; auf der Unterseite haben sie dieselbe Farbe, wie der Bart; das Schildchen ist mit ziemlich langen sammtartigen Haaren MEMORIAS DO INSTITUTO OSWALDO CRUZ Tomo | - 1909 - ESTAMPA | Abdomen, em cima, de fundo preto, mos- trando na marjem posterior de todos os seg- mentos pelos finos e brilhantes, 4 maneira de cintas de côr de ouro; estas, nos segmentos 2, 3, 4e 5, são bastante alargadas no meio e um pouco menos dos lados; em baixo as cintas são um pouco mais palidas e de lar- gura mais uniforme. Pernas: coxae e femora enegrecidos com pubecencia preta, o resto castanho-ferrujinozo bastante claro com pelos amarelados, curtos, sendo apenas a extremidade dos pés um pouco mais escura. Azas lijeiramente acinzentadas, mais ama- reladas na rejião da costa, as nervuras de um pardo ferrujinozo, mais declarado na parte amarelada. Primeira celula da marjem posterior e tambem à anal, fechadas um pouco antes da marjem; o ramo anterior da ner- vura forquilhada em angulo bastante acuzado e ás vezes com apendice brevissimo; balancins castanhos, com a parte apical do capitulo de côr mais clara. A descrição é fundada no exame de cinco femeas apanhadas em Barbacena (Minas Ge- raes) no mez de março 1907 pelo Dr. Belisa- rio Penna. 13 ——— besetzt, welche in der Mitte mehr schwarz und auf den Seiten mehr braun sind. Abdomen oben mit schwarzem Grunde, der Hinterrand der Segmente mit hellen Här- chen besetzt, welche goldfarbige Querbinden bilden, die an den Segmenten 2—5 in der Mitte stark und an den Rändern etwas weni- ger verbreitert sind; auf der Unterseite sind die Binden heller und von mehr gleichmässi- ger Breite. Beine an den Hüften und Schenkeln schwärzlich, mit schwarzem Flaum; der Rest ziemlich hell rostbraun, mit gelblichen Här- chen und nur an den Enden der Füsse etwas dunkler. Flügel leicht graulich, in der Costalregion mehr gelblich; die Adern rostbraun, in den gelben Partien mehr auffallend; erste Hinter- rands- und Analzelle etwas vor dem Rande geschlossen; der erste Ast der Gabelader mit deutlich ausgesprochenem Winkel und manch- mal mit einem ganz kurzen Anhängsel; Halte- ren braun, am Ende der Capitula etwas heller. Es liegen fünf weibliche Exemplare vor, welche von Dr. Belisario Penna im März 1907 in Barbacena (Minas Geraes) gesammelt wur- den. O sôro anti-pestozo pelo Dr. Figueiredo Vasconcellos Chefe de serviço no Instituto Le sérum anti-pesteux par Te Dr. Figueiredo Vasconcellos Chef de service à l’Institut — Em 1900 apareceu pela primeira vez a peste no continente americano, sendo Santos o primeiro porto do Brazil onde fez erupção. O governo brazileiro justamente alarmado por esse fato cojitou imediatamente de fundar um Instituto onde fosse preparado o sóro anti-pestozo, o que fez, entregando a sua di- reção tecnica ao dr. Oswaldo Gonçalves Cruz. Era a incumbencia muito ardua e espi- nhoza, pois que, ha pouco tempo apenas, ha- via sido iniciado o tratamento da peste pelo sôro especifico, de modo que nada havia ainda de precizo sobre o seu preparo. Com efeito, nessa epoca a literatura ba- cteriolojica pouco rejistrava a esse respeito: Borrel, Calmette e Yersin, que foram os pri- meiros que tentaram preparar animais pela inoculação de bacilos da peste, com o fim de obter um sóro especifico, nas publicações fei- tas nos Anaes do Instituto Pasteur, refe- riam-se apenas de modo geral aos proce- sos que empregaram. Assim, dizem que ino- cularam bacilos da peste sob a pele dos ani- -mais, mas como obtinham grande numero de abcessos rezolveram fazer a inoculação intra-venoza. Quando chegam á inoculação dos cavalos, para a obtenção de sóro tera- peutico, referem-se ao emprego de culturas do bacilo mortas pelo calor, não indicando, porém, as quantidades inoculadas. En 1900, la peste fit sa première appari- tion sur le continent américain. Santos fut le premier port du Brésil où elle se déclara. Justement alarmé, le gouvernement brési- lien eut aussitôt l’idée de créer un Institut où Pon préparat le sérum antipesteux. L'Institut fut fondé, et sa direction technique confiée au docteur Oswaldo Gonçalves Cruz. La mission était bien délicate et difficile. Le sérum spécifique commençait à peine à être employé pour le traitement de la peste, de sorte qu'il n'existait rien de précis sur ce point au sujet duquel la littérature bactériologique était d'une grande pauvreté. Les premiers qui es- sayèrent de se servir des animaux pour l'ino- culation des bacilles de la peste pour obténir un sérum spécifique ont été Borrel, Calmette et Yersin. Ils rapportent d'une façon géné- rale, en des articles publiés dans les Annales de l’Institut Pasteur, qu’ils inoculérent des bacilles de la peste sous la peau des ani- maux, mais comme il se produisait un grand nombre d’abcès, ils ont résolu faire l’inocula- tion intraveineuse. Quant ils arrivent à l’ino- culation des chevaux, pour obtenir le sérum thérapeutique, ils nous parlent de l'emploi de cultures de bacilles tués par la chaleur, sans toutefois spécifier les quantités inoculées. Après quelques essais, le docteur Oswaldo Cruz, forcé par les circonstances, adopta le Forçado pelas circumstancias e depois de alguns ensaios, o dr. Oswaldo Cruz firmou a seguinte tecnica, que durante muito tempo foi a uzada no Instituto, para o preparo dos cavalos que deveriam fornecer o sóro anti- pestozo. Uma garrafa de Roux de 20 cm. de com- primento por 11 cm. de largura, contendo geloze simples, apresentando, portanto, o meio nutritivo a superficie de 220 cm.?, é semeada com 1 ou 2cc de cultura em caldo de um bacilo da peste pouco virulento. Con- servada na temperatura ambiente e passa- das 48 horas a cultura dezenvolvida em su- perficie, verificada a sua pureza, é emulsio- nada em 16cc de agua fiziologica a 0.75 °/,. Recolhida a emulsão é ella esterilizada entre 65 a 680 durante 1 hora. Com esta emul- são esterilizada é que se começava o preparo dos cavalos, que deveriam fornecer o sôro anti-pestozo. Eram estes inoculados intrave- nozamente com 1, 2, 4, 8, 12 e 16cc dessa emulsão, variando o prazo, em geral de 20 a 30 dias, entre uma e outra das primeiras inoculações, e de um a 2 mezes nas ultimas, conforme a reação que aprezentava o animal. Este só é novamente inoculado depois de ter readquirido seu pezo primitivo. Inoculados os 16cc, isto é, toda a cultura dezenvolvida em uma garrafa, passava-se a fazer a inocu- lação de culturas vivas, utilizando-se ainda esse mesmo bacilo pouco virulento. Inocu- lados os 16cc de emulsão, destes bacilos eram injetados então germens muito viru- lentos. Nesta serie, porém, principiava-se pela inoculação de 4cc de emulsão, seguidas das de 8, 12 e 16cc. Só então é que o ani- mal considerado suficientemente imunizado começava a fornecer sôro anti-pestozo. Quer para os bacilos de pouca quer para os de muita virulencia, o modo de preparar a emulsão é sempre o mesmo que já foi des- crito, assim como é conservada a já referida série de dózes de inoculação. O bacilo da peste pouco virulento que empregamos é o mesmo que foi izolado pelo Dr. Oswaldo Cruz, em Santos, em 1900, quando alí foi comissionado pelo Governo Federal para determinar a especie morbida 15 procédé suivant — lequel fut longtemps em- ployé à l’Institut — pour le traitement des chevaux qui devaient fournir le sérum anti- pesteux. Une bouteille de Roux de 20 cm. de long sur 11 de large, contenant de la gélose sim- ple — le milieu nutritif présentant donc une superficie de 220 cm.? — est ensemencé avec 1 ou 2 cc. d'une culture en bouillon d'un bacille de la peste peu virulent. Conservée à la tem- perature ambiante, au bout de 48 heures, la culture s'est développée en surface; aprês en avoir vérifié la pureté, on l’émulsionne avec 16 cc. d’eau physiologique à 0,75º/. On re- cueille Pémulsion et on la stérilise pendant une heure entre 65 et 680. C'est avec cette émulsion stérilisée que l’on commençait le traitement des chevaux qui devaient fournir le sérum antipesteux: On leur faisait des in- oculations intraveineuses, en laissant général- ment un intervalle de 20 à 30 jours entre cha- cune des premières inoculations et d'un à deux mois, pour les derniêres, selon la réac- tion observée chez "animal, qui n’était inoculé de nouveau, qu'après avoir acquis son poids primitif. Les 16 cc. une fois inoculés (c'est à dire: toute la culture développée dans une bouteille) on passait à faire l’inoculation de bacilles vivants, en employant toujours ce même bacille peu virulent. On inoculait les 16, cc. d'émulsion de ces bacilles, après quoi Pon injectait alors des germes três virulents. Mais dans cette série, on commençait par l’in- oculation de 4 cc. de l’émulsion, en passant ensuite à 8, 12 et 16 cc. Ce n’est qu'alors que l’animal était considéré comme suffisa- ment immunisé et commençait à fournir du sérum antipesteux. Qu'il s'agisse de bacilles peu virulents ou très virulents, la façon de préparer "émulsion est toujours la même qui vient d’être exposée, bien comme la série de doses à inoculer. Le bacille de la peste peu virulent, que nous employons est le même qui a été isolé, en 1900 par le Dr. Oswaldo Cruz, à Santos, quand il y fut envoyé en commission par le Gouvernement Fédéral pour déterminer l’espè- ce morbide qui y régnait alors. On l’inocule tous les six mois dans l'organisme d'un co- 16 reinante. E” o bacilo passado de 6 em 6 mezes pelo organismo da cobaia, sendo ne- cessario fazer a inoculação intraperitoneal de 2 cc. de uma cultura em caldo, de 48 horas, para se obter a morte do animal. Os bacilos da peste de forte virulencia são inoculados mensalmente em ratos e co- baias. As nossas culturas da peste são con- servadas em geloze simples e na temperatura ambiente. Pela descrição do processo que acabo de fazer, é facil compreender que o tempo necessario para se obter um cavalo solida- mente imunizado, de modo a poder fornecer um bom sóro, é muito longo, não só pelo grande numero de inoculações necessarias, como tambem pelos acidentes que aparecem no decurso do processo imunizante, e que obrigam a distanciar, umas das outras, as inoculações. Foi por isso modificada a tecnica até então seguida, sendo completamente abolidas as inoculações de culturas mortas. Eis como procedemos agora: o titulo da emulsão empregada continúa o mesmo '/,,, assim tambem a série de dózes de inocula- ção, variando porém o numero dellas. O ani- mal recebe desde o início da imunização in- oculações de culturas vivas do bacilo de fraca virulencia, e somente as 3 primeiras dózes da série, isto é, 1, 2 e 4cc. da emulsão. Pas- sa-se imediatamente a fazer inoculações de culturas vivas dos bacilos de forte virulencia, com estes, então, procede-se á inoculação de toda a série. Quer com um quer com outro bacilo, as inoculações são sempre intraveno- zas. Confrontando-se os 2 metodos, vê-se que antigamente era necessario proceder-se a 16 inoculações (6 de cultura morta, 6 de cultura viva de fraca virulencia, e 4 de cultura viva de forte virulencia) para que o cavalo fosse considerado pronto a fornecer o sóro anti- pestozo, ao passo que hoje ha mister tão somente de O inoculações (3 de cultura viva, fraca virulencia e 6 de cultura viva de forte virulencia) para se obter identico rezultado. O exame dos 2 seguintes quadros mostra claramente o tempo que se ganha com o baye. Pour obtenir la mort de Panimal, il est nécessaire de faire l’inoculation intrapéri- tionale de 2 cc. d'une culture en bouillon, de 48 heures. Les bacilles de la peste de grande viru- lence, sont inoculés tous les mois à des rats et des cobayes. Nos cultures de peste sont conservées dans la gélose simple et à la tem- pérature du laboratoire. Par la discription que je viens de faire du procédé, on comprendra facilement qu'il faille un assez long temps pour obtenir un cheval solidement immunisé et qui puisse fournir un bon sérum. Cela est dû non seulement au grand nombre d'inoculations nécessaires, mais encore aux accidents qui surviennent au cours de l’opération immunisante et qui obligent à espacer les inoculations. Nous avons donc modifié les procédés employés jusqu'alors, en supprimant les inoculations de cultures mortes. Voici comme nous procédons aujourd’hui: Le titre de l’émulsion reste toujours le même, */,,, ainsi que la série de doses à in- oculer; ce qui varie, c’est le nombre d’inocu- lations. Dès le debut de l’immunisation, l’ani- mal reçoit des inoculations de cultures vivan- tes du bacille d’une faible virulence, et seu- lement les 3 premières doses, c’est à dire 1, 2 et 4 cc. de l’émulsion. On passe aussitôt à faire des inoculations de cultures vivantes des bacilles de forte virulence. Ceux-ci servent à l’inoculation de toute la série. Qu'il s'agisse de l’un ou de l’autre des bacilles, les inocu- lations sont toujours intraveineuses. En comparant les deux méthodes, on voit qu'il fallait autrefois procéder à 16 inoculations (6 de culture morte, 6 de culture vivante, de faible virulence et 4 de culture vivante, de forte viruience) pour que le cheval fût consi- déré prêt à fournir le sérum antipesteux, tan- dis qu'aujourd'hui il n’en faut plus que 9 (3 de culture vivante, de faible virulence et 6 de culture vivante, de forte virulence) pour arri- ver au même résultat. L’examen des deux tableaux suivants mon- tre clairemeut le temps gagné par l’emploi de notre méthode actuelle d'immunisation : 17 emprego do nosso atual metodo de imuni- zação : I PESTE MORTA Germen de fraca virulencia PESTE VIVA Germen de fraca virulencia PESTE VIVA Germen de forte virulencia ce Sec PESTE VIVA Germen de fraca virulencia Ace) Sec M2 cc) O ee: PESTE VIVA Germen de forte virulencia CTA 2icea Mec Sice Pico! Tojce Ha quatro anos que é este metodo uzado no preparo dos cavalos fornecedores de sôro anti-pestozo no nosso Instituto, e até hoje só temos a rejistrar um unico cazo de perda do animal. Os cavalos suportam-no per- feitamente, desde que haja prudencia e cui- dado com as inoculações. Infelizmente, nem sempre se pode seguir com regularidade o processo imunizante, inoculando-se umas apoz outras, as dózes estabelecidas na serie. Mui- tas vezes quando se procede á inoculação da dóze imediatamente superior á inoculada, os fenomenos que aprezenta o animal são de tal ordem que manda a prudencia cessar a inoculação, ainda em quantidade menor que a já injetada, para evitar, talvez, a morte do animal. PESTE MORTE Germe de faible virulence PESTE VIVANTE Germe de faible virulence PESTE VIVANTE Germe de forte virulence II PESTE VIVANTE Germe de faible virulence PESTE VaVANTE Germe de forte virulence q Voilà quatre ans que cette méthode est employé à notre Institut pour préparer les chevaux destinés à fournir le sérum antipes- teux, et jusqu’aujourd’hui nous avons à si- gnaler un seul cas de mort parmi eux. Ils s’en trouvent parfaitement bien pourvu que les inoculations soient faites avec soin et pru- dence. On ne peut malheuresement employer avec régularité le procédé immunisant, en in- oculant l’une après l’autre les doses détermi- nées dans la série. Et souvent, tandis que Pon procède à l’inoculation de la dose immé- diatement supérieure à celle qui vient d’être inoculée, les phenomènes que présente l’ani- mal sont tels que la prudence nous enjoint de cesser l’inoculation, même si la quantité inoculée est inférieure à la précedente, afin d'éviter la mort possible de l’animal. São imédiatas ou mediatas as reações que aprezenta o cavalo depois da inoculação. As imediatas são constituidas por dispnéa, mais ou menos intensa, tosse, contrações musculares, estado vertijinozo e suores. A dispnéa é a mais frequente das rea- ções, podendo variar em intensidade, não dependendo isto da quantidade de emulsão inoculada; pois que o mesmo animal pode aprezentar intensa dispnéa com pequena dóze, e quasi nula com dózes mais elevadas. Não tem tambem influencia o gráu de imuniza- ção, visto que um animal que já suportou 16 cc de emulsão, póde aprezentar uma dis- pnéa intensissima com dóze muito inferior a esta. A tosse acompanha quazi sempre a dis- pnéa; vem por acessos que se sucedem uns aos outros. As contrações musculares observam-se nos membros, principalmente nos posteriores. O animal contrae lentamente um dos mem- bros, vendo-se em relevo os musculos con- traidos, para depois distendel-o tambem va- garozamente. Estas contrações são alterna- das, levantando o cavallo, ora um, ora outro membro posterior. Não é raro observar-se contrações fibrilares nos musculos das coxas e de outras rejiões. O estado vertijinoso é tambem muito comum: o animal cambaleia, tenta firmar-se d'um lado para imediatamente apoz firmar-se do outro. A's vezes este estado não vae alem disso; em outros cazos, porém, progride de modo que, si se fizer o animal andar, a marcha se torna dificil, não levantando bem os pés e arrastando a parte anterior dos cas- cos. Si é obrigado a correr, os membros enrijam, batendo uns nos outros durante a corrida, lançando-se o corpo ora para um, ora para o outro lado. Este estado pode adquirir tal intensidade que o animal cae, debatendo-se por levantar-se, o que só con- segue com muito esforço. A's vezes pouco depois da inoculação o animal fica de cabeça baixa, os membros afastados para melhor se conservar em equi- librio, os flancos batem fortemente, intervin- 18 Les réactions que présente le cheval aprês Pinoculation sont immédiates ou médiates. Les immédiates sont les suivantes: dys- pnée, plus ou moins forte, toux, contractions musculaires, état vertigineux, sueur. La plus fréquente d'entre elles est la dys- pnée, dont l’intensité peut varier, ce qui ne dépend pas de la quantité d'émulsion inocu- lée, car "animal peut souffrir d'une dyspnée intense, avec une petite dose, ou d’une dys- pnée presque nulle, avec des doses plus for- tes. Le degré d'immunisation n'exerce pas non plus d'influence là-dessus, puisqu’un ani- mal qui a déjà supporté 16 cc. d'émulsion peut être attaqué d’une dyspnée très violente, avec une dose bien inférieure á celle-là. La toux accompagne presque toujours la dyspnée; elle vient par accès qui se succè- dent sans interruption. On observe les contractions musculaires dans les membres, surtout dans les membres postérieurs. L'animal contracte lentement un des membres — les muscles contractés se dessinent en relief — pour le détendre ensuite avec la même lenteur. Ces contractions sont alternés; le cheval soulève tantôt l’un tantôt l’autre des membres postérieurs. Il n’est pas rare d’observer des contractions fibrillaires dans les muscles des cuisses et d’autres régions. L'état vertigineux est aussi très commun: l'animal chancelle, cherche à s'affermir d'un côté pour s'appuyer de l’autre, aussitôt après. Quelquefois, les choses en restent là; mais en d’autres occasions cet état empire, de sorte que, si l’on oblige l’animal à avancer, la mar- che lui devient difficile: il ne lève pas les pat- tes et laisse trainer la partie antérieure des sabots. Si on le fait courir, ses membres dur- cissent; ils se cognent l’un contre l’autre pen- dant la course, avec des rejets du corps à droite et à gauche. Cet état peut arriver à un tel point d’intensité que "animal tombe, en se débattant pour tâcher de se relever, ce qu’il n'arrive à faire qu’au prix de grands efforts. Parfois, peu après, l’animal conserve la tête baissée; il écarte les pattes pour mieux garder l’équilibre, ses flancs halètent avec for- ce et le diaphragme intervient puissamment Les. 19 do poderozamente para a respiração o dia- fragma e aprezentam então uma forte crize de suor. as gotas de suor que se vão reunindo e caindo pelas partes em declive. Em pouco tempo o suor escorre por todo o corpo do animal e o chão, em baixo, mostra grande quantidade de liquido que d'elle cahiu. As reações mediatas são constituidas pela elevação de temperatura, perda de pezo, tu- mefação do escroto, e tardiamente as artrites e queda de pelos. A elevação de temperatura dá-se, em ge- ral, pouco depois da inoculação, podendo a | j SERA oe a | res, sinon jus’qua la normale, au moins jus- hipertermia atingir 1 a 2.0 acima da normal. Passadas 24 horas, porém, comumente é observada a queda, sinão á normal, ao me- nos ás suas proximidades. 2 Raro é o cavalo que, 24 horas depois da inoculação não tenha perdido pezo. Geral- mente a diminuição é pequena, de 6 a 10 kilos, porém, já observámos, que alguns aprezentavam uma diminuição de 20 a 30 quilos. A tumefação do escroto é reação não muito rara. Aumentado de volume, a bolsa se torna distendida, tensa e a pele luzidia. Os testiculos aumentam de volume. Na va- jinal não se revela a prezença de liquido. Comumente, 48 horas depois tudo desapa- rece voltando o escroto ao tamanho na- tural. As artrites manifestam-se, em geral tardia- mente. Localizam-se, geralmente, nas articu- lações dos membros, podendo porém, apare- cer em todas as outras articulações. Já ob- servámos um cavalo que aprezentava artrites, nas articulações da coluna vertebral, mas em outro as artrites apareceram não só nesse ponto como nas articulações de todos os membros. Nestes cazos os animaes se movem muito lentamente, sendo muito dificil volta- rem-se, só o podendo fazer quando ha es- paço amplo para uma longa curva. Vêm-se aparecer entre os pelos | As artrites são no começo acompanha- | das de elevação de temperatura, que se pro- | longa durante alguns dias. Concomitante- | mente ha grande perda de pezo, pois que o | pour la respiration. Il a alors un fort accès de transpiration. On voit poindre à l’extré- mité des poils les gouttes de sueur qui se rejoignent et coulent tout le long du corps. En peu de temps, l'animal est en nage et l’on peut voir sous lui le sol complètement trempé. Les réactions médiates se font remarquer par l'élévation de la température, la diminu- tion du poids, tuméfaction du scrotum, et, plus tard, l’arthrite et la perte des poils. La température s'élève, en général, peu | après l’inoculation; elle peut arriver à 1 ou 20 au dessus de la normale, mais elle tombe communément au bout de vingt-quatre heu- que dans son voisinage. Il est rare que, vingt-quatre heures après Pinoculation, un cheval n'ait pas perdu de son poids. La perte n’est généralement pas très gran- de: de 6 à 10 kilos. Nous en avons cepen- dant observé quelques uns qui accusaient une diminution de 20 à 30 kilos. La tuméfaction du scrotum est une réac- tion assez fréquente. L'accroissement de vo- lume produit une tension de la bourse, dont la peau devient luisante et tirée. Les testicu- les augmentent. L'examen ne rèlève pas la présence de liquide. Tout disparait d'ordinaire au bout de 48 heures, et le scrotum revient à ses proportions normales. Les arthrites ne se manifestent d'habitude que plus tard. Elles se localisent le plus sou- vent dans les articulations des membres, mais elles peuvent pourtant apparaître dans toutes les autres. Nous avons déjà observé un che- val qui ne présentait d’arthrites qu'aux arti- culations de la colonne vertébrale; mais chez un autre, les arthrites étaient apparues non seulement au même endroit mais encore aux articulations de tous les membres. En ce der- nier cas, les animaux se meuvent très lente- ment; ils ne peuvent se retourner qu'avec une grande difficulté, et seulement lorsque l’espace est assez large pour qu’ils puissent faire une grande courbe. La perte des poils accompa- gne souvent les arthrites. Celles-ci provoquent, au débout, une élé- vation de température qui se prolongue pen- animal pouco come. Conserva-se quazi sem- pre imovel, de cabeça baixa recuzando a alimentação. Desde, porém, que a tempera- tura cae e que o processo articular inflama- torio começa a regressar, volta o apetite e o estado do animal melhora, voltando elle rapi- damente ao seu primitivo estado. Muitas vezes as artrites são acompanha- das da queda dos pelos. Os fenomenos que aparecem logo apóz a inoculação cedem em geral muito rapida- mente, e a não ser que assumam propor- ções assustadoras, nada se deve fazer para combatel-os. Quando, porém, a dispnéa for muito intensa e o estado vertijinozo que em geral a acompanha, fôr grande, deve-se fazer o animal caminhar, e, até si possivel for, correr, com o que tudo cederá. Si apezar disso, o estado do cavalo não melhorar, se- rão lançados baldes de agua fria sobre a ca- beça do animal; si com isso ainda não fôr obtido o rezultado dezejado e continuarem os sintomas alarmantes e que o animal venha a cair, ficando prostrado, a frição de todo o torax com escovas grossas, derramando-se alcool sobre as partes fricionadas fará em breve reanimar o animal, cujo estado me- lhorará pouco a pouco, até o dezapareci- mento completo de todos esses sintomas. As manifestações tardias não reclamam intervenção alguma, cessando com o repouzo e o tempo. Dellas só tem importancia as artrites. Deve-se tomar cuidado extraor- dinario, com a nova inoculação que se ti- ver de fazer no animal que as tenha apre- zentado. Só deverá ser feita depois que o mesmo estiver completamente restabelecido, tendo readquirido o pezo primitivo. A dóze de inoculação não deve ser aumentada, e sim egual á que já tiver sido injetada. Assim procedendo, muito provavelmente, nada sof- rerá com a inoculação. No preparo do sóro anti-pestozo é de gran- de importancia o sequestro do animal durante o tempo em que perdura na circulação o ger- men da peste inoculado. E isto se torna principalmente questão capital nos paizes tro- picaes, como o nosso, em que ha grande numero de insetos sugadores. 20 dant plusieurs jours. Le poids de l’animal diminue aussi sensiblement, puisqu'il mange peu. Il reste presque toujours immobile, la tête basse, refusant toute nourriture. Mais, dès que la température s'abaisse et que le procéssus articulaire inflammatoire commence à diminuer l'appétit revient, l’état de "animal s'améliore et il recouvre bientôt sa vigueur première. Les phénomènes qu’on observe aussitôt après l’inoculation, disparaisent en général très vite, et sauf les cas où ils prennent un cara- ctère sérieux, on ne doit rien faire pour les combattre. Si cependant la dyspnée est très intense et l’état vertigineux, qui l'accompagne la plupart du temps, est vif, il faut faire mar- cher Panimal; le faire même courir, si pos- sible, et les symptomes cederont. Si malgré tout, l’état de l’animal ne se modifie pas, on lui jettera de l’eau sur la tête; si ce traite- ment ne produit pas d'effet, que les sympto- mes alarmants continuent à se manifester et que l’animal vienne à tomber et reste couché sur le sol, on le ranimera en lui frictionnant le thorax avec de grosses brosses et en ver- sant de [alcool sur les parties frictionnées. Il se remettra peu à peu, jusqu’à la dispari- tion totale de tous ces symptomes. Les manifestations qui ne se produisent qu’au bout d'un certain temps n'exigent au- cune intervention. Le temps et le repos se chargent de les faire cesser. Seules les arth- rites ont, alors une assez grande importance, et il faut prendre bien garde à la nouvelle inoculation faite à "animal qui en est attaqué. Elle ne devra être faite qu'aprês son complet rétablissement, lors'qu'il aura acquis son poids primitif. La dose à inoculer ne devra pas être augmentée; elle sera identique à la pré- cedente. En agissant ainsi, "animal n’aura très probablement rien à craindre de Pinocu- lation. Dans la préparation du sérum antipesteux, il convient — et c’est là un point capital — d'isoler "animal tous le temps que le germe de la peste inoculé circule en son corps. C’est là une chose de très grande importance, sur- tous dans les pays tropicaux, come le notre, où il existe un grand nombre d'insects suceurs. LES a ee Com o fim de determinar o prazo em que devia permanecer izolado o animal apoz a inoculação, fizemos, auxiliado pelo nosso com- panheiro de trabalho Antonio Cardoso Fontes, uma serie de experiencias com o fim de ve- rificar durante quanto tempo se mantinham vivos no sangue do cavalo os bacilos da peste inoculados. Nas nossas experiencias uzámos sempre da seguinte tecnica: inoculado o cavalo eram retirados, ao fim do tempo dezejado, da veia jugular oposta áquella em que fora feita a inoculação, certa quantidade de sangue que era imediatamente semeada em caldo. O sangue era colhido diretamente da veia, sendo esta puncionada pela agulha, montada em seringa comum, atravessando-se todas as ca- madas superpostas á veia. A rejião puncio- nada era previamente raspada á navalha, dez- infetada com solução de sublimado a */000, lavada em seguida com alcool absoluto e de- pois com eter. Com estes cuidados, ou obtinhamos cons- tantemente culturas puras, ou o meio se conservava esteril. Recolhiamos, geralmente, 5 cc. de sangue que eram semeiados em 100 cc. de caldo simples, mas nas colheitas feitas 24 horas depois da inoculação eram recolhi- dos 20 cc. de sangue os quais eram semea- dos em 500 cc. de caldo. Estes estudos foram feitos em cavalos que já estavam imunizados ou em via de imunização. Os seguintes quadros dão em minucia os rezultados obtidos: Afin de déterminer le temps pendant le- quel l’animal doit être isolé, aprés l’inocula- tion, nous avons fait, avec l’aide de notre confrère Antonio Cardoso Fontes, une série d’experiences en vue de vérifier pendant com- bien de temps les bacilles de la peste inocu- lés se conservent vivants dans le sang du chaval. Dans nos expériences, nous avons toujours procédé comme suit: Une fois le cheval inoculé et au bout du temps néces- saire, nous prelevyions de la veine jugulaire opposée à celle où l’inoculation avait été faite, une certaine quantité de sang qui était aussi- tôt ensemencé dans du bouillon. Le sang était directement recueilli de la veine que l’on ponctionnait au moyen d’une aiguille montée sur une seringue ordinaire, qui traversait tou- tes les couches de tissus situés au dessus de la veine. La région ponctionnée était d’abord rasée, puis désinfectée avec une solution de sublimé à ‘/,,59 et lavée avec de l’acool pur et, ensuite, de l’éther. Avec ces précautions, nous obtenions ré- gulièrement des cultures pures ou bien le mi- lieu se conservait stérile. Nous recueillions en général 5 cc. de sang que nous semions ensuite dans 100 cc. de bouillon simple; mais si le sang était prélevé dans les 24 heures qui suivaient l'opération, nous en obtenions 20 cc., que nous semions dans 500 cc. de bouillon. Ces expériences ont été faites sur des che- vaux qui étaient déjà immunisés ou en voie d'immunisation. Les tableaux suivants donnent une idée détaillée des résultats obtenus: 22 f - germes de faible virulence. Cheval 1 | F2 Virulence e récueilli | H.apres | Bouillon | Temp. Resultat 16 fice f 5ice 1 100 cc a. PA ee i 5 cc 5 100 cc + 8 cc É 5 cc 6 100 cc + » » » 7 » + » » 20 cc Pall 500 cc — 12 ce f See 14 100 cc a. » » » 15 » == » » » 1 6 » + 16 cc f 5 cc 22 100 cc +- » » » 24 » + » » » 26 » ARE + 4 cc E Hice 8 100 cc 39°.7 + » > » 10 > 39°.9 ae » » » 12 » 39º.9 + 5 cc F Sree 17 100 cc 39°.8 le » » » 19 » 39°.4 + » » » 21 » 39º.6 + » » 20 cc 24 500 cc 39º.6 = 8 cc F 5 cc 17 100 cc 37.8 + > > > 19 > 37.4 ave > > 20 cc 21 500 cc 37°.8 — » » » 24 » 38°.2 == 8 cc F Bice 20 100 cc 39°.5 — » » » DD) » 3825 = » » 20 cc 24 500 cc 38º.8 4- Legende: F - germes de forte virulence. + il y a eu de culture. S - sang. — il n’y a pas eu de culture. H - heures. Emulsion / 4 16 16 cc Cheval 2 Virulence | S.récueilli | H.aprês Bouillon | Temp. Resultat E | 20 cc | 24 | 500 cc 38.5 | He 23 Cheval 5 mi Virulence | S. récueilli | H. après Bouillon Temp. Resultat 16 12 cc F 5 cc 18 100 cc by bet + » » » 21 » a =. » » 20 cc 24 500 cc Hire — 12 cc nec 20 100 cc 40°.0 + » » » 22 » 40º.2 + » » 20 cc 24 500 cc 40°.0 + » » » 26 » 40º.0 + 16 cc E 5 cc 20 100 cc 38°.2 a » » » 22 » 38°.2 — » » 20 cc 24 500 cc 38°.4 + 16 cc E Sve 17 100 cc 39°.2 a » » » 19 » 38º.4 + » » » 21 » 38º.2 = » » | 20 cc 24 500 cc 38º.5 “+ Cheval 8 CITA Virulence | S. récueilli | H. après Resultat Temp. Resultat 16 14 cc E Bee 17 100 cc 39°.6 + » » » 19 » 38º.6 + » » » 21 » 382.0 + > » 20 cc 24 500 cc 390.2 — 16 cc F DICE 15 100 cc 39º.4 — » » » 17 » 38º.9 = » » » 19 » 39º.2 E » » 20 cc 24 500 cc 38°.4 = Cheval 9 Emulsion Virulence | S.récueilli | H.après | Bouillon Temp. Resultat the 40°.2 40°.0 40°.2 40°.0 39°.9 40°.6 38°.2 38°.0 39°.0 Mere pele let | 24 —— Cheval 11 eee Virulence | S. récueilli | H. après Bouillon Temp. Resultat 16 16 cc f 5 cc 20 100 cc — » » » 22 » = » » 20 cc 24 500 cc — 16 cc f Sec 9 100 cc + » » » 1 1 » + » » » | 13 » + Cheval 12 = aes Virulence | S. récueilli | H. après Bouillon Temp. Resultat 16 4cc f 5 cc 1 100 cc + » » » 2 » + 12 cc f Bree 3 100 cc al » » » 4 » + 16 cc f Bice 10 100 cc == > » » 11 » + » » » 12 » + 4 cc E DICE 10 100 cc E » » » 12 » + » » » 14 » + » » » 16 » ete + 8 cc 5 DIEG 15 100 cc 382.5 = » » » 17 » 38º.0 ee » » » 19 » 38º.0 =. » » 20 cc 24 500 cc 3841] = 121CC F (ge 17 100 cc STO = » » » 19 » 37º.6 = » » 20'ec- |? DA 500 cc 37°.6 = 12 cc E bee 18 100 cc 39°.2 ts » » » 20 » 39º.0 + » » 20 cc 24 500 cc 39.2 e » » » 48 » 40°.2 + 25 Cheval 14 Emulsion 1) 16 Virulence | S. récueilli | H. après Bouillon Temp. Resultat ¡AR A A A A A +++ 8 cc f 100 cc + » » » — 10 cc f 100 cc 40°.2 + » » » 40º.2 + » » » 40°.2 — » » » 40º.6 — Cheval 14 a ines Virulence | S. récueilli | H.aprés Resultat 16 ice f 5 cc 17 100 cc 39°.8 = » » » 19 » 392.0 = » » » 21 » 39º.6 = » » 20 cc 24 500 cc 40°.0 = 16 cc f 5 cc 18 100 cc 399,9 = » » » 20 » 39°.4 i » » » 22 » 40º.2 = » » 20 cc 24 500 cc 402.2 == 4cc F 5 cc 6 100 cc 40°.0 = » » » 8 » 39º.0 o » » » 1 0 » 38º.4 = » » 20 cc 24 500 cc 37°.8 = 4 cc E CE 5 100 cc 40º.2 se » >» » Ú » 39º.6 + » » » 9 » : 39°.2 + » » 20 cc 24 500 cc 382.5 a 8 cc F 5 cc 16 100 cc 39º.6 + » » » 18 » 38.8 at > » 20 cc 20 500 cc 40°.0 e 26 Resultat des ensemencements effectués 24 hs. après l’inoculation - Chéval ET Virulence |S. récueilli| Bouillon Temp. Résultat RESUME 16 === Ê 14 4 cc F $ 2Dicc | ’500€c1 3728 dE Jusqu'à 10 cc 14 x É > à 381.5 E: cult. aa 1 5 cc F 20cc | 500cc | 39.6 + | Tau d. normale { SEUL MM 1 8 cc » » » 389.2 = it 0 1 » » » » 38º.8 + T.normale .. A se ETR 4 1 > f See | V100 cc: |) A: — See a 12 8 cc F 5 ce 100 cc 38°.1 = De 10 à 16 cc 9 10 cc F Mec. DOU Lc [+ 405.6 + cult 3 5 12 cc F Bee; | 100€c (3... — |Taud. normale À stew... ao 5 » » » » 40º.0 SE , 12 Piece E 20 cc 500 cc SEO, — M notmale sy... a cult, . -. 0 12 a a E E 3902 ES steril. . . 1 14 12 cc f 20 cc 500 cc 40°.0 = De 16 cc 8 14 cc E 20ice | 500'Ec | 301.2 = cult. i. 4 2 16 cc F 20cc | 500cc | 3825 + | T.au d. normale { Steril: em 5 16 cc F 20 cc 500 cc 38°.4 ar f cult 3 5 » » » » 38º.5 + T.normale .. A Es Al de 1 8 16 cc F 20cc | 500cc | 38%4 = SEs 11 16 cc f 20 cc 500 cc edo — 14 16 cc f 20 cc 500 cc 402,2 + Legende: F - germes de forte virulence. f - germes de faible virulence. O caldo que servia para a sementeira era contido em matrazes de fundo chato, de modo que o sangue semeado se depozitava em ca- mada delgada sobre o fundo. Quando havia dezenvolvimento de cultura, as colonias apre- zentavam-se de dois modos: ou apareciam como pontos brancos, em fundo vermelho, cons- tituido pelo sangue, e que iam aumentando pouco a pouco, tendo em torno uma zona enegrecida, ou ficavam suspensas no meio da massa liquida. Nestes condições, as colonias ficavam suspensas, como pontos brancos arre- dondados. As colonias eram sempre transplantadas para geloze. Dellas eram feitos dois prepara- dos, córando-se um pela tionina e outro pelo metodo de Gram. Com a cultura obtida eram “inoculados ratos e cobaias. Eram assim iden- tificados os germens obtidos nas culturas. Os bacilos obtidos nas culturas conserva- vam a mesma virulencia que os inoculados. Dos nossos estudos tiramos as seguintes conclusões : — il n'y a pas eu de culture. + il y a eu de culture. S - sang. Le bouillon qui servait à l’ensemencement était contenu dans des fioles à fond plat, de sorte que le sang semé se déposait au fond, en couche mince. Lorsqu'il y avait un déve- loppement de culture, les colonies se présen- taient sous deux aspects: tantôt elles appa- raissaient comme un point blanc sur le fond rouge du sang; ce point augmentait peu à peu avec, tout autour, une région noirâtre, tantôt elles restaient suspendues au sein de la masse liquide. En se dernier cas, elles apparaissaient comme des points blancs ar- rondis. Les colonies étaient toujours repiquées dans de la gélose. On en faisait deux pré- parations, en en colorant une avec de la thio- nine et l’autre par la méthode de Gram. La culture obtenue servait à inoculer des rats et des cobayes. On identifiait ainsi les germes obtenus dans les cultures. Les bacilles obtenus dans les cultures con- servaient la même virulence que les bacilles inoculés. 27 Em relação 4 permanencia do bacilo da peste no sangue do cavalo inoculado é indif- ferente o fator dóze, pois que, muitas vezes, apezar da inoculação de pequena quantidade os germens perzistem vivos durante muito tempo, emquanto que, apoz a inoculação de dózes maiores dezaparecem em prazo relati- vamente curto. A persistencia durante 24 horas é muito comum. A temperatura do animal não dá indicação exata da existencia ou não de bacilos da peste no sangue. Animais cuja temperatura era normal 24 horas depois da inoculação, ainda aprezenta- vam em 20 cc. de sangue germens cultivaveis. Animais cuja temperatura ainda era ele- vada 24 horas depois da inoculação, não mais aprezentavam em 20 cc. de sangue germens cultivaveis. Na maioria das vezes, porém, desde que a temperatura esteja normal não ha mais ger- mens cultivaveis. E' pequeno o prazo de 24 horas para que seja retirado do izolamento em que se acha o cavalo que tiver sido inoculado com ba- cilos da peste. Passadas 48 horas depois da inoculação, desde que a temperatura do cavalo seja nor- mal, não ha mais bacilos da peste vivos no sangue do animal inoculado. | Nos études nous ont amenés aux conclu- sions suivantes: Au point de vue de la permanence du bacille de la peste dans le sang du cheval inoculé, le facteur dose est indifférent, car, souvent, malgré l'inoculation d’une faible quantité, les germes restent longtemps en vie, au lieu que, après l’inoculation de doses plus fortes, ils disparaissaient dans un délai rela- tivement court. La persistance pendant 24 heures est trés commune. La température de l’animal ne révèle pas exactement s’il existe ou non des bacilles de la peste. Des animaux dont la température etait nor- male 24 heures après l’inoculation présentaient encore, dans 20cc. de sang, des germes cul- tivables. Des animaux dont la température etait en- core haute 24 heures après l’inoculation ne présentaient plus, dans 20 cc. de sang de ger- mes cultivables. Toutefois, dans la plupart des cas, dés que la température etait normale, il n’y avait plus de germes cultivables. Le délai de 24 heures est court pour re- tirer de l'isolement un cheval qui aura ‘été inoculé avec des bacilles de la peste. 48 heures après l’inoculation, dès que la température du cheval est normale, il n’y a plus de bacilles de la peste dans le sang de l'animal inoculé. Contribuições para o conhecimento da fauna indijena de Tabanidas pelos Drs. Adolpho Lutz e A. Neiva. Beitrâge zur Kentniss der einheimischen Tabanidenfauna von Dr. Adolpho Lutz e Dr. A. Neiva. No Instituto de Manguinhos existe uma coleção de Tabánidas que pela sua maior parte consiste de especies apanhadas no Xe- rém por um de nós e pelo dr. Ruy Ladislão. Contem assim principalmente fórmas dos ar- rabaldes do Rio de Janeiro das quais mais abaixo se dará uma lista. Quazi todas estas especies foram já encontradas em outros lu- gares onde as condições são semelhantes. Como mais raros póde-se mencionar a Dia- tomineura exeuns Walker e o Tabanus apha- nopterus Wied., dos quais conhecemos a pri- meira de Petropolis e o segundo dos arra- baldes de S. Paulo. O aparecimento do Tabanus importunus Wied. no territorio do Rio de Janeiro tem interesse especial por- que esta especie, comum ao Norte (Norte de Goyaz, Maranhão e Pará), parece encontrar aqui os limites meridionais do seu territorio; o mesmo se póde prezumir do Tabanus mar- ginatus Macq. (macroceratus Bigot), forma quazi esquecida, que se não encontra nos muzeus europeus. Foram apanhados trez exemplares em Xerém nos mezes de Fevereiro, Março e Abril. (Recentemente obtivemos 3 femeas desta especie de Ubatuba e de Sabaúna no Estado de S. Paulo e de Itaguahy no Estado do Rio de Janeiro.) Na coleção acham-se tambem umas mu- tucas colhidas em Barbacena (Minas Geraes) In dem «Instituto de Manguinhos » befin- det sich eine Sammlung von Tabaniden, die zum grósseren Teile in Xerém von einem von uns und Dr. Ruy Ladisláo zusammengebracht wurde. Dieselbe enthält demgemäss haupt- sáchlich Formen aus der Umgegend von Rio, von denen weiter unten ein Verzeichniss ge- geben werden soll. Es handelt sich fast durch- wegs um Arten, die auch anderswo unter ähn- lichen Verhältnissen beobachtet worden sind. Als etwas seltener wären Diatomineura exeuns Walker und Tabanus aphanopterus Wied. an- zuführen, erstere uns schon von Petropolis, letztere aus der Umgegend von S. Paulo be- kannt. Besonders interessant ist aber das Vor- kommen von Tabanus importunus Wied. im Gebiete von Rio de Janeiro, der zwar im Norden (Nord-Goyaz, Maranhão und Pará) gemein ist, hier aber bereits an der südli- chen Grenze seiner Verbreitung angelangt sein diirfte. Dasselbe gilt auch von Tabanus mar- ginatus Macq. (macroceratus Bigot), einer ganz verschollenen Form, die in europäischen Mu- seen kaum zu finden ist. Es wurden in Xe- rém drei Exemplare in den Monaten Februar, März und April erbeutet. (Neuerdings erhiel- ten wir drei Weibchen dieser Art von Ubatuba und Sabaúna im Staat S. Paulo und Itaguahy im Staat Rio de Janeiro.) In der Sammlung befinden sich ausserdem pelo dr. Belisario Penna, entre as quais ha | duas especies novas de Erephopsis (Pangoni- nae) que descreveremos com os nomes de auricincta e nubiapex. Ha pouco tempo a coleção recebeu uma contribuição importante constituida por cerca de 200 Tabánidas, colecionados pelos drs. Fernando Soledade e Mauricio de Abreu no Estado de Minas, entre Theophilo Ottoni e as marjens do Rio Doce. E” esta zona co- berta de mata virgem continua e a sua al- tura acima do nivel do mar varia de 160 a 300 metros; em relaçäo á fauna de dipteros | póde ser considerada terreno ainda completa- mente inexplorado. Podia-se prever o aparecimento de espe- cies novas porque a zona é situada bastante para o norte do Rio de Janeiro, cuja fauna, assim como a do Amazonas, é das mais co- nhecidas. Desta ultima havia que esperar já algumas especies; de outro lado, podia-se contar com outras, anteriormente descritas do Brazil sem mais indicaçäo e que depois náo foram mais encontradas, e principalmente com umas especies inteiramente novas, visto que entre as poucas mutucas procedentes do mesmo estado já achamos varias novidades. Esta esperança se realizou; encontrámos de especies novas uma Erephopsis, uma Esen- beckia e algumas especies de Tabanus maio- res e menores, e finalmente mutucas que já tinhamos do Pará e de outros lugares, mas que não haviam sido descritas ainda. Mais abaixo daremos um catalogo das especies. Finalmente o Instituto tambem recebeu al- gumas mutucas do Estado de Matto Grosso trazidas pelo farmaceutico Cesar Diogo Filho. Ao lado de algumas Lepidoselaga lepidota Wied. e de dois exemplares de especie vi- zinha ao Tabanus comitans Wied., foi en- contrado um Diachlorus que não combina com qualquer das especies descritas como Diachlo- rus, mas sim com o Chrysops bipunctatus Wied. Damos aqui a lista dos Tabánidas cole- cionados no Estado do Espirito Santo. Os exemplares com poucas exceções eram bas- tante, alguns até muito bem conservados; eram todos femeas. 29 einige von Dr. Belisario Penna in Barbacena (Minas Geraes) gesammelte Tabaniden und darunter zwei neue Erephopsisarten (Pangoni- nae), die wir als E. auricincta und nubiapex beschreiben werden. Vor Kurzem erhielt die Sammlung einen wichtigen Beitrag in der Form von circa 200 Tabaniden, welche von den Drs. Fernando Soledade und Mauricio de Abreu im Staate Espirito Santo, zwischen Theophilo Ottoni und dem Rio Doce gesammelt wurden. Diese Zone ist von zusammenhângendem Urwald bedeckt und wechselt in ihrer Hóhe über dem Meeresspiegel zwischen 160 und 300 Meter; in Beziehung auf ihre Dipterenfauna kann sie als vollig unerforschtes Terrain gelten. Man konnte voraussehen, dass neue Arten auftreten würden, da diese Zone ziemlich nórd- lich von Rio de Janeiro liegt, dessen Fauna, neben der des Amazonengebietes, am besten bekannt ist. Aus letzterem liess sich eine An- zahl von Arten erwarten, aber andererseits konnte man auch auf solche hoffen, die ohne Ortsangabe friiher aus Brasilien beschrieben und seither nicht mehr gefunden wurden, ganz besonders aber auch auf ganz neue Arten, da unter den wenigen, im selben Staate gesam- melten Tabaniden verschiedene Novitäten vor- kommen. Diese Erwartung hat sich erfiillt; wir fanden von neuen Arten eine Erephopsis, eine Esenbeckia und einige gróssere und klei- nere Tabanusarten, ausserdem auch Arten, die wir von Para und anderen Orten besassen, die aber noch nicht beschrieben sind. Weiter unten geben wir einen Katalog der Arten. Endlich erhielt das Institut auch einige vom Apotheker Cesar Diogo Filho mitgebrachte Bremsen aus dem Staate Matto Grosso. Ne- ben einigen Lepidoselaga lepidota Wied. und zwei Exemplaren einer dem 7. comitans Wied. nahestehenden Arten fand sich auch ein Dia- chlorus, der mit keiner der beschriebenen Ar- ten übereinstimmte, wohl aber mit dem Chry- sops bipunctatus Wied. Wir geben hier die Liste der im Staate Espirito Santo gesammelten Tabaniden; die Exemplare waren mit wenigen Ausnahmen genügend, teilweise sogar sehr gut erhalten. Es waren lauter Weibchen. Lista das especies de Tabánidas colecionados no Estado de Espirito Santo : 1. Lepidoselaga lepidota Wied.. 34 2. Tabanus miles Wied. 32 É » macroceratus Bigot. . 21 4. Esenbeckia neglecta n. sp. . 15 5. Tabanus modestus Wied. . 11 6. Diachlorus bivittatus Fabr. 11 7. Tabanus taeniotes Wied. 8 8 Dichelacera alcicornis Wied. . 6 9. Tabanus fuscus Wied. . 6 10. Dichelacera januarii Wied. 5 11. Tabanus quadripunctatus Fabr.. 5 12 » vestitus Wied. . 5 13. nigristrigma n. Sp. 5 14. leucaspis Wied. 4 15. » guttipennis Wied.. 3 16. » subniger n. sp.. » 3 17. Erephopsis soledadei n. sp. 3 18. Tabanus unicolor Wied. 2 19. » Scriplipennis n. Sp. 2 20. Erephopsis sorbens Wied. 2 21. Chrysops laetus Wied.. 2 22. Acanthocera longicornis Fabr. . 2 23. Tabanus triangulum Wied. 2 24. Esenbeckia bahiana Bigot. 1 25. Erephopsis tabanipennis Macq.. 1 26. Tabanus imitator n. sp. 1 Di aurora Macq. 1 28. sorbillans Wied. 1 29. mexicanus L. 1 30. fuscipennis Wied. . 1 91: cinereus Wied.. Ê 32. anonymus n. sp. 1 33 Chivers costatus Fabr. 1 34. molestus Wied. 1 35. Tabanus limpidapex Wied. meets | Total "201 Lepidoselaga lepidota Wied. é especie co- mum nas partes mais quentes do Brazil, mór- mente nos Estados situados para o nórte do tropico. O mesmo se póde dizer do Ta- “ banus modestus, laetus, achando-se o 7. leucaspis na mesma zona, porém mais raramente; um de nós en- controu todas estas especies no Estado de S. Paulo, como no do Pará. O T. unico- lor tem a mesma distribuição e parece tor- T. triangulum e Chrysops | Verzeichniss der im Staate Espirito Santo gesammelten Tabaniden : Lepidoselaga lepidota Wied.. 34 Tabanus miles Wied. 32 » mocroceratus Bigot. . 21 Esenbeckia neglecta n. sp. . Tabanus modestus Wied.. Diachlorus bivittatus Fabr. Tabanus taeniotes Wied. . Dichelacera alcicornis Wied. . Tabanus fuscus Wied. . Dichelacera januarii Wied. Tabanus quadripunctatus Fabr. . vestitus Wied. . nigristigma n. sp. leucaspis Wied. » guttipennis Wied.. » subniger n. Sp. . à Erephopsis soledadei n. sp. Tabanus unicolor Wied. » Scriptipennis n. sp. ed jp pudo po joo po nt dt ed E A ee A E NS — do dd 20. Erephopsis sorbens Wied. 21. Chrysops laetus Wied.. 22. Acanthocera longicornis Fabr. 23. Tabanus triangulum Wied. 24. Esenbeckia bahiana Bigot. 25. Erephopsis tabanipennis Maca. . 26. Tabanus imitator n. sp. 2 » aurora Macq. 28. sorbillans Wied. 29. mexicanus L. 30. » fuscipennis Wied. . 31. » cinereus Wied.. aan » anonymus n. sp. 33. Chrysops costatus Fabr. 34. » molestus Wied. 35. Tabanus limpidapex Wied. Total 201 Lepidoselaga lepidota Wied. ist eine in den wärmeren Teilen Brasiliens, besonders in den nôrdlich vom Wendekreis gelegenen Staaten, gemeine Art. Dasselbe kann man von Taba- nus modestus, T. triangulum und Chrysops lae- tus sagen, wahrend Tabanus leucaspis eben daselbst, aber seltener vorkommt. Einer von uns fand diese Arten sowohl im Staate S. Paulo, als in demjenigen von Pará. Der Ta- banus unicolor hat dieselbe Verbreitung und 31 nar-se mais frequente em direçäo ao Norte, mas como elle prefere o crepusculo (e isto acontece tambem com o 7. mexicanus), é só possivel apanhal-o em certas horas. 7. mexi- canus, T. quadripuntactus e C. costatus têm distribuição ainda mais vasta e são especies comuns. O interesse principal cabe ás especies que até hoje só conhecemos dos Estados de S. Paulo e Rio de Janeiro e dos lugares mais vizinhos como o 7. taeniotes, Dichelacera alci- cornis, D. januarii, T. guttipennis, Erephopsis tabanipennis, T. aurora, T. fuscipennis, Ere- phopsis sorbens de um lado e aquelles do outro lado que só eram conhecidos do Nórte, como o 7. vestitus Wied. e o T. cinereus e Esenbeckia bahiana, descritos de exemplares colhidos na Bahia. O Diachlorus bivittatus até hoje só se conhecia dos arrabaldes do Rio, emquanto que o 7. fuscipennis e T, limpida- pex se encontram, tanto aqui como nas serras de S. Paulo. Restam ainda algumas especies que pare- cem ter o principal centro de distribuição no Estado de Minas e entre ellas algumas no- vas. Conhecemos o 7. miles de Petropolis e do Estado de Goyaz; o T. macroceratus até ha pouco só se conhecia do Xerém, onde todavia é raro. O grande numero de exem- plares (21) existentes na coleção mostra que é frequente naquella zona. Na mesma se en- contra outra especie semelhante, porém nova, o T, nigristigma. Outras especies novas são Esenbeckia neglecta, que lembra a Esenbeckia fasciata, uma Erephopsis (soledadei), que se parece com a nigricans n. sp. do Estado de Espirito Santo; finalmente algumas especies menores em parte vizinhas ao 7. feniotes. Lista dos tabánidas colecionados no Xerém de Fevereiro 1907 até Fevereiro 1908. (Verzeichniss der in Xerém vom Februar 1907 bis Februar 1908 gesammelten Arten.) 1. Erephopsis sorbens Wied. 2: winthemi Wied. 3. » leucopogon Wied. | scheint nach dem Norden zu immer haufiger zu werden; weil er aber, ebenso wie Tabanus mexicanus, die Dammerung liebt, wird er ge- wohnlich nur zu bestimmten Stunden gefangen. T. mexicanus, T. quadripunctatus und CA. cos- tatus haben ein noch weiteres Verbreitungs- gebiet und sind gemeine Arten. Das Hauptinteresse liegt in solchen Arten, welche wir bisher nur aus den Staaten Sao Paulo und Rio de Janeiro oder deren näch- sten Nachbarschaft kannten, wie 7. faeniotes, Dichelacera alcicornis, D. januarii, T. guttipen- nis, Erephopsis tabanipennis, T. aurora, T. fus- cipennis, Erephopsis sorbens einerseits und an- dererseits denjenigen, die nur ganz aus dem Norden bekannt waren, wie 7. vestitus Wied. und den aus Bahia beschriebenen 7. cine- reus und Esenbeckia bahiana. Diachlorus bi- vittatus war bisher nur aus der Gegend von Rio bekannt, wahrend 7, fuscipennis und T. limpidapex ebendaselbst und in den Bergket- ten von S. Paulo vorkommen. Es bleiben noch einige Arten, die in Mi- nas ihr Hauptverbreitungscentrum zu haben scheinen, worunter auch einige neue. 7. mi- les kennen wir von Petropolis und dem Staate Goyaz, wahrend fiir 7. macroceratus bis vor kurzem nur Xerém (Staat Rio) als Fundort bekannt war, woselbst er aber selten ist. Da- gegen ersieht man aus der grossen Zahl der Exemplare (21) der Sammlung, dass er in je- ner Zone häufig vorkommt. Daselbst findet sich noch eine ähnliche, aber neue Art, 7. nigristigma. Andere neue Arten sind Esen- beckia neglecta, die an E. fasciata erinnert; eine Erephopsis (soledadei), die der nigricans n. sp. aus Espirito Santo ähnlich sieht; end- lich kleine Arten, die zum Teil dem 7. fae- niotes nahestehen. . Bombylopsis (n. gen.) nitens Bigot. . Diatomineura tabanipennis Macq. : » exeuns Walker. . Esenbeckia fuscipennis Wied. (Typus et var.) . Chrysops costatus Fabr. » leucospilus Wied. » laetus Wied. OS © © I Oo ou A — 32 11. Diachlorus bivittatus Fabr. 12. Lepidoselaga lepidota Wied. 13. Dichelacera alcicornis Wied. 14. » januarii Wied. 15: » flava Wied. 16. » immaculata Macq. TE » fuscipennis Macq. 18. Tabanus macrodonta Macq. 19. » aurora Macq. 20. » impressus Wied. 21: » cinerarius Wied. 22: » triangulum Wied. 23. » modestus Wied. 24. » trivittatus Fabr. 2% » trilineatus Latr. 26. » obsoletus Wied. 27. » planiventris Wied. 28. » litigiosus Walker 29. » quadripunctatus Fabr. 30. » maculipennis Macq. ai; » punctipennis Macq. 1% » mexicanus L. 33: leucaspis Wied. 34. » marginatus Macq. 35. aphanopterus Wied. 36. fuscus Wied. Acrecentamos mais trez especies achadas mais tarde entre o material colhido em Xerém: In dem in Xerém gesammelten Material wurden noch nachtráglich folgende drei Arten aufgefunden : 37. Diachlorus distinctus Lutz. 38. Stibasoma thiotaenia Wied. 39. Tabanus scythropus Wied. Lista de outros Tabänidas da coleçäo de Manguinhos encontrados no litoral do Rio de Janeiro. (Verzeichniss anderer Tabaniden der Sammlung von Manguinhos, welche im Küsten- gebiet von Rio de Janeiro vorkommen.) 1. Erephopsis fulvithorax Wied. 2 venosa Wied. 3. Erephopsis nigripennis Guérin 4. Acanthocera longicornis Macq. 5 6 4 aus » . Tabanus viridiventris Wied. importunus Wied. comitans Wied. » » Lista de outros Tabánidas da coleção de Manguinhos colecionados no Estado de Minas. (Verzeichniss der andern im Staat Minas gesammelten Tabaniden aus der Sammlung in Manguinhos.) . Erephopsis auricincta n. sp., Barbacena. » nubiapex n. sp., Barbacena. winthemi Wied., Juiz de Fóra. sorbens Wied. f xanthopogon Macq. . Bombylopsis nov. gen. analis Fabr. (?) Barbacena. il » nov. gen. leonina n.sp., Barbacena. 8. Esenbeckia ferruginea Macq., Bicudos. 9. Chrysops fusciapex n. sp. Barbacena. » 1 2 as 4. 5 6 10. » laetus Wied., Barbacena. ai: » molestus Wied., Barbacena. 12. » costatus Fabr., Juiz de Fora. 13: » Selasoma tibiale Wied., Lassance. 14. Tabanus aurora Macq. 15: » monochroma Wied., Barbacena. 16. » fuscipennis Wied., Barbacena. VES » leucaspis Wied., Bicudos. 18. >» punctipennis Macq., Juiz de Fora. As novas denominaçôes de generos e especies náo escritas em italico já foram anteriormente estabelecidas por um de nós (Lutz). Die nicht in Cursiv gedruckten neuen Genus- und Speciesnamen wurden schon früher von einem von uns (Lutz) aufgestellt. Sobre a Ameeba diplomitotica n. sp. Contribuição para o estudo da divizão nuclear nas amebas pelo Dr. H. de Beaurepaire Aragão, Assistente do Instituto (Estampa 2) Ueber eine neue Amoebenart, Amoeba diplomitotica. Beitrag zum Studium der Kernteilung bei den Amoeben von Dr. H. de Beaurepaire Aragáo, Assistenten am Institut (Tafel 2) Entre as diferentes amebas de agua doce que, nestes ultimos tempos, tivemos ocaziáo de observar no Instituto, uma se nos deparou, com um processo de divizáo bastante curiozo que procurámos observar por menor, sem es- quecer tambem outras questóes referentes á sua morfologia e biolojia. Aprezentamos, a seguir, o rezultado de nossas pesquizas sobre | | stehend die Resultate unserer einschlágigen A Ameba diplomitotica prolifera muito bem, | o assunto. em geral, tanto nas cubas de cultura assim como nos meios artificiais liquidos ou solidos; nestes, porem, sua vejetacáo, embora abun- dante náo dá logar ao aparecimento de for- | mas táo dezenvolvidas e de estrutura táo nitida como nos meios liquidos, além de que o enquistamento, muito mais precoce, apressa tambem as fazes de vejetacáo da ameba, im- | pedindo a boa observaçäo dellas. Nas infuzôes vejetais, principalmente na- quellas em que a prezenca de paramecios diminue a quantidade de bacterios, em certa proporcáo, é que a ameba encontra as me- lhores condições de proliferação. Desde que em uma cultura as amebas | proliferam em abundancia, convem observal- as seguidamente, quer a fresco, quer em pre- Unter den verschiedenen Siisswasseramoe- ben, welche wir in letzter Zeit in diesem In- stitute zu beobachten Gelegenheit hatten, kam uns eine vor, deren Teilungsprozess ziemlich merkwürdig ist, weshalb wir ihn eingehend zu beobachten versuchten, wobei wir auch die anderen Fragen der Morphologie und Biologie nicht ausser Acht liessen. Wir geben nach- Untersuchungen : Die Amoeba diplomitotica vermehrt sich im Allgemeinen sehr gut, sowohl in den Kultur- gläsern, als in den verschiedentlichen künst- lichen, flüssigen und festen Nährmedien. Auf letzteren giebt sie jedoch, trotz reichlichen Wachsthums, keine so deutlichen Entwick- lungs- und Strukturformen, als in flüssigen Kulturmedien, abgesehen davon, dass die viel frühzeitigere Incystierung auch die Vegetations- formen der Amoeben beschleunigt und so eine gute Beobachtung derselben hindert. Nur in vegetabilischen Infusionen, beson- ders solchen, bei welchen die Gegenwart von Paramaecien die Bacterienmengen einigermas- sen beschrânkt, findet die Amoebe die giin- stigsten Existenzbedingungen. Sobald sich in einer Kultur die Amoeben reichlich vermeh- 34 parados fixados e córados, para que se possa surpreender as fazes interessantes do seu ci- clo e, principalmente aquellas que se referem á divizão nuclear. A tecnica mais reco- mendavel para a confecção de preparações fixadas e vantajozas ao estudo é a de se fazerem preparados totais sobre laminula e o emprego do processo humido de Schaudinn, seguido de coloração pelo metodo de Hei- denhain com a hematoxilina ferrea. Morfolojia e biolojia: A forma da ameba, quando em repouzo, é arredondada aprezen- tando ella então de 20 a 30 mikra de diame- tro. Desde, porem, que entra em movimento toma configuração mais variada pela constante emissão de pseudopodios em uma ou outra porção do seu corpo. Estes pseudopodios que são unicos, de egual largura e comprimento que o resto do corpo da ameba e, neste cazo, quazi sempre unicos, ou então são estreitos, longos, multiplos, assestando-se em qualquer ponto, não raro tomando dispozição radiada em torno ao endoplasma do protozoario. Quer uns quer outros são, ao se formarem, apenas constituidos por ectoplasma; o endo- plasma nelles penetra só depois de perfeita- mente constituidos. Os pseudopodios formam-se sucessiva- mente, com pequeno intervalo, permitindo á ameba rapido deslocamento, quer numa só direção, quando se formam sucessivamente no mesmo ponto, quer alterando a quazi todo o instante a orientação do movimento pela emissão de prolongamentos sem a mesma regularidade de localização. Estando a ameba em movimento, com a formação de pseudopodios e a penetração nelles do endoplasma se dá a constante des- locação dos elementos nelle contidos, nucleos, vacuolos, incluzões etc. O protoplasma da ameba é fluido, nelle se distingue ectoplasma hialino e um endo- plasma, pouco refrinjente, alveolarmente es- truturado no qual se veem granulações diver- sas, bacterios, vacuolos dijestivos e pulsateis e o nucleo. Os bacterios existem, ás vezes, em grande abundancia e tem o aspeto de pequenos cor- pusculos e massas refrinjentes. ten, ist es geboten, dieselbe anhaltend, teils in frischen, theils in fixierten und gefärbten Präparaten zu verfolgen, um die interessanten Phasen ihres Entwicklungszyklus ertappen zu kônnen, ganz besonders diejenigen, welche sich auf die Kernteilung beziehen. Die em- pfehlenswerteste Technik fiir die Herstellung günstiger Präparate besteht in der Anwendung von Deckglaspräparaten, welche nach der feuchten Methode, von SCHAUDINN fixirt und mit HEIDENHAIN’schem Eisenhaematoxylin ge- färbt werden. Morphologie und Biologie: In Ruhe hat die Amoebe eine rundliche Form und ei- nen Durchmesser von 20-30 Mikra; sobald sie sich indessen in Bewegung setzt, nimmt sie die verschiedensten Formen an, indem sie bestândig von irgend einem Teile ihres Kór- pers Pseudopodien aussendet. Diese sind ent- weder von gleicher Lânge und Breite, als der Rest des Leibes, und dann fast immer in der Einzahl, oder schmal, lang und in Mehrzahl, indem sie an irgend einer Stelle auftreten und sich nicht selten strahlenfórmig um das En- doplasma der Amoebe gruppiren. Die einen, wie die andern, bestehen bei ihrer Bildung nur aus Ectoplasma und das Endoplasma dringt in dieselben erst nach ihrer vólligen Ausbildung. Die Pseudopodien bilden sich successiv mit kurzen Intervallen, wobei sich die Amoebe rasch fortbewegt, entweder in einer Richtung, wenn dieselben fortwahrend am selben Punkte auftreten, oder unter fort- wahrender ändernder Orientirung, wenn die Aussendung der Fortsätze ohne solche regel- massige Lokalisation stattfindet. Bewegt sich die Amoebe unter Bildung von Pseudopodien und Eindringen des Endoplasmas in diesel- ben, so erfolgt eine konstante Dislokation der darin enthaltenen Elemente, Kern, Vacuolen, Einschliisse etc. Das Protoplasma der Amoebe ist fliissig und man unterscheidet darin ein hyalines Ec- toplasma und ein wenig lichtbrechendes En- doplasma von alveolärer Structur, in dem sich verschiedene Granulationen, Bacterien, ver- dauende und pulsirende Vacuolen und der Kern erkennen lassen. Bacterien sind manch- mal in grosser Anzahl vorhanden und erschei- PAR EC a Os vacuolos dijestivos aparecem sob a forma de pequenas zonas claras no interior das quais se vê muito frequentemente sub- stancia em via de ser dijerida. Quanto aos vacuolos pulsateis säo elles multiplos, raramente menos de 3 ou mais de 7; um delles aprezenta volume muito maior que qualquer dos outros. Desde que este grande vacuolo pulsa, dous dos meno- res fundidos e, que tem por isso adquirido maior volume vem substituir o que dezapa- receu, ao passo que outros vacuolos menores vão surjindo. O vacuolo maior existente no endoplasma, geralmente nelle ocupa as mais variadas pozições e n'elle se desloca a cada momento, ao passo que os vacuolos menores se deparam agrupados, quazi sempre em um só ponto, que é a porção posterior do corpo da ameba, durante o movimento. O nucleo da Ameba diplomitotica é vezi- culozo; a fresco, aparece como pequena massa circular de contornos nitidos, de 3 a 4 mikra de diametro, menos refrinjente que o endo- plasma que o cerca. Examinado com maior individuação e em preparações bem coradas verifica-se que é constituido por membrana nitida duplamente contornada, a cuja face interna se aplicam numerozas pequenas massas de cromatina, li- gadas umas a outras por delgados filamentos acromaticos. A esta camada de cromatina se segue uma zona circular de substancia acromatica cujo interior é ocupado por gran- de cariozoma no interior do qual ainda se pode distinguir nas preparações a fresco, ou nas bem diferenciadas, um pequeno cen- triolo. A estrutura do cariozoma não é ho- mojenea, nelle se podem distinguir duas sub- stancias diversas, uma de natureza plastinica e outra com carateres de cromatina que se acha distribuida sobre a primeira, sob a forma de pequenas massas de colorido mais carre- gado. Est. 2, fig. 1. Esboçada a morfolojia da ameba e prin- cipalmente a de seu nucleo passemos a tratar da divizão nuclear que se processa debaixo de aspeto bastante curiozo, e creio, pelo menos até certo ponto, inedito. nen als kleine, lichtbrechende Kórperchen. Die Verdauungsvacuolen erscheinen in der Form kleiner heller Stellen, in deren Innern man Ofters Substanzen findet, welche eben der Verdauung unterliegen. Die pulsierenden Vacuolen existieren in der Mehrzahl, selten weniger als drei, oder mehr als sieben; eine derselben bietet ein viel grós- seres Volumen, als irgend eine der anderen. Sobald eine dieser Vacuolen pulsiert, treten zwei kleinere, die sich vereinigt und dadurch an Volum gewonnen haben, an ihre Stelle, wahrend andere kleinere Vacuolen auftreten. Die grósste Vacuole, welche im Endoplasma existiert, kann in demselben die verschieden- sten Stellen einnehmen und verschiebt sich fortwahrend, indessen die kleineren Vacuolen in Gruppen auftreten und zwar gewóhnlich in einem Punkte, welcher bei den Bewegungen den hintersten Teil des Amoebenkórpers bil- det. Der Kern der Amoeba diplomitotica ist bla- sig; frisch erscheint er als kleine, runde, scharf umschriebene Masse von 3—4 Mikra Durch- messer und ist weniger lichtbrechend als das Endoplasma, welches ihn umgiebt. Bei ein- gehender Untersuchung und in gefarbten Pra- paraten konstatirt man, dass er aus einer deut- lichen, doppelt kontourirten Membran besteht, an deren Innenseite zahlreiche kleine Chro- matinmassen liegen, welche miteinander durch diinne achromatische Filamente verbunden sind. Auf diese Schicht von Chromatin folgt eine Zone von Kreisen achromatischer Sub- stanz, deren Inneres von einem grossen Ca- ryosom eingenommen wird, in welchem man noch in frischen oder gut differenzierten Pra- paraten ein kleines Centriol unterscheiden kann. Die Struktur des Caryosoms ist nicht homogen, vielmehr kann man in demselben zwei verschiedene Substanzen unterscheiden, eine von Plastinnatur und eine andere mit den Charakteren des Chromatins, welche in der Form kleiner, stärker gefarbter Massen auf der ersteren verteilt ist. Tafel 2 Fig. 1. Nachdem wir so die Morphologie der Amoebe und besonders ihres Nucleus darge- stellt haben, wollen wir uns mit der Kerntei- lung befassen, welche ein ziemlich eigentüm- 36 A maioria dos processos de divizão assi- nalados para as amebas até hoje conhecidas é a da amitoze; ja existe, porem, um pequeno grupo desses protozoarios em que se tem as- sinalado a existencia de divizão carioquinetica, se bem que ainda evoluindo de modo um tanto primitivo. A primeira menção de processo de divi- zão indireta nas amebas deve-se a Schaudinn (1) que a observou na Ameba binucleata. Algum tempo depois Awerinzew (2) verifi- cou egualmente o mesmo tal processo na Ameba proteus. Ulteriormente Vahlkampf (3) descreveu, na Ameba limax, um processo de divizão mito- zica, mais tipico que os precedentes, cara- terisado pela formaçäo de placas polares, pela divizäo do cariozoma e pelo aparecimento sobre os filamentos acromaticos que uniam essas placas de 3 cromozomios que depois se dividiam e se dirijiam para as placas polares onde, juntamente com ellas, rejeneravam os novos nucleos. Prowazek, (4) e Leyden Lowenthal (5) as- sinalam na Amaba buccalis a existencia de mitoze primitiva. Wenyon, (6) na Ameba muris, tambem conseguiu observar algumas fazes em que se percebe a divizao mitozica dessa ameba. Mais recentemente, Doflein (7) assinalou, na Ameba vespertilio, a existencia de divizáo indireta. Todavia porém, na Ameba buc- calis, e nesta ultima, a carioquineze se mani- festa no cariozoma, ao passo que os elemen- tos do trofo-nucleo se dividem amitozica- mente. A Ameba diplomitotica aprezenta um pro- cesso de divizão indireta que se manifesta de dous modos diversos. Uma das variedades no processo de di- vizão da ameba é caraterizado pela existencia _ de mitoze dupla do cariozoma e dos ele- mentos do trofo-nucleo; a outra assinala-se pela divizáo direta do cariozoma e indireta do trofo-nucleo. Vejamos cada um dos processos de per-si, a começar pelo de dupla mitoze. liches und, wie ich glaube, wenigstens teil- weise, noch unbeschriebenes Bild bietet. Die Mehrzahl der von Amoeben berichteten Teilungsprozesse gehórt zur Amitose; es exi- stiert nur eine kleine Gruppe dieser Protozoen, bei welchen das Vorhandensein einer caryo- cinetischen Teilung angegeben ist, die sich úbrigens in ziemlich primitiver Weise abspielt. Die erste Erwáhnung eines indirekten Teilungsprozesses bei den Amoeben ver- danken wir SCHAUDINN, (1) der denselben bei der Amoeba binucleata beobachtete. Einige Zeit später stellte AWERINZEW (2) ebenfalls das Vorkommen eines solchen Prozesses bei der Amoeba proteus fest. Spáter beschrieb VAHL- KAMPF (3) bei der Amoeba limax einen mitoti- schen Kernteilungsprozess, der typischer als die vorstehenden ist. Derselbe kennzeichnet sich durch die Bildung von Polplatten, die Teilung des Caryosoms und das Auftreten von drei Chromosomen auf den achromati- schen Filamenten, welche die Polplatten ver- binden; diese teilen sich darauf und begeben sich zu den Polplatten, um, zusammen mit diesen, die neuen Amoebenkerne zu bilden. PROWAZEK (4) und LEYDEN-LOWENTHAL (5) geben bei der Amoeba buccalis dle Existenz einer primitiven Mitose an. Auch WENYON (6) gelingt es bei der Amoeba muris einige Pha- sen zu beobachten, aus welchen man die mitotische Teilung dieser Amoebe erkennt. Neuerdings teilte DOFLEIN (7) das Vor- kommen der indirekten Teilung bei Amoeba vespertilio mit; jedoch sowohl bei dieser, als bei der Amoeba buccalis zeigt sich die Caryo- cinese am Caryosom, während sich die Ele- mente des Aussennucleus amitotisch teilen. Die Amoeba diplomitotica zeigt einen in- direkten Teilungsprozess, der sich auf zwei verschiedene Weisen äussert. Eine derselben kennzeichnet sich durch die Existenz einer doppelten Mitose des Caryosoms und der Ele- mente des Aussenkerns; die andere äussert sich durch eine direkte Teilung des Caryo- soms und eine indirekte des Aussennucleus. Wir betrachten nun beide Prozesse und be- ginnen mit demjenigen der doppelten Mitose. Dieser Teilungsprozess ähnelt demjenigen sehr, den wir bei der Polytomella agilis be- Este processo de divizäo muito se asse- melha áquelle que assinalaremos para a Poly- tomella agilis. Sua primeira faze carateriza-se pela fragmentação do cariozoma da ameba e pela dispozição radiaria que, em torno delle, tomam os elementos do nucleo exterior. 2 Rod Em seguida os cromozomios do cario- zoma, orientados pelos dous centriolos oriji- narios da divizão do primitivo do nucleo, na faze precedente, começam a se separar em dous grupamentos opostos, ao mesmo tempo que os cromozomios do nucleo exterior se des- locam para os lados do cariozoma, já en- tão um pouco alongado e ahi se agrupam circumdando-o. Est. 2, fig. 3. Em faze mais adiantada os cromozo- mios do cariozoma aparecem separados em dous grupamentos nitidos, ligados um ao ou- pelo filamento de união dos centriolos, geral- mente bastante vizivel. Os cromozomios do nucleo exterior precedentemente colocados em torno do cariozoma, vém-se dispor, entao, no espaco que fica entre os dous grupos de cromozomios do cariozoma, tomando ai uma dispozição quazi perpendicular ao maior eixo da figura de divizao. Ê Já então a membrana nuclear dezapare- ceu por completo e a figura de divizão apa- rece no interior de um espaço claro sem limites nítidos. Est. 2, fig. 4. As fazes seguintes do processo são as- sinaladas pelo afastamento progressivo dos | grupamentos de cromozomios do cariozoma | que passam a constituir, nos extremos da zona de divizão, duas placas polares lijeiramente concavas, internamente, nas quais se pode observar, ás vezes, com muita nitidez um cen- triolo ligado ao do lado oposto por fila- mento intermediario sempre bastante distinto — Os filamentos acromaticos e os cromo- zomios do nucleo exterior não aprezentam al- terações sensíveis, apenas aquelles se torna- ram mais longos. Est. 2, fig 5 e 6. Continuando o afastamento das placas | polares, observam-se certas modificações na | | einer länglichen Spindel an und auf den die figura de divizão; toma o aspeto de fuzo 37 | um dieselbe. Est. | schreiben werden. Seine erste Phase charakte- risiert sich durch die Fragmentirung des Ca- ryosoms der Amoebe und durch die radiäre Anordnung der Elemente des Aussennucleus (Tafel 2 Fig. 2). Hierauf be- ginnen die Chromosomen des Caryosoms, orientiert durch die zwei Centriolen, welche in der vorhergehenden Phase durch die Tei- lung des urspriinglich im Kerne vorhandenen entstehen, sich in zwei entgegengesetzte Grup- pen zu teilen, wahrend die Chromosomen des Aussennucleus sich nach dem, schon jetzt etwas verlangerten, Caryosoma begeben und sich um dasselbe gruppiren. (Tafel 2 Fig. 3). In einer mehr vorgeschrittenen Phase erschei- nen die Chromosomen des Caryosoms in zwei deutliche Gruppen getrennt, welche unter | sich durch zarte achromatische Filamente und ' den, gewóhnlich deutlich sichtbaren, Verbin- tro por delicados filamentos acromaticos e | Re | stehen. Die vorher um das Caryosom ge- lagerten Chromosomen des Aussennucleus rücken nun nach dem freien Raume, welcher zwischen den beiden Gruppen der Chromo- somen des Caryosoms bleibt und ordnen sich dort fast senkrecht zur gróssten Axe der Tei- lungsfigur. Schon jetzt verschwinden die Kernmem- branen fast vóllig und die Teilungsfiguren erscheinen im Innern eines hellen Raumes, der keine deutliche Begrenzung zeigt. (Tafel 2 Fig. 4). Die weiteren Phasen des Prozesses kenn- zeichnen sich durch fortschreitende Entfernung der Chromosomengruppen des Caryosoms, welche allmälich an den Enden der Trennungs- zone zwei, nach innen leicht konkave Pol- platten bilden, in deren Innern man oft sehr deutlich ein Centriol erkennt, welches mit demjenigen der anderen Seite durch einen, immer sehr deutlichen, Verbindungsfaden zu- sammenhängt. Die achromatischen Filamente und die Chromosomen des Aussennucleus zeigen keine deutlichen Veränderungen, nur werden jene etwas länger. (Tafel 2 Fig. 5, 6). Wahrend die Entfernung der Polplatten weiter geht, beobachtet man gewisse Modifikatio- nen der Teilungsfigur; sie nimmt die Form DER. MER” alongado e sobre os filamentos que unem as placas polares aparecem espalhadas, ocu- pando-os em quazi toda a extensão os cromozomios do nucleo exterior que preceden- temente tomavam a dispozição anular em torno do maior eixo da zona nuclear. Est. 2e Le Não tarda, porém, que o aspeto prece- dente se modifique, e continuando o afasta- mento das placas polares toma a figura de divizão certa conformação cilindrica, com o aspeto de um chouriço, mantendo-se porém a mesma a dispozição dos cromozomios do nucleo externo sobre os filamentos acromaticos. Est'2, fig: 8. Atinjido este periodo, pode se dizer que se está na metafaze do processo de divizão; daqui em diante tende tudo á constituição dos nucleos secundarios. Observa-se então, como primeiro indicio do novo curso que vai tomar o processo, o estreitamento da figura precedente na parte media do seu comprimento, ao mesmo tempo que os cromozomios que aí se achavam se afastam para um lado e para outro e vão constituir dous agrupamentos conicos opostos pelos vertices e com bazes voltadas para as placas polares, de que são separados por pequena zona clara, separada por filamentos acromaticos atravessando, de um lado a ou- tro, a zona estreitada. Vê-se o filamento de união dos centriolos. Est. 2, fig. 9. Adiantando-se o processo, observa-se que os cromozomios do nucleo exterior, assim como as placas polares se tornam, aos poucos, compactos e não deixam perceber mais a separação nitida dos cromozomios aí exis- tentes. Logo depois se nota que, progressi- vamente, os cromozomios do nucleo exterior que constituem o cone aos poucos, se vão desprendendo delle e começam a passar para o espaço claro que separa a placa polar da massa de elementos do nucleo exterior, e aí surjem dispostos em fila, formando uma es- pecie de corôa em torno á essa placa. Est. 2, fig. 10. Nesta ocazião, a zona nuclear se torna muito alongada no que tambem é acompa- Polplatten verbindenden Fäden erscheinen, zerstreut und dieselben nach und nach fast in ihrer ganzen Ausdehnung bedeckend, die Chromosomen des Aussennucleus, welche vorher ringfórmig um die grosse Axe des Kernfeldes gelagert waren. (Tafel2 Fig. 7). Dieses Bild ändert sich jedoch bald wie- der und während sich die Polplatten weiter entfernen, nimmt die Teilungsfigur eine Cylinder- oder Wurstform an, wobei aber dieselbe Anordnung der Chromosomen des Aussenkerns auf den achromatischen Fila- menten weiter besteht. Diese Periode kann man als die Meta- phase des Teilungsprozesses ansprechen; von jetzt ab geht die ganze Tendenz auf die Bil- dung der Tochterkerne. Man bemerkt dann als erstes Anzeichen der neuen Richtung, welche der Prozess ein- schlägt, eine Einschniirung der vorstehenden Figur in der Mitte ihrer Längsrichtung, wäh- rend die dort befindlichen Chromosomen nach beiden Seiten abrücken, um zwei konische Gruppen zu bilden, deren Spitzen einander zugewendet sind, während die Basen nach den Polplatten gerichtet sind, von denen sie durch eine helle, von achromatischen Fäden durchsetzte Zone getrennt werden. Den Cen- tralfaden, welcher die beiden Centriolen ver- bindet, sieht man diese schmalen, hellen Zonen von einer Seite zur andern durchsetzen. (Tafel 2 Fig. 9). Bei weiterem Fortschreiten des Pro- zesses sieht man, wie die Chromosomen des Aussennucleus und die Polplatten sich immer dichter anordnen, so dass die deutliche Tren- nung der daselbst vorhandenen Chromoso- men verwischt wird. Kurz darauf bemerkt man, dass die Chromosomen des Aussennu- cleus, welche den Konus bilden, sich allmälig fortschreitend von demselben ablôsen und dem hellen Raume zurücken, welcher die Polplatten von der Masse der Elemente des Aussenkerns trennt, und sich dort in einer Reihe ordnen, welche eine Art von Kranz um diese Platte bildet. (Tafel 2 Fig. 10). Bei die- ser Gelegenheit zieht sich die Kernzone sehr in die Lânge und wird darin vom Protoplas- ma der Amoebe begleitet, welche sich im sel- LEPE nhada pelo protoplasma da ameba que, entáo se tem alongado no mesmo sentido e, náo raro já se comeca a observar os primeiros sinais de divizäo do protoplasma que se faz diretamente, pelo estreitamento progres- sivo delle, na parte media. Coincide com os primeiros indicios da di- vizäo do protoplasma o rompimento, na parte media, do filamento de uniáo dos centriolos, que ainda ligava os produtos da divizäo nuclear, izolando-se, entáo, de cada lado da ameba os elementos dos futuros nucleos. A's vezes a segmentação do protoplasma é táo rapida que as amebas já se acham izo- ladas, achando-se ainda o nucleo em faze bas- tante atrazada de reconstituicio nuclear, Est. 2 1 QUE: A’ medida que os cromozomios do nucleo exterior váo passando para a zona interme- diaria acima mencionada, o cone primitivo de cromozomios vai aos poucos diminuindo de tamanho. Por sua vez a placa polar aumenta de volume e vai se arredondando e tomando a forma do futuro cariozoma que della se re- jenerará. O contorno da zona nuclear co- meca a se arredondar, vae se tornando mais nitido, e nelle náo tarda a se esbocar uma membrana, cujos extremos tocam os res- tos do cone do nucleo exterior. Os cromo- zomios do nucleo exterior que, até ha pouco, formavam coróa em torno da placa polar, co- mecam a cercar o futuro cariozoma, já entáo ligado á membrana por delicados filamentos acromaticos. Est. 2, fig. 12. Daqui em diante, a reconstituçäo nuclear se processa rapidamente e em breve o cario- zoma aprezenta sua forma esferica normal, ocupa o centro do nucleo, emquanto os cro- mozomios do nucleo exterior tomam a sua dispozicáo tipica junto á membrana nuclear. Termina aqui o processo de divizáo veje- tativa da ameba. Durante as fazes delle se observa que o rizopode, á medida que progride o fenomeno aprezenta cada vez maior diminuição da motilidade, até se comple- tar a divizäo celular e a rejeneraçäo do nu- ben Sinne streckt; nicht selten beginnen dann bereits die ersten wahrnehmbaren Erscheinun- gen der Protoplasmateilung, welche direkt durch Einschnúrung im mittelsten Teile er- folgt. Mit den ersten Anzeichen derselben koinzidiert die in der Mitte erfolgende Durch- schnürung des Verbindungsfadens der Cen- triolen, welcher die Produkte der Kernteilung noch zusammen hielt, worauf sich auf beiden Seiten der Amoebe die Elemente der zukiinf- tigen Kerne isolieren. Manchmal ist die Teilung des Protoplas- mas eine so rasche, dass man die Amoe- ben schon getrennt findet, wáhrend ihre Kerne sich noch in einer wenig vorgeschritte- nen Phase der Rekonstitution befinden. (Ta- fel: 2 Fig; 11). In dem Maasse, wie die Chromosomen des Aussennucleus nach der oben erwähnten intermediären Zone rücken, nimmt der ur- sprüngliche Konus der Chromosomen nach und nach an Grôsse ab. Dagegen nimmt die Polplatte an Volum zu, rundet sich ab und nimmt die Form des zukiinftigen Caryosoms an. Der Umriss der Kernzone beginnt sich abzurunden und immer deutlicher zu werden und bald zeichnet sich eine Membran, deren Enden die Reste des Aussennuclearkonus äus- ziehen. Die Thromosomen des Aussennucleus, welche bis vor Kurzem einen Kranz um die Polplatten bildeten, beginnen das zukiinftige Caryosom zu umgeben, welches noch durch zarte achromatische Faden mit der Membran verbunden ist. (Tafel 2 Fig. 12). Von nun an geht die Rekonstitution des Nucleus rasch vor sich und bald zeigt das Caryosom seine normale spharische Form, wobei es das Zentrum des Nucleus einnimmt, wahrend die Cromosomen des Aussennucleus ihre typische Lage an der Kernmembran ein- genommen haben. Hier endet der vegetative Teilungsprozess der Amoebe. In seinen verschiedenen Phasen beobachtet man, dass dieselbe, in dem Maasse, wie der Prozess fortschreitet, eine zunehmen- de Verminderung der Beweglichkeit zeigt, bis die Zellteilung und Regeneration des Kernes eingetreten ist, worauf die Amoebe ihre ur- spriinglichen Bewegungen wieder aufnimmt. cleo; depois do que, recupera seus movimen- tos, como primitivamente. Alem do processo de divizão vejetativa da ameba, pelo processo de dupla mitoze que acabamos de descrever e que é muito seme- lhante ao por nós observado na Polytomella agilis aprezenta a Amæba diplomitotica um | segundo aspeto de divizão mais simplificada | que a anterior, ao que já nos referimos pre- cedentemente e do qual, agora, passamos a mencionar as principais fazes. O inicio da divizão, neste cazo, assinala-se pelo alongamento do cariozoma e pelo agru- pamento em torno do maior eixo delle, na terior. Est. 2, fig. 13. Em seguida se observa que, a medida que se alonga o cariozoma, começa a se estreitar na parte media, mesmo tempo que nesse ponto aparecem numerozos filamentos acromaticos em torno dos quais se dispoem os cromozomios do nucleo exterior sob a forma de placa equatorial muito nitida. Est. 2, fig. 14. A seguir, observa-se que, cada vez mais, | se estreita o cariozoma na parte central, ao passo que as duas massas que se vão for- mando nas extremidades da figura, se afas- tam um pouco uma da outra e afinal apenas ficam ligadas pelo filamento intermediario dos centriolos e pelo filamentos acromaticos cujo numero aos poucos foi aumentando. À placa de cromozomios do nucleo exterior não aprezenta até aqui modificação notavel. nhum vestijio resta na zona nuclear da mem- brana primitiva. Est. 2, fig. 15, 16, 17. atinjido o limite maximo e que elles se acham transformados em -duas massas apenas ligadas pelo filamento intermediario dos cen- triolos, dá-se então o desdobramento da placa primitiva de cromozomios do nucleo exterior, em duas placas filhas, cujos elementos muito | - regularmente se enfileiram sobre os filamentos acromaticos. Est. 2, fig. 18. Cada uma dessas placas filhas não tarda a se dirijir para um dos cariozomas secun- darios, já então izolados e completamente re- dondos, e em torno delles se vão Apdo” Ne- | parte mediana dos elementos do nucleo ex- | auf bemerkt man, dass das Caryosom, Ausser dem Prozesse der vegetativen Tei- lung durch doppelte Mitose, den wir soeben beschrieben haben und welcher dem von uns bei Polytomella agilis beobachteten sehr ähn- lich ist, zeigt die Amoeba diplomitotica noch eine zweite Teilungsweise, welche einfacher als die vorige ist; wir haben dieselbe bereits erwähnt und wollen jetzt die wichtigsten Pha- sen derselben kurz beschreiben. In diesem Falle kennzeichnet sich der Be- ginn des Prozesses dadurch, dass das Caryo- soma sich verlángert und die Elemente des Aussennucleus sich um die Mitte seiner láng- sten Axe gruppiren (Tafel 2, Fig. 13). Hier- in dem Maasse wie es sich streckt, sich auch in der Mitte einzuschnüren beginnt, während an ao | dieser Stelle zahlreiche achromatische Fäden auftreten, um welche sich die Chromosomen des Aussennucleus unter der Form einer sehr deutlichen Aequatorialplatte anordnen (Tafel 2, Fig. 14). Hierauf sieht man, wie das Caryo- som in seinem mittleren Teile sich immer mehr einschnürt, während die beiden Massen, die sich an den Enden der Figur bilden, sich etwas von einander entfernen, bis sie schliess- lich nur durch die Verbindungsfäden der Cen- triolen und, die allmälig an Zahl zunehmen- den, achromatischen Fäden verbunden sind. Die Chromosomenplatte des Aussennucleus zeigt bis dahin keine bemerkenswerte Verände- rung. In der Kernzone bleibt keine Spur der ursprünglichen Membran erhalten. (Tafel 2, Fig. 15, 16 u. 17). Wenn die Teilung der Caryosome bereits ihre äusserste Grenze er- | reicht hat und dieselben sich in zwei Massen Quando a divizão dos cariozomas já tem | verwandelt haben, welche nur durch die Ver- bindungsfäden der Centriolen zusammenhän- gen, dann erfolgt die Teilung der ursprüng- lichen aussennucleären Chromosomenplatte in zwei Tochterplatten, deren Elemente sich sehr regelmässig auf den achromatischen Fã- den aufreihen. (Tafel 2, Fig. 18). Jede dieser Tochterplatten beginnt sofort, sich nach einem der sekundären Caryosome zu begeben (welche dann schon vollständig isoliert und abgerundet Sind, worauf sie sich um dasselbe lagert und es zu umfassen sucht. An den Grenzen der Kernzone, deren Lânge dann das Doppelte ——— 41 e procurando cercal-os. Est. 2, fig. 19. Nos li- mites da zona nuclear, cujo comprimento não excede então o dobro da largura, começa se a notar a reconstituição da membrana, assim como os primeiros indicios da sepa- ração dos futuros nucleos. Como concluzão do processo obtem-se no interior da ameba, dous nucleos completamente constituidos, col- | locados um ao lado do outro. Est. 2, fig. 20. O processo de divizão nuclear da ameba, mais simplificado neste cazo, nem sempre se faz com a regularidade e egualdade acima descritas; não muito raro é observar-se a di- vizão muito desegual dos cariozomas donde o constituir-se no interior da ameba dous nu- cleos de tamanho diverso. Est. 2, fig. 21, 22. O processo de divizão nuclear acima des- crito não se acompanha obrigatoriamente da divizão do protoplasma da ameba, muitas ve- zes até ha tempo della se processar 2 vezes, sem que o protoplasma se segmente, donde o aparecimento de amebas com 4 nucleos formados pelo processo acima. A regra porém é que uma vez formados os dous nucleos, o protoplasma da ameba se segmente, ficando cada porção delle com um dos nucleos. Não se nota alteração na mo- bilidade da ameba, no decorrer das fazes de divizão. Os dous processos de divizão da Ameba diplomitotica que acabamos de descrever pa- recem bem diversos um do outro e, tanto quanto podemos assegurar, destinados cada um delles a um processo de multiplicação do rizopode. O processo de divizão por dupla mitoze, corresponde á divizão vejetativa da ameba; é o que assegura a regular e egual distribuição dos cromozomios do nucleo exterior e do ca- riozoma dos nucleos secundarios. Por ser processo de divizão mais complexo é, por isso mesmo, mais lento. O segundo modo da divizão da ameba, ao contrario, se carateriza pela menor regu- laridade na distribuição dos cromozomios pe- los nucleos secundarios; é, tambem, por ser menos complexo, mais rapido e o mais apro- der Breite nicht überschreitet, fangt man an, die Rekonstitution der Membran und die ers- ten Anzeichen der Trennung der zukiinftigen Kerne zu erkennen. Als Schluss des Prozes- ses erhält man im Innern der Amoebe zwei volistândig ausgebildete Kerne, welche neben einander gelagert sind (Tafel 2, Fig. 20). Der in diesem Falle vereinfachte Kernteilungs- prozess der Amoebe vollzieht sich nicht immer mit der angegebenen Schnelligkeit und Gleich- mässigkeit; nicht selten beobachtet man eine sehr ungleichmässige Teilung, so dass sich im Innern der Amoebe zwei Kerne von un- gleicher Grósse bilden. (Tafel 2, Fig. 21, 22). Der oben beschriebene Kernteilungspro- zess wird nicht notwendig von der Teilung des Protoplasmas der Amoebe begleitet, ja derselbe findet oft Zeit, sich zu wiederholen, ohne dass das Protoplasma sich teilt, was zu dem Vorkommen von Amoeben mit vier auf obige Weise entstandenen Kernen führt. Die Regel ist jedoch, dass nach Bildung der beiden Kerne das Protoplasma der Amoebe sich teilt und jeder Teil desselben einen Kern behält. Man bemerkt dabei keine Ver- änderung der Beweglichkeit der Amoebe im Verlauf der Teilungsphasen. Die beiden Teilungsprozesse der Amoeba diplomitotica, welche wir soeben beschrieben haben, verlaufen sehr verschieden von einan- der, obwohl sie, soviel wir versichern kônnen, beide dem Zwecke der Vermehrung des Rhi- zopoden dienen. Der Prozess der Teilung durch doppelte Mitose entspricht der vegetativen Teilung der Amoebe und garantiert die regelmässige und gleichmässige Verteilung der Chromo- somen des Aussennucleus und des Caryosoms auf die sekundären Kerne. Als komplizierterer Teilungsprozess ist er auch eben deswegen ein langsamerer. Im Gegensatz hierzu kennzeichnet sich die zweite Teilungsweise der Amoebe durch die geringere Regelmässigkeit der Verteilung der Chromosomen auf die sekundären Kerne; als weniger kompliziert, auch ist sie rascher und mehr geeignet, eine schnelle Vermehrung der Amoebe zu garantiren; die Teilung oder richtiger die Fragmentierung des Protoplasmas priado a assegurar a rapida multiplicação da ameba; a segmentação do protoplasma, ou melhor, a fragmentação delle indica o seu re- lacionamento com o processo de divizão chi- zogonica da ameba. Os dous aspetos diversos da divizão nu- clear da Ameba diplomitotica foram os que observámos no decurso de nossas pesquizas e aos quais demos a interpretação que, de acordo com os fatos, nos pareceu mais lo- jica. Existe certa semelhança entre o pro- cesso de divizão da ameba que estudamos e a da Ameba limax pesquizada por Wahlkampf; é evidente, porem, que no nosso cazo a com- plexidade do fenomeno é bem maior. E’ bastante interessante sob o ponto de vista filojenetico assinalar a semelhança entre os processos de divizão da Ameba diplomi- totica e da Polytomella agilis, ambos pro- tozoarios tipicos de grupos diversos, em- bora relacionados, como as amebas e os fla- jelados. A parte mais interessante da biolojia da Ameba diplomitotica, é incontestavelmente a divizão della. O enquistamento nada tem de notavel; processa se como nas amebas do typo limax. Os quistos, quando formados são circulares, e medem 7,5 u. de diametro, são quazi eguais uns aos outros. Têm a côr amarelada e são limitados por duplo envoltorio constituido in- ternamente por uma membrana de duplo contorno nitido e, externamente, por mem- brana de contorno externo um pouco irre- gular. Em cada quisto apenas se vê um nu- cleo; não conseguimos nelles observar qual- quer indício de multiplicação nuclear ou de autogamia. Egualmente nunca nos foi pos- sivel encontrar, em qualquer periodo da evo- lução da ameba, fazes de copulação, como recentemente assinalaram na Ameba diploidea Hartmann e Neegler. 42 deutet seine Verwandtschaft mit dem schizo- gonischen Teilungsprozess der Amoeben an. Diese beiden verschiedenen Bilder der Kernteilung der Amoeba diplomitotica sind es, die wir im Laufe unserer Untersuchungen beobachteten und die wir so deuteten, wie es uns in Uebereinstimmung mit den Tatsachen, am logischsten erschien. Es besteht eine ge- wisse Aehnlichkeit zwischen dem Teilungs- prozesse der Amoebe, welche wir studierten und demjenigen der Amoeba limax, welcher von VAHLKAMPF untersucht worden ist; je- doch ist es klar, dass in unserem Falle die Erscheinung eine weit kompliziertere ist. Vom phylogenetischen Gesichtspunkte aus ist es nicht uninteressant, die Aehnlichkeit zwischen den Teilungsprozessen der Amoeba diplomi- totica und der Polytomella agilis hervorzuhe- ben, zweier Protozoen, welche fiir zwei ver- schiedene, wiewohl verwandte Gruppen, wie die Amoeben und Flagellaten, typisch sind. Der interessanteste Teil der Biologie der Amoeba diplomiiotica ist unzweifelhaft ihre Teilung. Die Incystirung bietet nichts bemerkens- wertes und vollzieht sich wie bei den Amo- eben vom Limax-typus. Die vollendeten Cys- ten sind rund und messen 7,5 Mikra im Durch- messer; sie sind einander fast gleich, von gelb- licher Farbe und von einer doppelten Hülle umgeben, inwendig von einer Membran mit deutlich doppeltem Umrisse und auswendig von einer solchen mit etwas unregelmässiger äusseren Kontur. In jeder Cyste sieht man nur einen Kern; niemals haben wir in den- selben irgend ein Anzeichen einer Kernver- mehrung oder Autogamie bemerken kônnen. Ebenso war es uns niemals môglich, in irgend einer Entwicklungsperiode unserer Amoebe Copulationsphasen anzutreffen, wie sie HART- MANN und NAEGLER bei der Amoeba diploidea neuerdings angegeben haben. MEMORIAS DO INSTITUTO OSWALDO CRUZ — Tomo | - 1909 20 PE 1 ith in AU 21 A, Nit [HUE qu ESTAMPA 9 1) 2) 3) 4) 43 LITERATURA Schaudinn, F. — Ueber die Theilung von Amoeba binucleata. Sitzungs-Bericht der Gesellschaft N.-Freunde. Berlin, 1895. Awerinzew. — Ueber die Theilung bei Amoeba proteus. Zool. Anz., 1904. Vahlkampf, E. — Beitrage zur Behandlung und Entwicklungsgeschichte von Amoeba limax. Archiv für Protistenkunde, 1905. Vol. 5. Prowazek. — Entamoeba buccalis n. sp. Ar- beiten aus dem Kaiserl. Gesundheitsamt. Vol 21. 5) 6) 1) Leyden-Lówenthal. — Entamoeba buccalis (Prowazek) bei einem Fall von Mund-bo- den-Carcinom. — Charité Annalen, XXIX. Jahrgang. Wenyon. — Protozoa of the intestine of Mice. Archiv f. Protistenkunde. Supple- ment I, 1907. Doflein. — Studien zur Naturgeschichte der Protozoen. Archiv f. Protistenkunde. Supplement I, 1907. > Contribuição para o estudo dos parazitas intraglobulares dos lacértidas Plasmodium diploglossi n. sp. Plasmodium tropiduri n. sp. pelos Drs. H. de Beaurepaire Aragão e Arthur Neiva Assistentes do Instituto. (Estampa 3) À contribution to the study of the intraglobular parasites of the lizards, Two new species of Plasmodium, Pl. diploglossi n. sp.and PI. tropidurin. sp. by Drs. : H. de Beaurepaire Aragäo e Arthur Neiva Assistents. (Plate 3) Até 1901 nao se conhecia, nos animais de sangue frio, outros parazitas dos glo- | bulos vermelhos além das hemogregarinias. Nessa época, Simond descreveu um hemato- zoario pigmentado no sangue de uma tarta- ruga (Trionyx indicus, Gray) o qual elle denomi- nou de Hemameba metchnikovi. Mais tarde, em 1904, Castellani viu outro parazita da mesma natureza, no sangue do Hemidactylus lesche- naulti, Gray e aproveitou a ocazião para crear com este hematozoario e o descrito por Si- mond, novo genero, Hemocystidium, a que elle da carater provizorio, ao mesmo tempo que assinalava a grande semelhanca entre esses parazitas e os hemoproteos das aves. A nós parece que os hematozoarios de Simond e Castellani deveriam ser incluidos entre os hemoproteos, até que o conhecimento mais completo do ciclo delles viesse justificar sua colocação em outro genero. Estas considerações vêm a propozito de dous novos parazitas intraglobulares dos la- cértidas, bem diferentes dos precedentes que tivemos, ha algum tempo, ocazião de obser- var e que, morfolojicamente, têm os caracteres dos plasmodios do tipo proteozoma das aves. Up to 1901 the only intraglobular parasites known from cold blooded animals belonged to the haemogregarinae. At that date Simond described a pigmented haematozoon from the blood of a turtle (Trionyx indicus Gray) and gave it the name: Haemamoeba metchnikoffi. Later, in 1904, Castellani, having observed another parasite of the same kind in the blood of the Hemidactylus leschenaulti, Gray, established for this and the one observed by Simond a new genus: Haemocystidium which he considers as only provisory, noticing at the same time the great ressemblance between these forms and the haemoproteus of the birds. It seems to us that both haematozoa ought to be inclu- ded in the genus Aaemoproteus, at least until a more perfect knowledge of their evolution might justify the establishment of a new genus. These reflexions were made while we had the chance of observing two other blood-pa- rasites of lizards which morphologically fol- 45 Um desses parazitas foi encontrado no sangue de Diploglossus fasciatus D. B. obtidos no Xe- rém, Estado do Rio, por um de nós (Neiva), o outro observámos em preparados de sangue de Tropidurus torquatus, Wied., que nos fo- ram trazidos de Bicudos, Estado de Minas, pelo Dr. Carlos Chagas. Atenta a semelhança morfolojica desses hematozoarios com os plasmodios, rezolvemos colocal-os nesse genero, dezignando-os respe- tivamente, Plasmodium diploglossi e Plasmo- dium tropiduri, até que o conhecimento mais | completo venha mostrar a necessidade da in- cluzão delles em outro genero. Plasmodium diploglossi , Este parazita é encontrado no sangue do Diploglossus fasciatus, vulgarmente conhecido por lagarto cobra, lacértida bastante raro e do qual, até agora, só tivemos ocazião de observar quatro exemplares, dous do Xerém, infetados, e os outros de Ouro-Fino, Estado de Minas, não parazitados. Aqui no Instituto, tivemos vivo durante | alguns dias, um dos exemplares de Diploglos- sus com grande infeção e foi com elle que | conseguimos fazer mencionadas. Em primeiro logar tentámos infetar outros lacértidas (Tropidurus torquatus, Ameiva suri- namensis, Mabuia agilis, D. B., Hemidactylos as experiencias abaixo mabuia) inoculando-lhes por via intra-muscular, | fect some other lizards (Tropidurus torquatus, sangue retirado do animal infetado. Não foi low the type of the proteosoma of the birds. One of them was found in the blood of a Diploglossus fasciatus, D. B. caught by one of us (Neiva) in Xérem (State of Rio de Janeiro), the other was discovered in bloodsmears of a Tropidurus torquatus, Wied., brought by Dr. Car- los Chagas from Bicudos in the State of Minas. Considering the morphological ressemblance of these cytozoa with the plasmodia we shall include them in this genus as Plasmodium diploglossi and tropiduri, while waiting for a more complete knowledge which might oblige us to place them in another genus. Plasmodium diploglossi n. sp. This organism was found in the blood of the Diploglossus fasciatus, commonly known | as snakelizard, a rather rare kind of which up to date we have only observed four spe- cimens, two of which were infected, while the two others (from Ouro Fino in the State of Minas) where free from blood parasites. One of them could be kept alive during some days; it showed a very strong infection | and gave us the chance to perform some possivel obter a infeção em numerozos ani- | mais inoculados. Procuramos tambem fazer com que mosqui- tos diversos, Culex confirmatus, An., Culex te- niorhynchus, Wied., muito comuns nos logares em que o lacértida é encontrado, o picassem; elles, porém, sempre se recuzaram a isso. Tendo morrido, inesperadamente, o ani- mal infetado que possuiamos nao nos foi po- sivel experimentar com outros mosquitos e demais insetos sugadores de sangue e ixó- didas. Nenhum ecto-parazita foi encontrado sobre os animais infetados ou não. O estudo do parazita foi feito em prepa- rações a fresco, entre lamina e laminula ou experiments. In first instance we tried to in- Hemidactylus mabuia, Ameiva surinamensis and | Mabuia agilis D. B.), by inoculating them in the muscles with blood obtained from the | infected animal, but in all the numerous ex- periments we failed to reproduce the infection. After that we tried to have the animal bit- ten by two kinds of mosquitos commonly found in the same places as the lizards (Culex confirmatus and C. taeniorhynchus), but both refused to bite. The unexpected death of the infected ani- mal prevented us from experimenting with more mosquitos and bloodsucking insects or 46 em gota pendente e em preparaçôes fixadas pelo alcool metilico e córados pelo Giemsa. O parazita é essencialmente intraglobu- lar; nas preparações a fresco, quando ainda muito joven, aparece sob a fórma de pe- quena massa arredondada que não excede a 2 4, colocada no protoplasma do globulo, junto a uma das extremidades. Aprezen- ta-se, então, constituido por pequena massa de protoplasma de estrutura finamente al- veolar, de colorido amarelo palido, no in- terior está o nucleo que aí aparece sob a fórma de pequeno corpusculo arredondado. Córadas pelo Giemsa, estas fórmas se apre- zentam com o aspeto de pequeno anel ou de pequena massa poligonal e são cons- tituidas por porção de protoplasma córado em azul claro; no centro ou em uma das bordas existe pequena massa de cromatina intensamente corada em vermelho rubi e ás vezes ainda, pequeno vacuolo nutritivo. Est. dues. 1 2 ra, 412 e 119. Em periodo mais adiantado do dezen- volvimento, o parazita começa a tomar a forma alongada e não tarda a se curvar sobre a extremidade do nucleo do eritrócito, come- çando a envolvel-o. Desde que o parazita tenha atingido certo dezenvolvimento, come- ça-se a observar nas fórmas pertencentes ao ciclo esquizogonico, a divizão nuclear e o aparecimento de granulos de pigmento casta- nho-escuro. Est. 3, figs. 3, 4, 5 e 12 b. A influencia do parazitismo não tarda a se fazer sentir sobre os globulos; o colo- rido torna-se um pouco menos intenso, o nucleo se deforma, a celula aumenta de di- mensões e aprezenta o contorno menos re- gular que normalmente; pode atinjir, então, 19 u de comprimento, por 11 yu de largura, quando, normalmente, estas dimensões não excedem a 15 X 9 u. Continuando o parazita a se dezenvolver, cerca francamente o nucleo que se torna ar- redondado e, ás vezes, fundindo-se as extre- midades, forma anel completo em torno delle, emquanto o globulo se aprezenta cada vez mais hipertrofiado. Já se póde, então, observar no protoplasma do parazita, tanto a fresco, como nas prepara- ixodidae. We also failed to find ectoparasi- tes on any of the four specimens. The parasite was studied in fresh prepa- rations, under coverslip and in hanging drops, as well, as in dry bloodsmears fixed in me- thylated alcohol and stained by Giemsa's fluid. It is essentially endoglobular being observed in fresh preparations, when still young, in the shape of small rounded bodies, not more than two mikra in diameter, inside and near to one end of the red bloodcells. They con- sist of a finely alveolar protoplasm of pale yellow colour enclosing a small rounded nu- cleus. In Giemsa's preparations they appear as small ringshaped or polygonal masses, stained pale blue, with rubycoloured particles of chromatin lying in the centre or more pe- ripherically; sometimes a small vacuole is also (Plate 3, Fig. 1, 2, 11 a, b, 120455 While the evolution is progressing the pa- found. rasite takes a more elongated shape curling around the nucleus; at an early periode one detects in the forms belonging to the schizo- gonic cycle the division of the nucleus and the apparition of granules of dark brown pig- ment. (Plate 3, Fig; 4, 5, 12 bjo): The influence of the parasite on the red bloodcells appears soon: the colour becomes paler, the nucleus is deformed, the cell in- creases and its outlines become less regular. It may attain 19:11 mikra while the normal While continuing its growth the parasite includes dimensions never exceed 15:9 mikra. completely the nucleus which becomes roun- ded; the ends of the parasite may unite so as to form a perfect ring. In later stages the protoplasm of the pa- rasite shows — in fresh, as well as in dry and stained preparations — a varying number of chromatin corpuscles and granules of pig- ment corresponding in number to the deve- ções córadas, numero variavel de massas de cromatina e granulos de pigmento, em proporção com o dezenvolvimento delle, acu- mulados quazi todos em um ponto do pro- toplasma. Est. 3, figs. 12 e, fe 13 b. Os esquizóntes, em faze mais adiantada de dezenvolvimento se aprezentam sob a fórma de massa de protoplasma cheia de fragmen- tos de cromatina e com mais pigmentos que nas fazes anteriores e ocupam todo ou quazi todo o protoplasma do eritrócito. Est. 3, figs. mes, 9. 11 dels e O numero de massas de cromatina nessas fórmas, não raro excedem a 40. Cada uma corresponde a um futuro merozoito, na oca- zião da completa divizão do parazita. Est. 3, fig. 11 d. Os merozoitos, uma vez formados, se separam e vão parazitar novos eritrócitos. Em um campo de um de nossos preparados elles se encontravam livres entre os globulos. Est. 3, fig. 11 c. Nas preparações a fresco, porém, nunca lográmos observar a passajem dos merozoitos para o plasma ou para os globulos. Os merozoitos, no interior dos globulos ou livres aparecem nas preparações fixadas e córadas com fórma quazi triangular; a fresco, porém, são arredondados e têm a cromatina excentricamente colocada. Não conseguimos determinar o prazo da evolução esquizogonica, por aprezentar sempre o animal as mais variadas fórmas no sangue. Os gametos do Plasmodium diplogossi se distinguem facilmente em machos e femeos. Sua evolução no interior do globulo não é muito diversa da de uma forma esquizogo- nica. Elles, aos poucos, se expandem pelo protoplasma do globulo, cercam, deformando o nucleo, assim como hipertrofiam a celula. ESS, os. 5; 10, 12 te 13d. Os gametos femeos aprezentam um pro- toplasma denso em que se vêm disseminados numerozos pequenos granulos de pigmento, um pouco dezeguais, além de um ou ou- tro vacuolo; o nucleo é reprezentado por massa de cromatina, maior, cercada, ge- ralmente, de numerozos granulos menores. Não raro se vêm ainda, dispersos no proto- plasma do gameto 2 ou 3 pequenas massas 47 lopment and forming a group in one point of the protoplasm. (Plate Fig. 12 c, e, f and 3 b. The schizontes in a more advenced stage of development appear in the form of a mass of protoplasm full of chromatinfragments and with more pigment than in the former stages occupying all or nearly all the protoplasm of the red bloodcell. (Plate 3, fig. 7, 8, 9, 11 d, and 13 c). The number of the chromatin granules in the stages figured there may exceed forty and each one corresponds to a future mero- zoite. (Fig. 11 d) After the dissolution of the schizont these infect new globules. In one of our dry slides. (Plate 3, Fig. 11 c) they were found free between the bloodcells, but in fresh preparations we could never ob- serve the passage of the merozoites in the plasma or in other globules. The endoglobular or free merozoites ap- pear in fixed and stained preparations in nearly triangular shape but in fresh prepara- tions they are rounded, with the chromatine excentrically located. We could not determine the time employed in the schizogonic evolution because the dif- ferent stages were all found at the same time. The gametocytes and macrogametes of the Plasmodium diploglossi are easily distingui- shed. Their evolution inside of the globules is not very different from that of the schizo- gonic form. They expand gradually in the protoplasm of the bloodcells, enclose and de- form the nucleus and produce the hypertro- phy of the cell itself. (Plate 3, Fig. 5, 10, 12 E Sd): The female gametes show a dense proto- plasm containing numerous small and some- what unequal pigmentgranules and also some vacuoles. The nucleus is represented by a nf D = ES de cromatina, muito provavelmente produtos emanados do nucleo. Os gametos femeos se distinguem dos ma- chos pelo tamanho, que é menos avanta- jado, pelo protoplasma pouco denso e muito menos intensamente córavel, pela fina e abun- dante pigmentação e pelo nucleo, que é repre- zentado por pequena massa arredondada, que constitue o centro, a partir do qual se irradiam, disseminando pelo protoplasma, pe- queninas massas de cromatina que formam, em torno delle trama muito delicado. No sangue examinado entre lamina e lami- nula ou em gota pendente, observa-se que, ao cabo de algum tempo os gametos tomam a forma esferica e que o pigmento começa a apre- zentar movimentos que chegam a ser muito intensos, durante algum tempo no gameto ma- cho; nunca, porém, observámos a emissão de flagelos, talvez porque as condições do meio não fossem favoraveis ao fenomeno, pois mui- to rapidamente cessava o movimento do ga- meto, indício da diminuição de vitalidade. Plasmodium tropiduri n. sp. Este parazita só foi estudado até agora em preparados de sangue córados pelo Giemsa. Mao grado todos os esforços, não consegui- mos, até agora, obter animais vivos, infetados para nelles estudar a evolução do parazita. A disseminação da infeção nos tropiduros parece não ser muito vasta, pois, até agora, | não encontrámos um só animal infetado, entre muitos provenientes do Rio, do Xérem, de Bicudos, segundo nos afirmou o dr. Chagas, quazi todos os tropiduros estão infetados. O Plasmodium tropiduri é parazita bem menor que o precedentemente descrito e, ao contrario delle aprèzenta a maior seme- lhança morfolojica com os plasmodios do tipo proteozoma do sangue das aves. Nos globulos infetados, os parazitas são quazi excluzivamente encontrados nas extre- | midades da celula e nesse ponto se processa toda evolução. Não raro, nos eritrócitos em que existem dous parazitas, cada um ocupa uma das extremidades. larger mass of chromatin surrounded generally by other smaller ones. It is not very rare to observe two or three smaller chromatinmasses distributed in the cellplasm which are probably derived from the nucleus. These microgametocytes are distinguished from the macrogametes by their smaller size, the less dense and paler protoplasm, the lar- ger and less abundant pigmentgranules and by the conditions of the nucleus. It consists in a small rounded chromatinmass, forming the centre from which small chromatin partic- les radiate into the protoplasm in the shape of a delicate network. In fresh preparations the gametocytes and macrogametes after some time take a spheri- cal shape and shortly afterwards the pigment begins to show movements which in the for- We could never observe the emission of flagella, pe- mer may become very intense. rhaps because the conditions of the medium were not favourable, as the speedy diminu- tion of the motility seemed to indicate. Plasmodium tropiduri n. sp. The Plasmodium tropiduri has been studied only in bloodsmears stained with Giemsa's fluid, as all our efforts to obtain living infec- Juiz de Féra e S. Paulo, ao passo que em | ted specimens of the host remained unsuc- cessfull. The parasite does not seem to be very wide spread, as we could not find an infected individual amongst a great number of speci- | mens from Rio de Janeiro, Xerem, Juiz de | Fóra and São Paulo, while in Bicudos (State of Minas) Dr. Chagas found almost every individual infected. This plasmodium is much smaller as the one previously described and, in contrast with | it, shows the greatest ressemblance with the Os globulos parazitados pelas formas mais dezenvolvidas do hematozoario aprezentam-se, geralmente, um pouco aumentados de volume e deformados, principalmente na extremidade em que se assesta o parazita. Tambem o nu- cleo não escapa á influencia do parazitismo e aprezenta-se, ás vezes, lijeiramente deformado. As formas mais jovens deste plasmodio não se diferenciam muito das do anterior- mente descrito; são reprezentadas por peque- nos corpusculos arredondados ou em forma de anel, constituidos por diminuta porção de protoplasma córado em azul claro pelo Giemsa, tendo, ás vezes, vacuolo nutritivo e massa de cromatina excentricamente colocada. Est. 3, fig. 14. Caracterizam faze mais adiantada na evo- lução do parazita, as fórmas um pouco maio- res que as precedentes alongadas ou, então, quazi regularmente redondas e ainda sem indícios de segmentação nuclear. Est. 3, fig. 15. As formas pertencentes ao ciclo esquizogo- nico, desde que um pouco mais dezenvolvi- das começam a aprezentar o nucleo fragmen- tado, observando-se nellas pequenos granulos de pigmento. Nenhum indício de divizão mitozica se observa nos esquizóntes, nos quais o maximo de merozoitos pode atinjir a 12. São mais ou menos regularmente arredondados, e apre- zentam-se constituidos por massa de pro- toplasma de contornos irregulares, tendo no interior pequenas massas de cromatina, em numero variavel, proporcional ao seu de- zenvolvimento, até o maximo acima assina- lado; o pigmento aparece nelles aglomerado em um ponto. O diametro das maiores for- mas mais dezenvolvidas não excede a 7 a 8 uu. Est. 3, figs. 16, 17, 18 e 19. Quando o numero de merozoitos atinje ao maximo, acima citado, começa a segmenta- ção do protoplasma, em torno de cada um e assim, constituem-se os merozitos destinados a infeção de novos globulos. Os gametos do Plasmodium tropiduri se distinguem perfeitamente, nos preparados có- rados, pelos seus caracteres proprios em mas- culinos e femininos. Tanto uns, como outros proteosoma of birds. In the infected globu- les the parasites are almost invariably found at the end of the bloodcells where the whole evolution is performed. It is not rare to find in the same globule two parasites, each of which occupies the opposite end of it. The erythrocytes containing the larger for- ms are generally swollen and deformed, prin- cipially at the end where the parasite is located. The nucleus also sometimes shows the in- fluence of the parasite by a slight deformation. The younger stages of the plasmodium do not differ much from the forms described before, being small rounded or ringshaped bodies of protoplasm staining pale blue by Giemsa's method and showing sometimes a nutritive vacuole and an excentrically located (Plate 3, Fig. 14). A more advanced stage of the parasite is chromatine mass. known by somewhat larger forms, either al- longated or almost regularly rounded but not showing yet any indication of segmentation of the nucleus. (Plate 3, Fig. Fig. 15). Still later forms show fragmentation of the nucleus and small granules of pigment. There is no indication of mitosis in the schizogonic forms in which the maximum of merozoites may attain 12. They are more or less regularly rounded and constituted by a mass of proto- plasm, including small masses of chromatin in varying number up to the maximum of twelve; the pigment is collected in one place anf their diameter does not exceed 7 to 8 mikra. (Plate 3, Fig. 17, 18,19). When the division of the chromatin is completed the segmentation of the protoplasm takes place forming the merozoites. The microgametocytes and female game- es are easily distinguished by their aspect. The macrogametes show a very regular ont- line and measure 6-8 mikra, the protoplasma säo sempre encontrados nas extremidades das celulas, aplicados de encontro ao nucleo. Os gametos femeos adultos têm a forma esferica muito regular, medem 7 a 8 u de dia- metro; o protoplasma é denso, bastante homo- jeneo e córa-se em azul intenso pelo Giem- sa. Em um ponto qualquer delle, geralmente na periferia se encontra o nucleo, reprezenta- do por diversas placas de cromatina reunidas umas ás outras, formando uma massa unica. O pigmento se acha irregularmente distri- buido por todo o parazita, sob fórma de pe- quenas massas arredondadas, de colorido par- do escuro Est. 3, tig. 20: Os gametos masculinos são, em geral, maiores que os femininos; não raro atinjem 9 u de diametro, são arredondados como aquelles, porém não tão regularmente. O pro- toplasma córa-se muito fracamente em azul pelo Giemsa e o nucleo é constituido por delicado trama de bastonetes de cromatina que ocupa grande parte do protoplasma. O pigmento aparece sob fórma de pequenos blocos alongados, pouco numerozos distribui- dos no protoplasma. Est. 3, fig. 21. Os gametos macho e femeo, muito clara- mente distintos, quando completamente de- zenvolvidos, já o são igualmente em periodo menos adiantado de evolução, se bem que menos nitidamente. Nao têm então a for- ma arredondada e se parecem muito com as fórmas esquizogonicas; distinguem-se dellas, porem, pela prezença de nucleo unico e pela disseminação do pigmento no protoplasma. As diferenças sexuais, si bem que igual- mente menos acentuadas são já bastante pa- tentes nelles. 50 being dense, homogeneous and intensely blue when stained by Giemsa's method. The nu- cleus is found in any place, mostly in the periphery, and constituted by several frag- ments of chromatin agglomerated in a single mass. The pigment is irregularly distributed in the whole body forming small rounded masses of darkbrown hue. (Plate 3, Fig. 20). The microgametocytes are generally larger than the female gamete attaining sometimes 9 mikra; their shape is less regularly rounded. The protoplasm stains a pale blue and the nucleus is formed by a few allongated chro- matin masses, equally distributed in the cell (Plate 3, Fig. 21). The two forms may be distinguished al- ready in the less advanced periods though not quite as easily as in the adult stage. The earlier stages are not so regularly roun- ded and ressemble much the schizogonic forms. plasm. They are however recognized by the single nucleus and by the dissemination of the pigment. Both the forms are also found always in the ends of the bloodcells and near to the nucleus. Literatura Dr. P. H. Simond, Contribution à l’étude des Hématozoaires endoglobulaires des Reptiles. Ann. Inst. Pasteur T. XV., 1901, p. p. 319, 350. A. Castellani and A. Willeg, Spolia Zey- lanica, Vol. II. Part. VI p. p. 84, 1904. Ob- servations on the Haematozoa of Vertebrates in Ceylon. G. Bonet, Comp. Rend. de la Société de Biologie p. 43, 1904. Sur deux hémocyto- zoaires pigmentés des reptiles. C. M. Wenyon. Report of Travelling Pa- thologist and Protozoologist. Third. Report of the Wellcome Besearch Laboratories at the Gordon Memorial College Khartoum 1908. Plasmodium mabuiae pag. 146. PI. XII, fig. 1, 124. Id. Id. Hemocystidium najae, pag. 150. Pl. XIV, fig. 117,21.) PL XV; fig: Ao: s MEMORIAS DO INSTITUTO OSWALDO CRUZ Tomo | - 1909 ESTAMPA 3 Estudos sobre a tuberculoze pelo Dr. A. Fontes, Assistente no Instituto. Etudes sur la tuberculose par le Dr. A. Fontes, Assistent à l’Institut. e I Introdução: Considerações gerais e sumarias sobre a terapeutica e imunidade da tuberculoze. Auzencia de sôros especificos. Razões que a expli- cam. Toxinoterapia Reabsorção dos germens: por via venoza, por via linfatica (cazo particular da via intesti- nal). Imunidade natural para a tuberculoze; razões de ordem quimica que a explicam. Orientação seguida. Investigações sobre a natureza das cêras e gorduras extraidas do bacilo. Saponificação pelos alcooles — Fe- nomeno da acido rezistencia ; diagnostico diferencial mi- croscopico entre tuberculozos e pseudo tuberculozos. Estudo das granulações bacilares, sua eletividade para o Gram. Forma granular de Muchs como forma de rezistencia. Existencia de fermento hidrolizante no ganglio tuber- culozo — Extração do fermento — Diminuição do nu- mero de bacilos da tuberculoze zz vzfro em virtude desse fermento — Saponificação da cêra dos bacilos por meio desse fermento. O capitulo — Tuberculoze — em patolojia tem sido investigado quazi que sob todos os aspetos e, se é verdade que as conquistas da ciencia são nelle numerozas, não é menos real que muito pouco tem sido obtido em re- lação á terapeutica e 4 imunização. E’ que aí, como geralmente se reconhece, intervem como fator de preponderancia quazi absoluta, o terreno em que evolve a infeção e que pela imperfeição dos metodos atuais de in- vestigação, permanece enigma insoluvel, ocul- tando reações de ordem quimica que a razão I Introduction: Considérations générales et sommaires sur la thérapeutique et l'immunité de la tuberculose. Manque de sérums spécifiques — Raisons qui l’expli- quent. Toxinothérapie — Réabsorption des germes: par voie veineuse, par voie lymphatique (cas particulier de la voie intestinale). Immunité naturelle contre la tu- berculose: Raisons d’ordre chimique qui l’expliquent. Orientation suivie. Recherches sur la nature des cires et des graisses extraites du bacille. Saponification par les alcalis — Phénomène de l'acide résistance; diagnostic differenciel microscopique entre les bacilles tuberculeux et les pseudo-tuberculeux. Etude des granulations bacil- laires. Son électivité pour le Gram. Forme granulaire de Muchs comme forme de résistance. Présence d’un ferment hydrolysant dans le ganglion tuberculeux — Extraction du ferment — Diminution du nombre des bacilles de la tuberculose zz vztro en vertu de ce ferment — Saponification de la cire des bacilles au moyen de ce ferment. Le chapitre — tuberculose — en pathologie a été considéré sous presque tous ses aspects, et si vraiment les conquêtes de la science sont à cet égard très nombreuses, il n’en est pas moins vrai qu’au point de vue de la thé- rapeutique et de l’immunisation les résultats obtenus n’ont pas été bien grands. C'est qu'alors intervient comme facteur prépondérant, presque absolu, le terrain où évolue l'infection et qui, par Pimperfection des méthodes actuelles d’investigation, reste une énigme indéchiffrable, que cache des 52 prevê que se processam, tornando o meio im- proprio á vida do bacilo infetante. De acórdo com as belas conquistas da soroterapia na generalidade das infeções e por analojia dellas, tudo tem sido feito em relação á tuberculoze e, apoz um curto pe- riodo de esperanças, tudo tem fracassado. Via que foi aberta pelas investigações de Richet e Hericourt, perlustrada mais tarde por Maragliano e Marmoreck, conta no en- tretanto numerozissimos colaboradores que, por premio só têm obtido a deziluzão lan- çada pela clinica. A toxinoterapia, proposta por Koch, em- pregada hoje em dia com mais criterio, por ser melhor conhecida, daria rezultados ab- solutamente concludentes, se não existira um quid que os experimentadores não têm podido explicar e que consiste na faculdade do organismo tuberculozo reajir beneficamente á inoculação da tuberculina, faculdade que em determinados cazos, infelizmente raros, transformam a intervenção do medico em intervenção quazi milagroza. No emtanto o numero de cazos em que o tratamento não aproveita é grande e bastantes vezes são re- jistados insucessos. Entra em ação o fator terreno, que quando modificado prepara o sucesso do tratamento especifico (regimen de sanatorios). Falta ás tuberculinas qualquer coiza que facilite seu mister terapeutico; as tuberculinas destróem o tecido tuberculozo ; o bacilo, porém, permanece intato quando li- bertado. O mesmo insucesso geral permanece no terreno das investigações sobre imunidade na tuberculoze. Desde as inoculações de cultu- ras de bacilos acido-rezistentes banais ás de adenopatias escrofulozas até as injeções de culturas de tuberculoze atenuadas por nu- merozissimos processos, e entre esses, até aquelle que mais tem prendido a atenção dos especialistas, a bovo-vacina de Behring, quando muito mostram esses metodos a pos- sibilidade de se obter um aumento de rezisten- cia do organismo experimentado á inoculação de dóze de bacilos seguramente infetante. A ques- tão da via de introdução tem sido tambem réactions d'ordre chimique que la raison nous permettra de prévoir, en rendant le milieu impropre à la vie du bacille infectant. Encouragée par les belles conquêtes de la sérumthérapie dans la plupart des infections, et en employant des procédés analogues la médecine moderne a tout fait pour la tuber- culose; mais, aprês une courte période d'es- pérances, tous les résultats ont êté négatifs. Ces travaux commencés par les recherches de Richet et Héricourt, enrichis plus tard par Maragliano et Marmoreck, comptent cepen- dant un grand nombre de collaborateurs qui n'ont recueilli que désillusion comme prix de leurs efforts. La toxinothérapie, proposée par Koch et employée avec plus de soin aujourd’hui qu’elle est mieux connue, donnerait des résultats tout à fait concluants s’il n’y avait un quia que les expérimentateurs ne sont pas arrivés à expliquer; à savoir, la propriété qu'ont les organismes tuberculeux de réagir favorable- ment sous l'effet d'une inoculation de tuber- culine; propriété qui, en de certains cas, ma- lheuresement trop rares, transforment l’inter- vention du médecin en une intervention pres- que miraculeuse. Mais, l'effet du traitement ne se produit que rarement et l’on compte jus- qu'aujourd'hui un grand nombre d’insuccès. Le facteur terrain entre en jeu; lorsqu'il est convenablement modifié, il prépare le succès du traitement spécifique (régime des sanato- riums). Il manque aux tuberculines un je ne sais quoi qui facilite leur action thérapeutique; elles détruisent le tissu tuberculeux, mais le bacille, reste intact, une fois libre. Le même insuccès général se fait sentir sur le terrain des recherches sur l’immunité de la tuberculose. Si nous considérons les inocula- tions de cultures de bacilles banaux résistants aux acides jusqu’a celles d’adénopathies scro- fuleuses et de cultures de tuberculose atténuées par de nombreux procédés, parmi lesquels ce- lui qui a le plus attiré l'attention des spécialis- tes, la bovo-vaccine de Behring, nous verrons que ces méthodes prouvent tout au plus la possibilité d'obtenir une augmentation de ré- sistance de l’organisme, soumis à Pinoculation d'une dose de bacilles sûrement infectante. La 53 explorada; via intra-venoza (Behring), via in- testinal (cazo particular da via linfatica) (Cal- mette), têm dado rezultados que, no emtanto, mostram sempre que a reabsorçäo do bacilo não se faz facilmente e que na maioria das vezes ella não se observa, permanecendo os bacilos intatos. Isto explica o insucesso da soroterapia ainda que incluidos na celula fa- gocitaria. E a razão desse fenomeno existe na es- trutura quimica do bacilo, na prezença nelles de substancias que não são assimilaveis nor- malmente e que protejem o substratum vital do germen contra as substancias que o or- ganismo deveria secretar, reajindo assim á infeção, destruindo o elemento invasor. E' a camada cérea, são os corpos de na- tureza graxa que existem no microbio da tu- berculoze que se opõem á destruição do ba- cilo; sua função protetora nos é cabalmente revelada pelos metodos de coloração especiais aos acidos rezistentes; junte-se essa função que proteje o bacilo a ganga de hidroceluloze, os toxicos por elle fabricados e cuja natureza complexa tem sempre escapado ás investiga- ções dos observadores, e veremos a razão da produção da celula gigante com todos os carateristicos da lezão tuberculoza reveladas no tuberculo microscopico. Encarada a essa luz, a infeção tubercu- loza se nos aprezenta como molestia local, como a afeção de um orgão. Nelle se de- vem passar as reações de defeza e isso nol- o mostra não só a clinica, como a experi- mentação, revelando-nos, de todas as rea- ções a mais facilmente apreciavel — a con- jestão peri-tubercular. E’ este o primeiro es- tado do processo de necroze do tuberculo que terminará pela eliminação do tecido morto transformado em puz. A tuberculoze mata pela destruição do tecido nobre do orgão; a terapeutica da tuberculoze deve consistir na destruição do bacilo no interior da celula doente. Entretanto a infeção tuberculoza é na maioria dos cazos espontaneamente paraliza- da e frequentes vezes curada, excluzivamente á custa do organismo infetado. E” banal: question de la voie de Pinoculation a été aussi étudiée: Voie intraveineuse (Behring), voie intestinale (cas particulier de la voie lymphati- que), (Calmette) ont donné des résultats prou- vant toujours que la résorption du bacille ne se fait pas facilement et qu'on ne l’observe pas le plus souvent: les bacilles demeurent intacts, même inclus dans la cellule phagocy- taire. C'est ce qui explique l’insuccès de la sérumthérapie. La raison de ce phénomêne provient de la structure chimique du bacille, de la présence en lui de substances qui ne sont pas normalement assimilables et qui pro- tegent le substractum vital du germe contre les substances que l’organisme devrait sécré- ter, de sorte qu'il réagit contre l'infection et que l'élément envahisseur est détruit. C'est la couche cireuse, ce sont les corps gras du bacllle de la tuberculose qui s'oppo- sent à sa destruction; sa fonction protectrice nous est clairement révélée par les méthodes spéciales de coloration résistantes aux aci- des; ajoutez à cette fonction qui protège le bacille, les toxiques qu’il fabrique, la gangue d'hydrocellulose qui l'enveloppe et dont la nature complexe a toujours échappé aux in- vestigations des observateurs, et nous com- prendrons la raison de la production de la cellule géante, avec tous les signes caractéris- tiques de la lésion tuberculose révélés dans le tubercule microscopique. Considérée a ce point de vue, l'infection tuberculeuse nous apparait comme une mala- die locale, comme l'affection d’un organe. Celui-ci doit présenter des réactions de dé- fense, qui nous sont d’ailleurs révélées par la chimie et l’expérimentation, grâce auxquel- les nous observons la réaction la plus facile à observer: la congestion pérituberculaire. C'est là le premier stage du procédé de la nécrose du tubercule, qui se terminera par l’eli- mination du tissu mort et sa transformation en pus. La tuberculose tue par la destruction du tissu noble de l’organe; la thérapeutique de la tuberculose doit consister dans la destruction du bacille à l'interieur de la cellule malade. Toutefois, dans la plupart des cas, la tuber- culose est paralysée spontanément et souvent même guérie, rien qu'aux dépens de l’organis- PR. ne frase a de todas as infeções é a tuberculoze a mais curavel —, e as autopsias confirmam- na sempre. E' que o organismo reaje á in- feção por dois processos de cura: pela escle- roze do tuberculo ou pela calcificação delle. A evolução da lezão mostra comtudo que a escleroze precede sempre á calcificação. A analize dos tuberculos calcificados mostra que os sais de calcio, fosfato e a cal em natureza se depositam sobre o bacilo em camadas con- centricas que o tem por nucleo, abundando no interior desses tuberculos cristais de natu- reza graxa. Muitas vezes não se pode mais revelar a existencia de bacilos no interior dos tubercu- los calcificados, sinal evidente de sua des- truição. A ação esclerojena corre por conta dos toxicos bacilares (ação de tuberculina de Koch; produtos esclerojenos extraidos do ba- cilo, cloroformobacilina de Auclair), a reação calcificante corre por conta das substancias não reabsorviveis do bacilo (cêras e gordu- ras) conforme pensamos. Foi nesse sentido que dirijimos nos- sas investigações, de acôrdo com a orienta- ção que nos foi fornecida por G. Cruz, nosso mestre. Suas primeiras experiencias (1900) vi- zaram obter a reabsorção do bacilo, imuni- zando os animais por via subcutanea, primei- ramente contra as gorduras animais (oleo de figado de bacalhão e gordura humana) mais tarde com as gorduras extraidas do bacilo. Verificou então que se essa reabsorção se dava, era de tal modo lenta que, praticamente, podia ser considerada como não existindo. De acôrdo com essa verificação poderia- mos tentar a reabsorção dos bacilos com o fim de imunização, utilizando-nos da via intestinal, segundo a doutrina de Calmette, rezultado que seria obtido com a saponifica- ção desses corpos pelos sucos pancreaticos, especialmente pela esteapsina, como mostra- ram Lewkowitsch e Macleod, pelos sais bi- liares, e talvez ainda pela lipaze do sangue, como se dá com a monobutirina, como re- zulta das investigações de Victor Hanriot. Isso entretanto não sucede porque as gor- me infecté. «De toutes les infections, la plus fa- cilement guérissable est la tuberculose». C'est, la phrase bien connue, et toujours confirmée par les autopsies. C'est que l’organisme réa- git de deux manières contre l’infection: par la sclérose du tubercule ou par sa calcification. L’évolution de la lésion montre, cependant, que la sciérose précède toujours la calcification. L'analyse des tubercules calcifiés nous prouve que le phosphate de chaux et la chaux en nature se déposent sur le bacille en cou- ches concentriques dont il constitue le noyau; l'intérieur de ces tubercules abonde en cris- taux de nature graisseuse. Souvent on ne peut plus vérifier existence de bacilles à l’intérieur des tubercules calcifiés, preuve évidente de leur destruction. L’action sclerogène est attribuée aux toxiques bacillai- res (action de la tuberculine de Koch; produits sclérogènes extraits du bacille: chloroformo- bacilline d'Auclair). La réaction calcifiante est produite, selon nous, par les substances du bacille qui ne se peuvent résorber (cires et graisses). C'est dans ce sens que nous avons dirigé nos recherches, en suivant l'orientation qui nous a été fournie par notre maître G. Cruz. Dans ses premières expériences, réalisées en 1900, il avait cherché à obtenir la résorp- tion du bacille en injectant les animaux par voie sous-cutané, d’abord avec des graisses animales (huile de foie demorue et graisse humaine) plus tard au moyen des graisses extraites du bacille. Il vérifia alors que cette résorption s'effectuait avec une telle lenteur qu’elle pouvait être considérée pratiquement nulle. Nous pourrions, en vue de cette vérification, tenter la résorption des bacilles, dans un but d'immunisation, en nous servant de la voie intestinale, selon la doctrine de Calmette, ré- sultat qu’on obtiendrait par la saponification de ces corps par les sucs pancréatiques, en particulier par la stéapsine comme [ont montré Lewkowitsh et Macleod, par les sels biliaires et peut-être encore par la lipase du sang, comme il arrive avec la monobutyrine, comme on le déduit des investigations de V. Hanriot. Cela n'arrive pourtant pas, parce que les graisses ont leurs ferments spécifiques (Fischer, Pawlow). == duras tem seus fermentos especificos (Fischer, Pawlow). De acórdo com essa orientaçäo impunha-se o conhecimento exato da natureza quimica das substancias gordurozas existentes no ba- cilo da tuberculoze e que de ha muito ser- viam para explicar o fenomeno da acido- rezistencia que era atribuido unicamente a ellas. Hammerschlag, no emtanto, já em 1889 reconhecera que no bacilo da tuberculoze existe substancia de natureza albuminoide que possue a propriedade de rezistir aos aci- dos, quando corada. Modernamente, Auclair e Paris provaram que a acido-rezistencia é fenomeno complexo dependente da acido-re- zistencia parcial de diversos componentes do corpo do bacilo. Com o objetivo de reconhecermos a na- tureza dessas gorduras procedemos em um aparelho de Sohxlet ao esgotamento de baci- los da tuberculoze esterilizados pelo calór e secos, tratando-os, sucessivamente, pelos se- guintes dissolventes das gorduras: xilol, al- cool a 950, eter e cloroformio. Os bacilos colocados entre duas camadas de algodáo de vidro eram sujeitos 4 açäo dos dissol- ventes, na ordem acima indicada até que se náo obtivesse reziduo pela evaporaçäo de 10cc do dissolvente empregado e que era colhido acima do algodáo de vidro, e até o ensaio de Lightfood (ensaio de canfora) mostrar-se negativo. Os produtos obtidos apoz o es- gotamento eram filtrados em véla de porce- lana e os reziduos bacilares examinados ao microscopio. Esses reziduos bacilares perma- necem acido-rezistentes até final tratamento pelo cloroformio; o aspeto, porém, dos ba- cilos modifica-se, aprezentando-se elles mais finos e mais granulozos, como se tivera ha- vido perda de substancias existentes no corpo microbiano intermediarios d'aquellas granu- lações. Dos produtos extraidos pelo xilol, um é precipitavel pelo alcool absoluto em excesso. Aprezenta-se sob o aspeto de substancia pul- verulenta, branco-amarelada. Esse precipitado colhido sobre um filtro = 3 Nous avions donc à rechercher quelle était exactement la nature chimique des substan- ces grasiseuses contenues dans le bacille de la tuberculose, lesquelles servaient depuis long- temps à expliquer le phénomène de la résis- tence aux acides qui leur était exclusivement attribuée. Cependant, en 1889, Hammerschlag avait déjà vérifié qu’il existe dans le bacille de la tuberculose une substance de nature albumi- noide qui possède la propriété de résister aux acides, quand elle est colorée. De nos jours, Auclair et Paris ont prouvé que la résistance aux acides est un phénomène complexe, qui dépend de la résistance partielle aux acides de plusieurs composants du corps du bacille. Dans le but de reconnaître la nature de ces graisses, nous avons égoutté dans un appareil de Sohxlet les bacilles de la tuber- culose stérilisés par la chaleur et secs, en les traitant successivement par les dissolvants qui suivent: xylol, alcool à 950, éther et chloro- forme. Les bacilles placés entre deux cou- ches d’ouate de verre étaient soumis à Pac- tion des dissolvants, dans l’ordre ci-dessus mentionné, jusqu’à ce qu'on n’obtins plus de résidu par l’évaporation de 10cc. du dissol- vant employé et qui était recueilli sur Pouate de verre, et que l'essai de Lightfood (essai du camphre) donnât un résultat négatif. Les produits obtenus après l'égouttement étaient filtrés à travers une bougie de porcelaine et les résidus bacillaires examinés au micros- cope. Ces résidus se conservent résistants aux acides jusqu’au traitement final par le chlo- roforme; mais l’aspect des bacilles se modi- fie, ils deviennent plus minces et plus granu- leux, comme s’il y avait eu une perte dans le corps microbien de substances intermédiai- res entre ces granulations. L'un des produits extraits par le xylol donne un précipité, avec l’alcool en excès. Ce précipité a l’aspect d’une substance pul- vérulente, d’un blanc jaunâtre; une fois re- cueilli sur un filtre et traité par l’éther, il se dissout en partie; il reste sur le filtre un résidu insoluble dans le chloroforme. Si Pon examine au microscope le précipité obtenu de la façon ci-dessus décrite, il appa- a ANUS EURE e tratado pelo eter dissolve-se em parte; sobre o filtro permanece um reziduo insolu- vel no eter e soluvel no cloroformio. O precipitado obtido como acima disse- mos, examinado ao microscopio aprezenta-se como constituido por pequenos granulos re- frinjentes (Obj. C e E, Zeiss Oc. 3). Córa- se pelo Ziehl e reziste aos acidos. E’ inso- luvel na agua destilada, agua alcalinizada e alcool, quer a frio, quer nos respetivos pon- tos de ebulição. Decompõe-se pelo trata- mento com o acido azotico ao terço, fervente, dando produção de gorduras reconheciveis pelo Sudão. A saponificação dessa substancia pela soda alcoolica mostrou tratar-se de uma cêra em cuja constituição entra um alcool izomero da colesterina, porém diferente da izocolesterina e fitosterina. A separação da porção soluvel no eter da que é soluvel no cloroformio mostra, pela evaporação dos referidos veiculos dois produtos de aspeto diverso: branco-amare- lado a porção soluvel no eter, mais escura a porção soluvel no cloroformio. A pri- meira é uma cêra, a segunda não poude ainda ser caraterizada, dada a pequena quan- tidade obtida. Esses dois produtos diferem ainda pelo ponto de fuzão. A cêra soluvel no eter funde a 54,5 C, o produto soluvel no cloroformio tem para ponto de fuzão 1930 C. O xilol de onde fôra precipitada a cêra pelo alcool absoluto, libertado desse alcool e tratado pela agua, deixa precipitar uma substancia soluvel no eter. Pela evaporação desse dissolvente, cristaliza em tufos de agu- lhas sedozas. E” saponificavel pela soda al- coolizada e sendo fundida em estado crista- lino aprezenta-se, apoz a fuzáo, sob o aspe- to de massas escamozas, nacaradas. A cris- talizaçäo indica acido palmitico. Si em vez - de tratarmos pela agua evaporarmos o xilol em B. M. obter-se-á um produto, que, pelo resfriamento se solidifica com aspeto gordu- rozo, de cór amarela avermelhada. Tem o cheiro de tuberculina um pouco alterado apro- ximando-se do cheiro de mel de abelhas e rait comme constitué par de petits granules réfringents (Obj. Ce E, Zeiss oc. 3). Il se colore sous l’action du Ziehl, résiste aux aci- des et reste insoluble dans l’eau distillée, l’eau alcoolisée et l'alcool, soit à froid, soit à leur point d'ébullition. Il se décompose sous l’action de l'acide azotique au tiers, bouil- lant, et produit alors des graisses reconnais- sables par le Soudan. La saponification de cette substance par la soude alcoolique a montré qu'il s'agissait d'une cire dans la constitution de laquelle il y a un alcool isomérique de la cholestérine différent, toutefois, de l’isocholestérine et de la phytostérine. La séparation de la partie soluble dans Péther d'avec celle qui est soluble dans le chloroforme nous montre, par l’évaporation des véhicules deux produits d'aspect diffé- rent: la partie soluble dans l’éther laisse un résidu blanc jaunâtre; le résidu de l’autre partie est plus foncé. La premier est une cire; quant au second, la quantité obtenue est si petite qu’on n’a encore pu la determiner. Ces deux produits diffèrent encore par leur point de fusion. La cire soluble dans l’éther fond à 54,05 C.; le point de fusion du produit soluble dans le chloroforme est 1930 C. Le xylol, d’où la cire a été précipitée par l'alcool absolu, une fois délivré de cet alcool et traité par l’eau, laisse précipiter une subs- tance soluble dans l’éther. Par l’évaporation de ce dissolvant, elle cristallise en touffes d’aiguilles soyeuses et peut être saponifié par la soude alcoolique; une fois fondu à l’état cristallin, elle se présente, après la fusion, sous l’aspect de masses écaillées et nacrées. Sa cristallisation indique un acide palmitique. Si, au lieu de le traiter par l’eau, on fait éva- porer le xylol en B. M. on obtient un produit qui, en se refroidissant, se solidifie et prend l'aspect d'un corps gras, d’un jaune rougeátre. Il a une odeur de tuberculine un peu alterée, qui rappelle le parfum du miel et a une sa- veur Acre très prononcée. Il fond à 5305, se solidifie à 520 C. et est soluble dans les dis- solvants des graisses. L'épreuve de Lightfood donne un résultat positif, et ne révèle pas la présence de graisses dans les autres dissol- E Pt sabôr acre muito pronunciado. Funde a 5305, e solidifica-se a 520 C; é soluvel nos dissol- ventes das gorduras. O ensaio de Lightfood dá rezultado pozitivo. Esse mesmo ensaio não revela gorduras nos outros dissolventes empregados (alcool, eter e cloroformio). O cloroformio extrae dos bacilos uma lecitina precipitavel pela agua. Retomando os bacilos desengordurados e córando-os pelo metodo de Ziehl verifica- mos que permanecem acido-rezistentes o que está de acôrdo com o que tinha sido obser- vado por Auclair e Paris. Isto nos levou a investigar um metodo de coloração diferen- cial entre os bacilos da tuberculoze e os pseu- do-tuberculozos. Entre estes a acido-rezisten- cia é tambem relativa e varía, desde o tempo de cultura, até a orijem do bacilo estudado. A dificuldade consistia, pois, em encontrar- mos um ajente descorante capaz de produzir os seus efeitos sobre os para-tuberculozos, poupando o bacilo da tuberculoze verdadeira. Outro caminho seria acharmos uma materia corante eletiva que os diferenciasse nitida- mente. Si apoz a ação descorante da mistura de alcool absoluto 1 parte e acido acetico 2 par- tes fizermos o Gram sobre o preparado, os bacilos paratuberculozos tomarão intensamente a côr bazica, aprezentando volumozas granu- lações condensadas. Os bacilos da tubercu- loze se comportam de maneira diversa; con- servar-se-ão corados em vermelho e, as gra- nulações intensamente coradas pelo violeta de genciana, aprezentar-se-ão esparsas. Córando um preparado de tuberculoze e de pseudo- tuberculoze pelo Ziehl e descorando-o rapi- damente por uma solução acida (acido azo- tico ao terço, acido sulfurico ao quarto) si o tratarmos por uma solução aquoza de azul de metilenio e si fizermos sobre esta ajir uma solução de acido picrico, o azul precipitará sob forma cristalina. Esses cristais são soluveis na agua, pouco soluveis no alcool etilico e bastante solu- veis no alcool metilico. Si examinarmos então o preparado veremos que os bacilos se-aprezentam mais descorados em relação vants employés (alcool, éther et chloroforme). Le chloroforme extrait des bacilles une léci- thine qui donne avec l’eau un précipité. En reprenant les bacilles privés mainte- nant de graisse et en les colorant par la mé- thode de Ziehl, nous vérifions qu’ils se con- servent résistants aux acides, ce qui est d’ac- cord avec les observations d'Auclair et Paris. Cela nous a conduits à chercher une méthode de coloration différentielle entre les bacilles de la tuberculose et les pseudo-tuberculeux. Parmi ceux-ci, la résistance aux acides est aussi relative et varie dês le temps de culture jusqu’à l’échantillon du bacille étudié. La dif- ficulté consiste donc à trouver un agent dé- colorant capable de produire son effet sur les paratuberculeux, tout en épargnant le bacille de la vraie tuberculose. Nous pourrions aussi tâcher de trouver une matière colorante élec- tive qui les différentie nettement. Si, après l’action décolorante du mélange de 1 partie d'alcool absolu et 2 parties d’acide acétique sur une préparation colorée par le Ziehl nous faisons le Gram, les bacilles para- tuberculeux prendront entièrement la couleur violette, en présentant de volumineuses gra- nulations condensées. Les bacilles de la tu- berculose se comportent d’une façon difféfente. Ils conservent la couleur rouge, et les granu- lations fortement colorées par le violet de gentiane, apparaitront disséminées. En colo- rant une préparation de tuberculose et de pseudo-tuberculose par le Ziehl et en la dé- colorant rapidement par une solution acide (acide azotique au tiers, acide sulfurique au quart) et si nous la traitons par une solution aqueuse de bleu de methylène dans laquelle verse une solution d’acide pricrique, le bleu se deposera sous la forme cristalline. Ces cristaux sont insolubles dans l’eau, peu solu- bles dans l’alcool ethylique et assez solubles dans l’alcool methylique. Si nous examinons alors la préparation, nous verrons que les ba- cilles se présentent plus décolorés, par rap- port au Ziehl, qu'avant l’action de l’acide pi- crique et que, parmi les pseudo-tuberculeux, quelques uns apparaissent colorés en violet. On comprend que l’acide picrique ait provo- qué une décoloration plus énergique, non 58 ao Ziehl que antes da açäo do acido picrico e que os pseudo-tuberculozos se aprezentam alguns córados em violeta. Compreende-se que o acido picrico tenha determinado esse descoramento mais enerjico, não só por sua função de acido, como por deslocar o Cl da molecula do azul de metilenio. Restava investigar si o picrato de azul de metilenio precipitado possuia propriedade de coloração eletiva para os pseudo-tubercu- lozos. A mistura da solução de Ziehl e emulsão concentrada em glicerina e agua do picrato de azul de metilenio, aprezenta a particula- ridade interessante de córar a quente em ver- melho, especificamente, os acido-rezistentes (tu- berculoze ou pseudo-tuberculoze) ao passo que o nucleo das celulas do material exami- nado e os outros bacterios que ahi possam existir (caso particular do escarro) coram-se em violeta. O protoplasma das celulas con- serva-se rozeo. À diferenciação faz-se pelo alcool-acetona. O tratamento pelo Lugol, apoz a ação da mistura acima referida, parece modificar as condições de coloração do preparado. Con- seguimos, assim, o descoramento completo de algumas amostras de pseudo-tuberculoze apoz a ação do Lugol e alcool-acetona. Nessas condições a tuberculoze conserva-se vermelha com granulações violetas, todo o resto da preparação descora-se dando lugar a que se proceda á coloração do fundo por qualquer côr de contraste. Melhor rezultado observámos, porém, uzando em vez do picrato de azul de meti- lenio, o cristal violeta ou a violeta de gen- ciana fenicados. Essas côres aprezentam um gráo maior de eletividade para as granula- ções dos bacilos. Esse metodo nos deu magnificos rezul- tados, trazendo real vantajem no diagnostico diferencial. O alcool-acetona, que é o desco- rante empregado, mostra-se capaz de libertar os pseudo-tuberculozos da fucsina, ao passo que os tuberculozos verdadeiros a conservam, aprezentando-se córados em vermelho. As granulações coradas em violeta contrastam seulement parcequ'il agit comme acide mais aussi il sépare le Cl de la molécule du bleu de methylêne. Il restait à voir si le picrate du bleu de methylêne, une fois précipité, possédait la propriété de coloration élective vis à vis des pseudo-tuberculeux. Le mélange de la solution de Ziehl avec Pémulsion concentrée du picrate de bleu de methylêne en glycérine et eau présente l’inté- ressante particularité de colorer en rouge, à chaud, spécifiquement, les bacilles résistants aux acides (tuberculose ou pseudo-tuberculose) tandis que le noyau des cellules du matériel examiné et les autres bactéries qui peuvent par hasard s'y trouver (cas particulier du cra- chat) se colorent en violet. Le protoplasme des cellules conserve une teinte rosée. La differentiation s'établit par l’alcool-acétone. Le traitement par le Lugol, après l’action du mélange dont nous venons de parler, semble modifier les conditions de coloration de la préparation. Nous avons obtenu ainsi la décoloration complète de quelques échan- tillons de pseudo-tuberculose sous l’action du Lugol et de Palcool-acétone. Dans ces con- ditions, la tuberculose reste rouge, avec des granulations violettes; tout le reste de la pré- paration se décolore, en permettant la colo- ration du fond, par une couleur quelconque. Nous avons obtenu un meilleur résultat en employant au lieu du picrate de bleu de méthylène le cristal violet ou le violet de gentiane phéniqués. Ces couleurs ont une plus grande force d'électivité pour les granu- lations des bacilles. Cette méthode nous a donné des três beaux résultats, en produisant un réel avan- tage dans le diagnostic différentiel. L'alcool acétone, qui est le décolorant employé, est capable de faire disparaitre la fuchsine des pseudo-tuberculeux, tandis que les vrais tu- berculeux la conservent, et présentant une couleur rouge. Les granulations colorées en violet ressortent admirablement à l’intérieur des bacilles. Le bleu de méthylène est très bon pour la coloration du fond. En un mot, nous proposons la méthode suivante comme la meilleure pour la différen- 59 admiravelmente no interior dos bacilos. O | azul de metilenio presta-se muito bem para a coloração do fundo. Propomos, em rezumo, como metodo de escolha na diferenciação microscopica entre os bacilos da tuberculoze e os pseudo-tuber- culozos, o seguinte: A) Córar a quente pela fucsina fenicada de Ziehl, cerca de 2 minutos. Lavar em agua corrente. B) Córar pelo cristal violeta fenicado, du- rante 2 minutos. C) Tratar pelo Lugol. D) Descorar pela mistura: Alcool absoluto 2 partes. Acetona 1 parte. Lavar — Córar por uma côr de contraste (azul de metilenio em solução aquoza). As soluções uzadas em À e B podem ser empregadas em um só tempo, sendo mis- turadas em partes iguais. As preparações assim feitas são, no entretanto, menos niti- das. Os bacilos da tuberculoze aprezentam-se córados em vermelho, mostrando em seu inte- rior granulações esparsas, intensamente cora- das em violeta. Os paratuberculozos aprezentam -se córa- dos em violeta sem orla vermelha, mostrando granulações condensadas. Os microbios de associação (escarro, puz, etc.): pneumococos, stafilococos, streptoco- cos, etc. tomarão o Gram e os outros serão revelados pela côr de contraste (azul de me- tilenio). O mesmo sucederá aos elementos constituintes do material examinado. Acabamos de ver que, si tratarmos o ba- cilo da tuberculoze em condições adequa- das pelo metodo de Gram suas granulações aprezentam a propriedade de reter enerji- camente a materia córante. Si em prepara- dos córados a quente pelo Ziehl e assim for- temente impregnados empregarmos o Gram, mesmo sem lavajem da lamina para a reti- rada do excesso de fucsina, as granulações aprezentar-se-ão intensamente córadas em vio- tiation microscopique entre les bacilles de la tuberculose et les pseudo-tuberculeux : A) Colorer à chaud par la fuchsine phéni- quée de Ziehl, deux minutes environ. Laver dans l’eau courante. Colorer par le cristal violet phéniqué, pen- dant 2 minutes. Traiter par le Lugol. Décolorer par: Alcool absolu 2 parties. Acétone 1 partie. Laver — Colorer avec une couleur de contraste (bleu de méthylène en solution aqueuse). Les solutions dont on se sert pour A et B peuvent être employées en même temps, mélangées, en parties égales; mais les pré- parations sont, en ce cas, moins nettes. Les bacilles de la tuberculose auront une coloration rouge, avec, à l'interieur, des gra- nulations fortement colorées en violet. Les para-tuberculeux apparaissent colorés en violet, et montrent des granulations condensées. Les microbes d’association (crachat, pus, etc.): pneumocoques, staphylocoques, strepto- coques etc. prendront le Gram et les autres se- ront révélés par la couleur de contraste (bleu de méthylêne). Il en sera de même pour les éléments constitutifs du matériel examiné. Nous venons de voir que si nous traitons le bacille de la tuberculose dans des condi- tions adéquates, par la méthode de Gram, ses granulations présentent la propriété de retenir énergiquement la matière colorante. Si, dans des préparations colorées à chaud par le Ziehl et, par suite, fortement tein- tées, nous employons le Gram, même sans laver, pour retirer l’excès de fuchsine, les granulations apparaitront entièrement colorées en violet. Il en sera de même si cette colo- ration est faite en sens inverse: les granula- tions se colorent en violet et le reste du bacille en rouge. Cette séconde méthode ne donne cependant pas des préparations aussi nettes que la première. Il en sera de même si nous faisons le mélange des matières co- lorantes sur la lame, colorée à chaud, après l’action du Lugol si nous faisons la déco- loration par l’alcool absolu ou l’alcool acétone. 60 leta. O mesmo sucederá si essa coloração fôr feita em sentido inverso: as granulações córam-se em violeta e o resto do bacilo em vermelho. Esse segundo modo de proceder não dá, comtudo, preparações tão nitidas quanto o primeiro. O mesmo sucederá ainda, si fizermos a mistura das materias corantes e sobre a lamina córada a quente, apoz a ação do Lugol descorarmo-la pelo alcool absoluto ou alcool acetona. Por outro lado, si em preparações córadas pelo Ziehl fizermos ajir rapidamente o cris- tal violeta, nem todas as granulações tomam a materia corante; vêm-se, então, no corpo do bacilo, intensamente córado em vermelho, pontos refrinjentes, brilhantes, que reprezen- tam as granulações não córadas. Infere-se disso que essas granulações tem maior ele- tividade para a materia corante do metodo de Gram do que para a fucsina e que não se trata de uma superpozição de côres e sim de uma propriedade eletiva. Um outro argumento rezulta da observa- ção de espaços menos córados nos bacilos coloridos só pelo Ziehl e que antigamente eram considerados diversamente como espo- rios ou como vacuolos. Nas culturas homojeneas de tuberculoze onde a biolojia do bacilo é fortemente mo- dificada, em virtude de adaptação forçada a essa nova condição de vida, as granulações prestam-se muito para estudo, especialmente nas formas ramozas ou actinomicozas. Aprezentam-se aí como granulos (oc. comp. 12, Zeiss) incluidos em um espaço bem limitado, de contornos nitidos. As vezes fazem saliencia no limite externo do bacilo, como se devessem em breve ser es- pulsos, o corpo do bacilo aprezenta-se mais grosso e a substancia que se córa em ver- melho e que envolve diretamente o granulo mostra-se mais delgada; entre elle e o corpo bacilar nota-se pequena orla clara. O numero dessas granulações varia de 1 a 6 em cada bacilo; raras vezes atinge a 8 ou a 10, o que sómente observamos em cul- turas homojeneas de mais de mez. Quando unica, aprezenta-se geralmente no centro do D'un autre côte si nous faisons agir rapi- dement le cristal violet sur des préparations colorées par le Ziehl, toutes les granulations ne souffrent pas l’effet de la matière colo- rante; on voit alors dans le corps du bacille entièrement coloré en rouge, des points ré- fringents, brillants, qui sont les granulations non colorées. On en déduit que ces granu- lations ont une plus grande électivité pour la matière colorante de la méthode de Gram que pour la fuchsine et qu’il ne s’agit pas d'une superposition de couleurs, mais bien d'une propriété élective. On tire un nouvel argument de l’observa- tion des parties moins colorées chez les ba- cilles colorés uniquement par le Ziehl et qui étaient autrefois considérées, soit comme des spores, soit comme des vacuoles. Dans les cultures homogènes de tubercu- lose, où la biologie du bacille est profondé- ment modifiée, en vertu de son adaptation forcée à cette nouvelle condition d’existence, les granulations servent bien mieux à l’étude, surtout s’il s’agit des formes ramifiées ou actinomycosiques. Elles se présentent, alors, comme des gra- nulations (oc. comp. 12, Zeiss) occupant un espace bien délimité, aux contours nets. Elles forment parfois saillie dans le corps du ba- cille, comme si elles devaient bientot en être expulsées; le corps du bacille est plus gros, et la substance qui se colore en rouge et entoure directement le granule, plus mince; on peut voir un petit ourlet clair entre elle et le corps du bacille. Le nombre de ces granulations varie de 1 à 6 par bacille; il n’atteint que rarement 8 ou 10, ce qu’on n’observe, d’ailleurs, que dans les cultures homogènes de plus d’un mois. Lorsqu'elie est unique elle apparait, généralement, au centre du bacille ou à l’un de ses pôles; quand il y en a deux, chacune occupe, en général, l’une des extrémités du bacille; dans les autres cas, elles se disposent en série, rectiligne ou infléchie, selon le plan d'orientation du bacille. Dans les formes bacillaires désagrégées — comme on l’observe aussi dans des cultures anciennes — les granulations se présentent ane Re a bacilo ou em um dos seus pólos; quando duas ocupa geralmente cada uma, um dos pélos do bacilo; nos outros cazos dispõem-se em serie retilinea ou incurvada, seguindo o plano de orientação do bacilo. Nas formas bacilares dezagregadas, como sucede observar-se em culturas antigas, as granulações aprezentam-se, ás vezes, dispostas umas em seguimento ás outras, como strep- tococos, outras vezes esparsas, izoladas. Nas culturas recentes em batata, na tuber- culoze virulenta, modifica-se o aspeto dessas granulações que se mostram muitissimo meno- res. O mesmo se observa, fazendo-se seu estudo comparativo nos escarros de indivi- duos não cavernozos e no dos tuberculozos antigos, cavitarios. Essa diferença é mais sensivel nos escar- ros de tuberculozos sujeitos ao tratamento pela tuberculina, por muito tempo. Nestes ultimos chega-se mesmo a não se encontrar mais bacilos revelaveis pelo Ziehl, ao passo que as granulações raramente faltam e a ino- culação na cobaia revela a existencia de tu- berculoze. O mesmo sucede no puz tuberculozo, como no cazo dos abcessos frios e a forma granular recentemente descrita por Muchs encontra nisso a sua explicação. Daí o in- ferir-se ser a forma granular, senão forma de rezistencia caracteristica, pelo menos a forma de maior rezistencia que o bacilo da tuber- culoze possa tomar. A auzencia de bacilos da tuberculoze ca- raterizaveis pelo Ziehl no puz dos abcessos tuberculozos; a existencia no puz tubercuiozo de granulações e de bacilos revelaveis pelo metodo de Gram e a eletividade das gra- nulações do bacilo para esse metodo de coloração, foram razões que determinaram verificassemos si nos ganglios tuberculozos havia formação de uma substancia capaz de modificar a estrutura do bacilo da tuberculoze ou mesmo de destruil-o. Com esse intuito procedemos in vitro ás seguintes experiencias: Ganglios cazeozos de cobaias tuberculizadas com tuberculoze hu- mana foram triturados e macerados em agua parfois les unes à la suite des autres, comme des streptocoques; elles sont parfois isolées, disséminées. Dans les cultures récentes en pomme de terre, dans la tuberculose virulente, "aspect de ces granulations est modifié; elles sont alors beaucoups plus petites. On peut faire les mê- mes observations en les comparant dans les crachats d'individus non caverneux et dans ceux de tuberculeux anciens, cavitaires. Cette différence est plus sensible dans les crachats des tuberculeux soumis pendant long- temps au traitement par la tuburculine. On arrive même, chez ces derniers, à ne plus trou- ver de bacilles qui puissent être révélés par le Ziehl, tandis que les granulations ne font que rarement défaut et que Iinoculation révelé, chez les cobayes, "existence de la tuberculose. On observe les mêmes phénomènes dans le pus tuberculeux, ainsi que dans le cas des abcès froids, et c’est là que la forme granu- laire décrite dernièrement par Muchs trouve son explication. D'où Pon a déduit que la forme granulaire est, sinon la forme de résistance caractéristi- que, tout au moins la forme la plus résistante que puisse prendre le bacille de la tubercu- lose. é L'absence de bacilles de la tuberculose déterminables par le Ziehl dans le pus des abcès tuberculeux; [existence dans ce pus tuberculeux des granulations et de bacilles que nous révèle la méthode de Gram, et Pé- lectivité des granulations du bacille pour cette méthode de coloration, telles sont les raisons qui nous ont poussés à vérifier s'il se formait dans les ganglions tuberculeux une substance capable de modifier la structure du bacille de la tuberculose ou même de le détruire. Dans ce but, nous avons procédé in vitro aux expériences suivantes: Des ganglions caséeux de cobayes tuberculisés avec de la tuberculose humaine ont été triturés et mis en macération dans de l’eau physiologique glycé- rinée à 10º, et phéniquée à 0,5°/,. Cette émulsion a éte divisée en deux parties qui sont restées dans l’étuve à 380c., l’une pen- dant 48 heures et l’autre pendant 72. Au bout de ce temps, les émulsions ont RE DRAE fiziologica glicerinada a 10°/, e fenicada a 0,5°/,. Essa emulsão foi dividida em duas porções que permaneceram na estufa a 380 c uma, durante 48 horas e outra durante 72 horas. Findos esses prazos foram as emulsões filtradas em algodão e o filtrado uzado então em nossos ensaios. Como testemunhas empregámos ganglios de cobaias infetadas com tripanozomas, que provocam forte reação ganglionar, e como consequencia, adenopatias volumozas. Essas cobaias eram consideradas normais em rela- ção ás infetadas com tuberculoze. Esses ganglios eram igualmente triturados e emul- cionados em agua fiziolojica glicerinada e fenicada e postos a macerar em condições identicas aos ganglios tuberculozos. Por outro lado, nos utilizavamos de emul- são de bacilos de tuberculoze feita em vei- culo identico ao empregado para os extratos ganglionares, para servir de testemunha ao extrato de ganglios normais. Eram as emulsões ganglionares postas em contato com os bacilos tuberculozos, obede- cendo á tecnica abaixo descrita. As contajens foram feitas com oc. 12 Zeiss em laminas coradas pelo metodo que proponho neste trabalho, uzando no entre- tanto como descorante sómente o alcool ab- soluto. As preparações das emulsões bacilares que continham extrato de ganglios tubercu- lozos eram feitas em uma extremidade da la- mina; a outra extremidade era ocupada pela preparação da emulsão que continha o ex- trato de ganglio normal. Assim ficavam as preparações testemunhas em condições iden- ticas de experimentação. Para maior facilidade adotámos a seguinte notação no correr da experimentação : e.g.t. — extrato de ganglios tuberculozos. e.g.n.= extrato de ganglios normais. e.b.t. — emulsão de bacilos da tuberculoze. v. — veiculo (agua fiziolojica glicerinada a 10º e fenicada a 0,5 °/,. été filtrées à travers de l’ouate et le résidu employé dans nos expériences. Nous nous sommes servi, comme témoins de ganglions de cobayes infectés par des try- panosomes qui provoquent une forte réaction ganglionnaire et, en conséquence, de volumi- neuses adénopathies. Ces cobayes étaient considérés normaux par rapport aux cobayes infectés par la tuberculose. Ces ganglions étaient également triturés et émulsionnés dans de l’eau physiologique, glycérinée et phéniquée, et la macération etait faite dans des conditions identiques à celles des ganglions tuberculeux. D'un autre côté, nous nous sommes servis d'une émulsion de bacilles de la tuberculose faite dans les mêmes véhicules employés pour les extraits ganglionnaires, pour servir de té- moin à l’extrait des ganglions normaux. Les émulsions ganglionnaires êtaient mises en contact avec les bacilles tuberculeux, d’a- près le procédé que nous avons décrit. Les comptages ont été faits avec Poc. 12 Zeiss sur des lames colorées par la mé- thode proposée ci-dessus, mais en n’employ- ant comme décolorant que l'alcool absolu. Les préparations des émulsions bacillaires qui contenaient de Pextrait des ganglions tu- berculeux étaient faites sur l’extrémité d’une lame; à l’autre extrémité se trouvait la pré- paration de l’émulsion qui contenait l’extrait du ganglion normal. Les préparations témoins se sont ainsi trouvées dans des conditions identiques d’expérimentation. Pour simplifier la chose, nous avons adopté la notation suivante au cours de l’expérimen- tation : e.g.t. — extrait de ganglions tuberculeux. eso ne » » normaux. e.b.t. — émulsion de bacilles de la tubercu- lose. v. — véhicule (eau physiologique glycérinée a 10°/, et phéniquée à 0,5. Nous avons employé la technique suivante: Les extraits ganglionnaires étaient mélangés avec une émulsion de bacilles de tuberculose humaine faite dans de l’eau physiologique glycérinée a 10%, et phéniquée à 0,5 °/, dans les proportions suivantes: PARES ge Uzámos da seguinte tecnica: Os extratos ganglionares eram misturados a uma emulsão de bacilos de tuberculoze humana feita em agua fiziolojica, glicerinada a 10 °/, e fenicada a 0,5 °/,, na seguinte proporção : N. de bacilos por campo microscpico Experiencia | 48: ios a ca i 2a «utero bl+lece ql. 106 a ARE Tec VE. Experiencia 1 1cc e.b.t. + 1cc e. g. t. 1cc e.b.t. + 5cce.g.t. + 5cc v. 1cc e.b.t. + 1 cc v. (testemunha). Essas misturas, colocadas em tubos arro- lhados com rolhas de borracha permaneciam na estufa a 380 c., sendo ajitadas diariamente e no momento de se fazerem as preparações para as contajens. N. de bacilos x y por campo Experiencia II microscopico e E RUE EN ESA AT TT horas horas horas Porcentagem CCC UE sh cee bree ce UM icce.b t+1cce 0.u iccebl + icce q r reveros o: Expérience I 1cc e.b.t. + 1cc e.g.t. legebrt | Secegt | 5ecyv. 1cc e.b.t. + 1 cc v. (témoin). Ces mélanges étaient placés dans des tu- bes recouverts d’un bouchon en caoutchouc et restaient dans une étuve à 380C. On les agitait tous les jours et au moment de faire les préparations pour les comptages. 64 Experiencia IT lec ep. t. + Lice eee 1cc e.b.t. + 1cc e.g.n. (testemunha). 1cc e.b.t. + 1cc v. (testemunha). Procedeu-se de modo identico ao da Ex- periencia I. Pelo exame desses rezultados vemos que o produto da extração dos ganglios nor- mais não exerce ação sobre os bacilos da tuberculoze; por outro lado, os ganglios tu- berculozos cazeificados contêm uma substan- cia cuja ação se exerce até 120 horas de contato (Exp. I). O pequeno aumento ob- servado no numero de bacilos entre 96 a 120 horas depois (Exp. II) pode ser expli- cado por dezagregação de algum grumo ba- cilar. Tratámos, então, de verificar si essa subs- tancia seria reativada: A) Pela adição de maior quantidade de e. g. t. B) Pela adição de sôro fresco de cobaia nova. A) Ao tubo que continha 1 cc de e.b.t. + cere. e. n. juntou-se Tec de e von. (tubo a); ao tubo que continha 1 cc de e.b.t. + 1 cc de e.g.t. juntou-se 1 cc de e. g.t. tubo b). Médias das contajens feitas 24 horas de- pois da permanencia na estufa a 380 c. Tubo a) = 23,04. Tubo*b):="13:85: Relações entre as contajens feitas antes e depois da nova adição de emulsões ganglio- nares : 31.1 ¿ 234 ont eee Le B) A 0,75 cc do tubo a juntou-se 0,05 cc de agua fiziolojica + 1 cc de sóro fresco de cobaia nova tubo a). A 0,75 cc do tubo b juntou-se 0,05 cc de agua fiziologica + 1 cc de sôro fresco de cobaia nova (tubo b). eso. Médias obtidas 48 horas depois da ação do sóro 4 temperatura de 380 c. Tubo a) — 10,9 bacilos por campo. Tubo b) — 06,2 » » » Expérience II tice e bt -- Tec est lec e.b.t. + 1cc e.g.n. (témoin). lcce.b.t. + 1cc v. (témoin). On a agi de façon identique à celle de PExpérience I. Voici les résultats obtenus : Nous voyons par examen de ces résultats que le produit de l’extraction des ganglions normaux n’a pas d'influence sur les bacilles de la tuberculose; d’un autre côté, les ganglions tuberculeux caséifiés contenaient une sub- stance dont l’action se fait sentir jusqu’à 120 heures de contact (Exp. 1). La petite augmen- tation observée dans le nombre de bacilles de 96 à 120 (Exp. II) peut s'expliquer par la désagrégation d'un grumeau bacillaire. Nous avons ensuite táché de vérifier si cette substance pouvait être réactivée : A) Par l'addition d'une plus grande quantité de est. Par l'addition de sérum frais d'un cobaye jeune. Au tube qui contenait 1 cc de e.b.t. + 1cc e.g.n. on a ajouté 1cc de e.g.n. (tube a); au tube qui contenait 1 cc de e.b.t + 1 cc e.g.t. on a ajouté 1 cc de e.g.t. (tube b). Moyennes des comptages effectués 24 heu- res après une permanence dans l’étuve à 380 c. Tube a). = 23/04. Tube *b).="13;85: Rapports entre les comptages effectués avant et après la nouvelle addition d’émul- sions ganglionnaires : Se mate dot EE Milo! 17.9 : + Ad : B) A 0,75cc du tube a on a ajouté 0,05 cc d’eau physiologique + 1 cc de sérum frais de cobaye (tube a). A 0,75cc du tube b on a ajouté 0,05 cc d’eau physiologique + 1 cc de sérum frais de cobaye (tube b). B) A) 23.4 €. 2. Mo Moyennes obtenues 48 heures après Pac- tion du sérum, à la température de 380 c. Tube a) — 10,9 bacilles par champ. Tube b) == 6,2 » » » pe o Ne Relações obtidas pelas contajens feitas an- tes e depois da ação do sóro: 23,4 à antes 138 — 3 1,73 relacáo entre a e b . 10,9 As depois Fe 1,79 relação entre a) e b) o que indica não ser essa substancia reati- vada por adição de maior quantidade della, nem pelo sôro de cobaia nova. O aquecimento entre 65 e 700c., durante 1 hora destróe essa substancia. E’ o que re- zulta da seguinte tabela: N. de bacilos por campo 24h. | 48h. | 72h. Tubo 1:1cce.b. + 1cce.g.t.| 6,12 | 2,03 | 03,02 on 22) Lecce: lb cornet: (aquecido entre 65 e 700, durante Ahora E 9,03 | 22,00 | 13,00 Dubos; Tec e, b. Ki lec e. g. n. 11,04 | 10,45 | 13,03 Restava indagar si essa substancia, que até então se comportava como fermento, exer- cia sua ação sobre as cêras incluidas no corpo do bacilo. Utilizámo-nos, então, de ganglios tubercu- lozos cazeozos de boi de onde extraimos a substancia ativa do seguinte modo: deter- minado pezo de ganglios tuberculozos ca- zeozos triturados era emulsionado em 5 vezes o seu pezo de agua fiziolojica glicerinada a 10%, e fenicada a 0,5 º/,, sua emulsão permaneceu na estufa por trez dias, sendo depois reduzida em B. M. a 380 C. ao decimo de volume. Depois da emulsão passada em tamiz procede-se á separação dos elementos solidos em suspensão, por centrifugação. A parte liquida, separada por decantação encerra a substancia ativa e deve ser conservada ao abrigo do ar e da luz. Tomando uma pequena porção desse ex- trato glicerinado e tratando-o pelo alcool absoluto forma-se um precipitado que, lavado sobre filtro de papel repetidas vezes pelo al- cool para acarretar as substancias gordurozas nelle soluveis, se redissolve facilmente em agua fiziolojica. Essa substancia em solução mostra ação francamente saponificante sobre a cêra ex- Rapports obtenus par les comptages effec- tués avant et après l’action du sérum: avant = = 1,73 rapport entre a et d après do — 1,79 rapport entre a) et b) ce qui prouve que cette substance n’est pas «reactivée» par l’addition d'une plus grande quantité d'elle-même, ni par le sérum de cobaye. Le chauffage de 65 à 700c, pendant 1 heure, détruit cette substance. C'est ce qu'on déduit du tableau suivant: N. de hacilles par champ 24h. | 48h. | 72h. sone la liceleb. | Wee eat 10129 |) 2/0361 3,02 2: 1 cc e. b. + 1 cc e.g. t. (chauffé pendant 1 aa bk de 65 a 700). . 9,03 | 22,00 | 13,00 Tube 3: 1cc e. b. + 1 cc e. g. n. 11,04 | 10,45 | 13,03 Il nous restait à chercher si cette subs- tance qui agissait, jusqu'alors, comme un fer- ment, exerçait son action sur les cires conte- nues dans le corps du bacille. Nous nous sommes alors servi de ganglion tuberculeux caséeux de bœuf d’où nous ex- trayions la substance active comme suit: Une certaine quantité de ganglions tuberculeux caséeux triturés était émulsionnée en 5 fois son poids d’eau physiologique glycérinée à 10%, et phéniquée à 0,5°/,. Cette émulsion est restée trois jours dans l’étuve; après, elle a été réduite au B. M., à 380 C, au dixième de son volume. Après avoir passé l’émul- sion au tamis, on a séparé les éléments soli- des en suspension par centrifugation. La par- tie liquide, séparée par décantation referme la substance active et doit être conservée à l’a- bri de Pair et de la lumière. En prenant une petite quantité de cet ex- trait glycériné et en le traitant par Palcool absolu, il se forme un précipité qui, aprês avoir été lavé plusieurs fois avec de alcool, sur un filtre en papier, pour faire disparaitre les substances graisseuses solubles qu'il ren- ferme, se dissout de nouveau facilement dans de l’eau physiologique. Cette substance dissoute dans l’eau phy- siologique montre une action franchement sa- isa fee traida pelo xilol do bacilo da tuberculoze, quando permanece na estufa a 380 C. durante 24 ou 48 horas. Dêmos a essa substancia a denominação de tuberculo-ciraze. Uzando tecnica adequada pudemos obter, em virtude dessa saponificação, cristais de palmitina, reunidos em feixes, assim como gra- xas córaveis pelo Sudão e, palidamente, pelo acido osmico. Procedemos do seguinte modo: Um pouco de tuberculo-ciraze dissolvida em agua fizio- lojica, apoz precipitação e lavajem repetida pelo alcool, era posta em contato com um fragmento de cêra de bacilos da tuberculoze, extraida pelo xilol e precipitada pelo alcool absoluto fervente que, mantendo-a dissolvida e em fuzão, devia acarretar as substancias gordurozas soluveis nelle, cazo ellas existissem aí aderentes aos fragmentos de cêra. Como testemunhas empregámos tubos contendo res- petivamente cada um, agua fiziolojica e tuber- culo-ciraze, agua fiziolojica e cêra. Depois de permanecerem em contato na estufa a 380, por 48 horas, foram esses tubos tratados pelo alcool absoluto em excesso e levados á ebulição. Apoz o resfriamento, fil- travam-se os licores alcoolicos em filtros para precipitado. O liquido alcoolico era então tratado por uma solução de soda muito diluida e levada á ebulição. Deixava-se resfriar; tratava-se depois por uma solução muito diluida de acido sulfurico; fervia-se ; deixava-se novamente resfriar. Tra- tava-se pelo eter. Apoz a separação das duas camadas, de- cantava-se a camada eterea sobre um tubo contendo agua distilada. Deixava-se evaporar o eter; quando a evaporação era quazi total, tratava-se pelo Sudão. Examinando em gota pendente encontra- va-se, sómente no tubo que continha cêra e tuberculo-ciraze sobre a superficie do liquido globulos de gordura perfeitamente córados, de mistura com grande quantidade de cristais de materia corante. Depozitando uma gota de eter que sobrenadava á agua em uma lamina, antes de fazer ajir a materia corante, ponifiante sur la cire extraite par le xylol du bacille de la tuberculose, quand il reste dans Pétuve à 380C., pendant 24 ou 48 heures. Nous avons donné à cette substance le nom de tuberculo-cirase. En employant un procédé convenable, nous avons pu obtenir, grâce à cette saponification, des cristaux de palmitine réunis en faisceaux, ainsi que des corps gras pouvant être colorés par le Soudan et, faiblement, par Pacide os- mique. Notre méthode a éte la suivante: Um peu de tuberculo-cirase dissoute dans de l’eau phy- siologique, après avoir été précipiteé et plu- sieurs fois laveé par Palcool, était mise en contact avec um fragment de cire de bacilles de la tuberculose, extraite par le xylol et pré- cipitée par alcool absolu. Avant d’être mise en contact avec la tuberculo-cirase, la cire était traitée par "alcool absolu bouillant qui, la con- servant dissoute et en fusion, devait entrainer les substances grasses solubles dans ce vehi- cule, dans le cas où il y en aurait d'adhérentes aux fragments de cire. Nous nous sommes servi, comme témoins, de tubes contennant, l’un, de l’eau physiologique, et de la tubercu- locirase et l’autre, de l’eau physiologique et de la cire. Après être restés pendant 48 heures a l’etuve à 38º, ces tubes ont été traités par l'alcool absolu, en excès, et amenés au point d'ébullition. Après leur refroidissement, on filtrait les liqueurs alcooliques dans des fil- tres pour précipités. Le liquide alcoolique était alors traité par une solution de soude très diluée et bouillante. On le laissait refroidir et il était ensuite traité par une solution très diluée d’acide sulfuri- que; on faisait bouillir et on laissait refroidir de nouveau, puis, on le traitait par de l’éther. Après la séparation des deux couches, on décantait la couche éthérée sur un tube con- tenant de l’eau distillée. On laissait évaporer Péther; quand l’évaporation était presque to- tale, on traitait par le Soudan. En examinant en goutte suspendue on trouvait, seulement dans le tube contenant de la cire et de la tuberculo-cirase, à la surface du li- quide, des globules de graisse nettement co- lorés mélangés avec une grande quantité de pela evaporaçäo do veiculo, observava-se uma substancia amorfa soluvel no alcool cuja eva- poração ocazionava o aparecimento de cris- tais. Tomando o licôr alcoolico acima referido, antes de o tratarmos pela soda, e depositan- do uma gota sobre a lamina, pela evapo- ração do veiculo, observam-se abundantes cristais morfolojicamente semelhantes á mis- tura de palmitina e estearina e palhetas agu- çadas nas pontas. Para ponto de fuzão des- ses cristais encontramos 750 C. A separação dos alcooles constituintes da cêra, obtidos pelo tratamento do licor com o eter, apoz a saponificação pela soda, não nos revelou a existencia de colesterina, izo- colesterina e fitosterina, quando sujeitados ás reações respetivas. Pensamos pois que se tratam de alcooles izomeros com esses. Concluzões 1.0 A acido rezistencia do bacilo da tu- berculoze não é devida excluzivamente ás cêras e gorduras existentes no corpo do ba- cilo. 2.0 O bacilo da tuberculoze pode ser dif- erençado nitidamente dos pseudo-tuberculo- zos por metodos de coloração especiais que revelam as granulações do interior do ba- cilo. 3.0 Essas granulações têm eletividade para o Gram, em relação ao resto do bacilo. 4.0 Essas granulações reprezentam a fór- ma de maior rezistencia do bacilo. 5.0 Nos ganglios tuberculozos cazeifica- dos existe uma substancia capaz de diminuir, in vitro, o numero de bacilos da tuberculoze, em dada emulsão. 6.0 Essa substancia não é reativada pelo sôro fresco de cobaia nova. 7.0 A ação maxima dessa substancia se exerce até 120 horas de contato. 8.0 Essa substancia é destruida pelo aque- cimento entre 650 e 700, durante 1 hora. cristaux de la matiêre colorante. En dépo- sant sur une lame une goutte de l’éther qui surnageait, avant de faire agir la matière co- lorante, par l’évaporation du véhicule, on observait une substance amorphe soluble dans l'alcool, et dont l’évaporation donnait lieu à la formation de cristaux. En prenant la liqueur alcoolique citée ci- dessus, avant de la traiter par la soude et en déposant une goutte sur la lame, l’évapora- tion du véhicule nous permet d’observer une grande abondance de cristaux, d’une forme semblable à un mélange de palmitine et stéa- rine, et de paillettes à deux pointes aigues. Le point de fusion de ces cristaux est de 750 C. La separation des alcools constitutifs de la cire, obtenus par le traitement de la liqueur avec l’ether, après la saponification par la soude, ne nous a révélé l’existence, ni de cholestérine, ni d’isocholestérine, ni de phy- tostérine, après avoir été soumis aux réactions nécessaires. Nous pensons donc qu'il s’agit d’un autre isomère de la cholestérine. Conclusions 1. La résistance du bacille de la tubercu- lose aux acides n’est pas due exclusivement aux cires et aux graisses contenues dans le corps du bacille. 2. Le bacille de la tuberculose peut être nettement différencié des pseudo-tuberculeux par des méthodes de coloration spéciale qui révèlent les granulations de l'interieur du ba- cille. 3. Ces granulations ont de l’électivité pour le Gram par rapport au reste du bacille. 4. Ces granulations représentent la forme de plus grande résistance du bacille. 5. Dans les ganglions tuberculeux caséi- fiés il existe une substance capable de réduire in vitro le nombre des bacilles de la tuber- culose, en une émulsion déterminée. 9. Cette substance n’est pas reactivée par l’action du sérum frais de cobaye. 7. L'action maxima de cette substance se fait sentir jusqu’à 120 heures de contact. 9.0 Essa substancia atúa sobre a cêra do bacilo da tuberculoze, saponificando-a. 10 A saponificação da cêra por essa subs- tancia mostra a existencia de palmitina e estearina, caraterizadas pela morfolojia e ponto de fuzão dos cristais. 11 Essa substancia entra na classe dos enzimas idrolizantes. 68 8. Cette substance est détruite par le chauffage entre 65 e 700, pendant 1 heure. 9. Cette substance saponifie la cire du bacille de la tuberculose. 10. La saponification de la cire par cette substance a montré l’éxistence de palmitine et stéarine, caractérisées par la morphologie et le point de fusion des cristaux. 11. Cette substance entre dans la classe des enzymes hydrolysants. Contribuição para o estudo dos dipteros. Observações sobre a biolojia e sistematica das anofelinas brazileiras e suas relações com o impaludismo pelo Dr. Arthur Neiva, Assistente do Instituto. (Estampa 4) Beitrag zur Kenntniss der Dipteren. Beobachtungen über die Biologie und Systematik der brasilianischen Anophelinen und deren Beziehungen mit der Malaria von Dr. Arthur Neiwa, Assistenten. (Tafel 4) Dos 20 generos que constituem a sub-fa- milia Anophelinæ, 8 tem reprezentantes no Brazil, sendo que, destes 4 sao excluzivamente brazileiros. Até ha pouco tempo o genero Pyretho- phorus possuia duas especies brazileiras, dei- xou, porém, de ser reprezentado na diptero- lojia brazilica, com a creaçäo dos generos Chagasia e Myzorhynchella. Os generos existentes no Brazil são repre- zentados pelas seguintes especies: Myzomyia lutzi Theo., Myzomyia tibiamaculata Neiva, Myzomyia gilesi Neiva, Cyclolepteron medio- punctatum Theo.-Lutz, Cyclolepteron interme- dium Chagas, Stethomyia nimba Theo., My- zorhynchella lutzi Cruz, Myzorhynchella parva Chagas, Myzorhynchella nigritarsis Chagas, Arribalzagaia maculipes Theo., Arribalzagaia pseudo -maculipes Chagas, Cellia argyrotarsis Rob. Desv., Cellia albimana Wied., Cellia bra- siliensis Chagas, Chagasia fajardoi Lutz, Man- guinhosia lutzi Cruz. À especie comum é a Cellia albimana que tem sido encontrada em todo o Brazil. O mesmo acontece com a Cellia argyrotarsis. Von den 20 Gattungen, welche die Unter- familie der Anophelinen bilden, sind 8 in Bra- silien vertreten und 4 ausschliesslich brasilia- nisch. : Bis vor kurzer Zeit besass die Gattung Py- rethophorus zwei brasilianische Arten, welche seit der Schôpfung der Gattungen Chagasia und Myzorhynchella in der brasilianischen Dip- terologie nicht mehr erwähnt wurden. Die in Brasilien vorkommenden Gattungen sind durch folgende vertreten: Myzomyia lutzi Theob., Myzomyia tibiama- culata Neiva, Myzomyia gilesi Neiva, Cyclo- leppteron mediopunctatum Theob.-Lutz, Cyclo- leppteron intermedium Chagas, Stethomyia nim- ba Theob., Myzorhynchella lutzi Cruz, Myzor- hyuchella parva Chagas, Myzorhynchella nigri- tarsis Chagas, Arribalzagaia maculipes Theob., Arribalzagaia pseudomaculipes Chagas, Cellia argyrotarsis Rob. Dasv., Cellia albimana Wied, Cellia brasiliensis Chagas, Chagasia fajardoi Lutz, Manguinhosia lutzi Cruz. Die gewóhnlichste Art ist: Cellia albimana, welche in ganz Brasilien gefunden wird; das- selbe gilt von Cellia argrotarsis. ENE y) re A Stethomyia nimba só tem sido encon- trada nos Estados do Pará e no de Minas; neste Estado sáo encontradas todas as espe- cies de anofelinas brazileiras, com exceçäo da Arribalzagaia pseudo-maculipes e do Cyclolep- teron intermedium. As especies Manguinhosia lutzi, Cellia bra- siliensis, Myzorhynchella nigritarsis, Myzomyia tibiamaculata, Myzomyia gilesi, por emquanto, sómente na rejião mineira têm sido encon- tradas. Na cidade do Rio de Janeiro e no Estado do Rio, são encontradas as mesmas especies que ocorrem no Estado de S. Paulo, exce- tuando a Chagasia fajardoi, que, além de Mi- nas, existe em S. Paulo. Além destas rejiões, as mais conhecidas, pouco se poderá adiantar de seguro, quanto á maioria dos Estados, ainda quazi ignorados ou conhecidos deficientemente, como os do Pará, Bahia, Amazonas e Pernambuco. Na cidade do Rio de Janeiro, além das duas Celliæ mais vulgarmente conhecidas, ainda existem os Myzorhynchella lutzi, parva, Myzo- myia lutzi, Arribalzagaia maculipes, pseudo- maculipes os Cyclolepteron mediopunctatum, in- termedium. O Cyclolepteron mediopunctatum é em toda a parte geralmente escasso; já não acontece o mesmo com o Cyclolepteron intermedium, que, em certas localidades é muito abun- dante. Cada localidade possue sua especie pre- dominante e que é geralmente uma das duas Cellia albimana ou argyrotarsis, mais comum- mente a primeira; comtudo logares ha, onde não predominam. Em Piáu (Juiz de Fóra) Minas, as Myzo- rhynchella lutzi e parva são as especies pre- dominantes; em Xérem (Estado do Rio) a Arribalzagaia pseudo - maculipes aparece em maior quantidade que a Cellia albimana, aliaz muito abundante. Em Lassance (Minas), a especie predomi- nante é a Cellia brasiliensis, entretanto estre- mamente rara em Juiz de Fora, rejiäo bem estudada. Stethomyia nimba wurde bisher nur in den Staaten Pará und Minas gefunden, in letzte- rem wurden alle Arten der brasilianischen Anophelinen mit Ausnahme der Arribalzagaia pseudomaculipes und des Cycloleppteron inter- medium, beobachtet. Die Arten: Manguinhosia lutzi, Cellia bra- siliensis, Myzorhynchella nigritarsis, Myzomyia tibiamaculata und Myzomyia gilesi wurden bis heute nur in der Gegend von Minas gefunden. In der Stadt Rio de Janeiro und dem Staate desselben Namens findet man dieselben Ar- ten, welche in dem Staate S. Paulo vorkom- men, mit Ausnahme der Chagasia fajardoi, welche ausser in Minas auch in S. Paulo ge- sammelt wurde. Diese Gegenden sind am besten bekannt; in Bezug auf die anderen Staaten, wie Pará, Bahia, Amazonas und Per- nambuco, die mangelhaft bekannt sind, wird man wenig sicheres sagen kônnen. In der Stadt Rio de Janeiro gibt es, aus- ser den zwei Cellias, welche am meisten be- kannt sind, noch Myzorhynchella lutzi, parva, | Myzomyia lutzi, Arribalzagaia maculipes, pseu- domaculipes, Cycloleppteron mediopunctatum und intermedium. Cycloleppteron mediopunctatum ist überall spärlich, was bei Cycloleppteron intermedium nicht der Fall ist; vielmehr ist dieses an be- stimmten Orten sehr reichlich vorhanden. Die meisten Orte besitzen eine vorherr- schende Art, welche gewóhnlich eine der zwei Celliæ (albimana oder argyrotarsis) ist, meis- tens ist es die erstere; es gibt aber auch Orte, wo keine Art vorherrscht. In Piau (Juiz de Fóra), Minas sind My- zorhynchella lutzi und parva die vorherrschen- den Arten; im Xerém (Staate Rio) ist die Ar ribalzagaia pseudomaculipes zahlreicher, als die Cellia albimana, obgleich letztere sehr häufig vorkommt. In Lassance (Minas) ist Cellia brasiliensis die vorherrschende Art; dagegen ist sie in Juiz de Fora, einer recht gut erforschten Gegend, ausserordentlich selten. Die Chagasia fajardoi, haufig in Minas (Juiz de Fora, Barbacena, Oliveira), ist dage- gen im Staate S. Paulo sehr spärlich. ERREUR; | MERE? A Chagasia fajardoi, abundante em Minas (Juiz de Fóra, Barbacena, Oliveira) é escassa nas localidades do Estado de S. Paulo, onde tem sido encontrada. A Manguinhosia lutzi, até agora, só foi encontrada em Bicudos (Minas). A biolojia das anofelinas brazileiras ainda se encontra muito atrazada; para isto, muito concorre a dificuldade que eziste para se en- | contrarem as larvas de certas especies. Apenas de 8 especies de anofelinas são conhecidas as larvas: Cellia argyrotarsis, Cellia albimana, larvas muito comuns e prezentes em qualquer depozito d'agua; Myzohrynchella lutzi e parva, larvas comuns nos pequenos brejos; Myzomyia lutzi larva quazi excluziva- mente bromelicola. As larvas de Chagasia fajardoi e de Arri- balzagaia pseudo-maculipes foram creadas arti- ficialmente de posturas obtidas no laboratorio. Fato extremamente curiozo, é o que se dá em certos logares, onde mao grado a espantoza abundancia de imajens, as pesqui- zas para a colheita de larvas de determinadas especies são totalmente infrutiferas, apezar de feitas simultaneamente por varias pessoas ex- perimentadas nestes trabalhos, durante horas continuas e em dias sucessivos. Em Xérem, onde amiudadas vezes pesqui- zámos larvas, nunca conseguímos capturar uma larva siquer das especies Cyclolepteron medio- punctatum e intermedium e rarissimas vezes colhémos uma ou outra larva de Arribalza- gaia pseudo-maculipes. Ao crepusculo, as anofelinas vêm sucessiva- mente por especies; esta observação feita pelo Dr. Carlos Chagas, tivemos ocazião de verificar, posteriormente, em diversas locali- dades. Em Juiz de Fóra (Piáu), as especies apa- recem na seguinte ordem: Myzorhynchella parva, Myzorhynchella lutzi e por fim, quazi dentro da noite a Chagasia fajardoi. Em Xérem, em primeiro logar surje a Arribalzagaia pseudo-maculipes, mais tarde o Cyclolepteron intermedium e, em seguida, o Cy- Die Manguinhosia lutzi wurde bis heute nur in Bicudos (Minas) gefunden. Die Biologie der brasilianischen Anophe- linen ist noch wenig erforscht, da es schwie- rig ist, die Larven von bestimmten Arten zu finden. Nur von 8 Arten der Anophelinen sind die Larven bekannt, námlich von Cellia argyrotar- sis, Cellia albimana (deren Larven sehr ge- wohnlich und in jeder beliebigen Wasseran- sammlung vorhanden sind), Myzorhynchella lutzi und parva. Letztere sind gewôühnliche Larven in kleinen Siimpfen; Myzomyia lutzi findet man beinahe ausschliesslich in Brome- liaceen. Die Larven der Chagasia fajardoi und der Arribalzagaia pseudomaculipes wurden aus den, im Laboratorium abgelegten Eiern, künstlich geziichtet. Ein äusserst interessanter Fall, welcher an einigen Orten beobachtet wurde, ist der, dass, trotz erstaunlicher Mengen von Mosquitos, die Bemiihungen, die Larven von bestimmten Ar- ten zu finden, ganz und gar fruchtlos ge. blieben sind, obgleich sie gleichzeitig von ver- schiedenen, in solchen Arbeiten gut bewan- derten Forschern Stunden und Tage hindurch gesucht wurden. In Xerém, wo wir oftmals Larven gesucht haben, ist es uns nie gelungen, eine einzige Larve von den Arten Cycloleppteron mediopunc- tatum und intermedium zu finden, und nur sehr selten kamen uns Larven von Arribalza- gaia pseudomaculipes zu Gesicht. In der Dämmerung folgen sich die Ano- phelinen artenweise; diese Beobachtung wur- de von Dr. Carlos Chagas gemacht; spater hatten wir Gelegenheit, dieselbe an verschie- denen Orten zu bestatigen. In Juiz de Fora (Piau) erschienen die Ar- ten in nachstehender Reihenfolge : Myzorhynchella parva, Myzorhynchella lutzi und zuletzt, beinahe schon am Abend, die Chagasia fajardoi. In Xerém zeigt sich zuerst Arribalzagaia pseudomaculipes, später Cycloleppteron interme- dium, und zuletzt, wenn der Abend schon im Anzuge ist, Cycloleppteron mediopunctatum. Cellia albimana und C. argyrotarsis erschei- 72 clolepteron mediopunctatum, quando a noite já vem caindo. As Cellia albimana e argyrotarsis apare- cem simultaneamente, logo no principio do crepusculo, permanecendo até o fim. Vizivelmente ha um otimo de luz que varia para cada especie, de maneira que, con- forme o mez, a hora favoravel para o apare- cimento e dezaparecimento das anofelinas não é constante. Nesta rejião observámos que, em Junho, a chegada das anofelinas dava-se ás 5.30 p- m. e a partida ás 6 horas p. m.; dia a dia chegavam mais tarde e, em meiados de Agosto, a hora habitual ocilava entre 5.50 p. m. e 6 horas (chegada) e 6.10 p. m. e 6.20 (partida); raramente se observava entre a chegada da primeira anofelina e o dezaparecimento total, um espaço de tempo que fosse além de 30 e aquém de 15 minutos. Uma ocazião, porém, 11 de Outubro, as anofelinas começaram a aparecer ás 6.10 p. m. e só se retiraram ás 7.15 p. m., tendo, por conseguinte permanecido durante 65 minutos. Foi a maior demora que observámos e que tem explicação, no fato da grande clari- dade não só da noite, como tambem de uma fogueira, cujos reflexos chegavam a iluminar os cavalos sobre os quais colhiamos as ano- felinas. Já tinhamos verificado que nas noites de luar, a permanencia das anofelinas prolonga- va-se um pouco mais que o habitual. Em prezença de luz, as anofelinas picam a qualquer hora da noite; muitas vezes, den- tro do laboratorio e em horas diferentes da noite, capturámos anofelinas quando sugavam. Não acreditamos que as anofelinas suguem em completa escuridão, não excetuando a Chagasia fajardoi que, de todas é a que fica em prezença de menor quantidade de luz. Pela madrugada, as anofelinas só apare- cem, quando já ha certa claridade e, á me- dida que esta aumenta, crece o numero daquellas até que, passando um espaço de tempo um pouco maior que o do crepusculo vespertino, retiram-se; durante o crepusculo nen zugleich beim Beginn der Dämmerung und bleiben bis zuletzt. Augenscheinlich muss es eine gewisse und bestimmte Lichtmenge geben, welche fiir jede Art schwankt, weshalb die giinstige Stunde zum Erscheinen und Verschwinden der Ano- phelinen je nach dem Monat keine bestän- dige ist. In Xerém beobachtete ich, dass im Monat Juni die Anophelinen um 5.30 p.m. erschienen und um 6 Uhr p.m. verschwanden; Tag fiir Tag erschienen sie spater, sodass sie Mitte August gewohnlich zwischen 5.50 p.m. und 6 Uhr auftraten, um wieder zwischen 6.10 p.m. und 6,20 p.m. zu verschwinden; selten ergab sich zwischen der Ankunft der ersten Anophe- linen und dem gänzlichen Verschwinden der- selben ein Zeitraum von tiber 30 Minuten oder unter 15 Minuten. Ausnahmsweise jedoch erschienen die Ano- phelinen am 11. October um 6.10 p.m. und verschwanden erst um 7.15 p.m.; sie wurden also wahrend 65 Minuten bestandig beobachtet. Dies war der grósste Zeitraum, den wir feststellen konnten; derselbe war auch leicht zu erklären, da sich mit einer sehr hellen Nacht noch das Licht eines Freudenfestes com- binirte, dessen Schein die Pferde, auf denen wir die Anophelinen fingen, beleuchtete. Wir hatten schon festgestellt, dass in Mond- scheinnachten der Aufenthalt der Anophelinen etwas langer dauerte, als gewóhnlich. Bei Licht stechen die Anophelinen zu ir- gend einer Stunde der Nacht; sehr oft wur- den im Laboratorium Anophelinen des Nachts beim Saugen beobachtet und das zu den ver- schiedensten Stunden. Ich bezweifle, dass die Anophelinen in vollstandiger Dunkelheit stechen, dies giit auch für die Chagasia fajardoi, welche von allen Anophelinen diejenige ist, die am wenigsten Licht zum Stechen beansprucht. In der Morgendammerung erscheinen die Anophelinen, wenn schon eine gewisse Hel- ligkeit vorhanden ist und wahrend diese zu- nimmt, wáchst ihre Anzahl; nachdem ein etwas grósserer Zeitraum, als bei der Abend- dammerung verflossen ist, verschwinden sie wieder; des Morgens erscheinen die Ano- matutino, as anofelinas aparecem em muito menor numero que no crepusculo vespertino. Em pleno dia, qualquer especie de anofe- lina pode ser capturada dentro da mata, todavia, em menor abundancia que aos cre- pusculos. Em Piáu (Minas), capturámos diversos exemplares de Chagasia fajardoi ás 1 a. m. dentro de uma mata pouco sombria; o Dr. C. Chagas verificou que, em pleno sol, dentro de matas de vejetação rala a Cellia brasilien- sis ataca fortemente. Exemplares de Cellia argyrotarsis e albi- mana, de Myzorhynchella lutzi, parva, de Ar- ribalzagaia maculipes, pseudo-maculipes, de Cyclolepteron intermedium e mediopunctatum já os temos capturado em diferentes horas do dia e em sitios de vejetação pouco densa. Quanto á influencia dos fatores metereo- lojicos, pouco podemos informar. A temperatura de 190 C. não exerce a menor influencia sobre o aparecimento das anofelinas; ainda a 170 C. as anofelinas apa- recem com a mesma frequencia habitual e sugam com igual voracidade. A chuva só tem influencia emquanto cae; uma hora depois de ter cessado de chover, | inda que sejam copiozas cargas d'agua de “algumas horas de duração, em varias expe- riencias que realizámos, tivemos a oportuni- dade de verificar quão abundantes são as anofelinas que facilmente podem ser captura- das, em grande numero. Quando se vai operar uma mudança de tempo que acarrete chuva, as anofelinas são mais frequentes e vorazes. Em dias extremamente cálidos, de 390 e mais á sombra, as anofelinas não se resen- tem do grande calor e picam com voracidade dezuzada. Estes fatos foram observados quotidiana- mente durante o espaço de mais de ano e, referem-se ás 8 especies de anofelinas exis- tentes no Xérem. Para a captura das anofelinas utilizamo- nos de cavalos, de preferencia aos burros, por serem estes menos perseguidos pelos culíci- 13 phelinen in viel kleinerer Anzahl, als in der Abenddämmerung. Im Walde kann jede Art von Anophe- linen am hellen Tage gefangen werden, je- doch in kleinerer Menge, als in der Abend- dämmerung. In Piau (Minas) haben wir in einem we- nig schattigen Walde verschiedene Exemplare von Chagasia fajardoi gefangen (11 Uhr a.m.). Dr. Chagas beobachtete, dass die Cellia bra- siliensis in wenig lichten Waldern selbst bei Sonnenschein lebhaft angreift. Einzelne Exemplare von Cellia argyrotarsis und albimana, Myzorhynchella lutzi, parva, Arribalzagaia maculipes, pseudomaculipes, Cy- cloleppteron intermedium, und mediopunctatum wurden von mir schon zu verschiedenen Ta- geszeiten und an Plätzen mit wenig dichter Vegetation gefangen. Ueber den Einfluss der Witterung kônnen wir wenig berichten. Die Temperatur von 190 C. hat nicht den geringsten nachtheiligen Einfluss auf die Zahl der Anophelinen, selbst bei 17°C. erscheinen die Anophelinen in der gewóhnlichen Menge und stechen mit derselben Gier. Der Regen beeinflusst die Anophelinen nur während des Fallens; eine Stunde nachdem es aufgehórt hat zu regnen, (selbst wenn wáh- rend mehrerer Stunden reichlich Regen ge- fallen ist) hatte ich mehrmals Gelegenheit zu beobachten, wie haufig die Anophelinen erscheinen und wie leicht sie in Menge ge- fangen werden kônnen. Wenn das Wetter sich ândert und Regen droht, sind die Anophelinen häufig und blut- dürstig; auch an sehr heissen Tagen, wenn das Thermometer im Schatten 390C. und mehr aufweisst, stechen sie mit aussergewôhnlicher Gier. Diese Beobachtungen, die wahrend 14 Mo- naten taglich gemacht wurden, beziehen sich auf die 8 Arten von Anophelinen, die in Xe- rém vorkommen. Um Anophelinen zu fangen, benutzen wir lieber Pferde, als Maultiere, da wir bemerkt haben, dass diese Miicken die Pferde vorzo- gen; letztere wurden dann in die Nahe der Súmpfe oder Walder geführt. ia te) PANNES das. Os cavalos são conduzidos para as pro- ximidades dos pantanos ou para as matas. Esta pratica, tem a grande conveniencia de facilitar a captura dos exemplares de cu- licidas, permitindo que se possam escolher as especies dezejadas. As anofelinas, em geral, preferem picar o ventre dos animais; as Myzorhynchella lutzi e parva sugam tambem o pescoço, cabeça e ancas; 0 Cyclolepteron mediopunctatum prefere pouzar sobre as pernas, emquanto que o Cyclolepteron intermedium pouza de preferen- cia no ventre. Com a utilizagao de cavalos e com o au- xilio de um tubo de Ficalbi e em hora opor- tuna, capturam-se os culicidas que apareçam. As anofelinas penetram nos domicilios ge- ralmente, durante o crepusculo vespertino; a invazao matutina opera-se em menor numero. Procuram picar logo que invadem, mas, devido ao fato, por emquanto inexplicavel, das anofelinas, mesmo as que nao tenham sugado, retirarem-se, findo algum tempo, ces- sam de perseguir e pouzam pelas paredes, de onde levantam vôo 4 noite para nova- mente tentarem sugar se, porventura, o com- partimento estiver iluminado. Pela madrugada, as anofelinas que entra- ram á tarde, sugam avidamente os individuos que ainda se acham adormecidos; depois de repletos, pouzam novamente pelas paredes, onde esperam algumas horas (3 a 4 horas), até que passe o entorpecimento produzido pela repleção, para então abandonarem de vez o domicilio, retirando-se para a mata, de onde voltam á tarde para repetir a refeição. Das anofelinas creadas em cativeiro, C. albimana argyrotarsis, A. maculipes, pseudo- maculipes, C. mediopunctatum, intermedium, C. Jfajardoi, M. lutzi, parva, a maioria alimen- ta-se diariamente, e algumas fazem mais de . uma refeição. Podem-se tirar destes fatos, concluzões que sirvam para orientação, nas campanhas profilaticas, do serviço de destruição dos mos- quitos adultos; que, conforme a nossa obser- vação, deverá ser feito á noite ou logo ao Dieses Verfahren gestattet nicht nur mit Leichtigkeit zahlreiche Individuen zu fangen, sondern auch eine Auswahl zu treffen. Die Anophelinen stechen die Tiere mit Vorliebe am Rumpfe; Myzorhynchella lutzi und parva saugen auch am Halse, am Kopfe und an den Hiiften; Cycloleppteron mediopunctatum zieht es vor, sich auf die Beine niederzulas- sen, wahrend Cycloleppteron intermedium sich mit Vorliebe auf den Leib setzt. Unter Benutzung von Pferden und mit Hilfe eines Ficalbischen Fangglases lassen sich zu passender Stunde alle Arten fangen, die am Orte vorkommen. Die Wohnungen suchen die Anophelinen wahrend der Abenddâmmerung auf; wahrend der Morgendämmerung dringen sie in gerin- geren Mengen ein. Sie suchen sofort nach dem Eindringen zu stechen und verfolgen die einzelnen Individuen während einer gewissen Zeit, welche lânger ist, als die, welche wir bei den Pferden in Sümpfen beobachten konn- ten; diese Thatsache erklärt sich durch das Licht, das in den Wohnungen vorhanden ist. Nach einer gewissen Zeit stellen sie ihre Ver- folgung ein und setzen sich an die Wände, ohne gestochen zu haben; nur selten gelingt es, Anophelinen zu fangen, welche sofort geso- gen haben. Wenn das Zimmer beleuchtet ist, verlassen sie während der Nacht die Wände und versuchen zu stechen. Bei Tagesanbruch saugen die Anophelinen, welche am Nachmittag eindringen, mit gros- ser Gier an Personen, die im Schlafe liegen. Einmal mit Blut gefüllt, setzen sie sich wie- der an die Wánde und warten einige (3-4) Stunden, während welcher die, nach dem Sau- gen eingetretene, Torpiditát allmählig aufhórt. Hierauf fliegen sie aus den Wohnungen ins Freie und kehren des Abends zurück, um die Blutaufnahme zu wiederholen. In der Gefangenschaft ernähren sich die Anophelinen zum gróssten Theil táglich, ei- nige machen selbst mehr als eine Mahlzeit. Diese Beobachtung bezieht sich auf alle in Xerém vorkommenden Arten, mit Ausnahme der daselbst seltenen Myzomyia lutzi, und geben die nôthigen Anhaltspunkte, um bei den prophylactischen Massregeln die Vernich- “a CESIÓN E Merah Servos amanhecer, incontestavelmente as horas mais favoraveis para um espurgo proveitozo. Quanto á sistematização, as anofelinas bra- zileiras sofrem da confuzäo atualmente rei- nante neste departamento da dipterolojia. Nossos estudos, sempre foram orienta- dos pelas normas prescritas por Theobald e, por emquanto, ainda nos utilizamos de sua classificação embora, cada vez mais, reconhe- çamos quanto é falha. Entre as ponderações que podemos fazer ao vol. IV da «A Monograph of the Culici- dae», ha algumas restrições sobre o genero Myzorhynchella que Theo. creou com uma es- pecie brazileira a Myzorhynchella nigra. Por ainda estarmos subordinado a seu criterio sistematico aceitamos o genero, po- rém contestamos a especie, que não passa do antigo Anopheles lutzi — Cruz, 1901. O carater em que se apoiou Theobald para formar este novo genero, isto é, a auzencia de escamas eretas bifurcadas, na cabeça, é um fato generalizado para todas as anofelinas brazileiras conhecidas, com exceção da St. nimba e Chagasia fajardoi. Theobald refere-se ao abdomen da Myzo- rhynchella lutzi, como desprovido de escamas; com certeza o exemplar que lhe ditou esta afirmação, estava avariado, porquanto o seg- mento genital das Myzorhynchella lutzi, parva, nigritarsis, são abundantemente escamozos. Para aceitarmos o genero tivemos que lhe acrecentar a principal carateristica: abdomen pilozo, com exceção do segmento genital que é revestido de escamas. Aproveitando a oportunidade, vamos iden- tificar a Myzorhynchella lutzi Cruz, cuja sino- nimia tem sido das mais disparatadas. Myzorhynchella lutzi — Cruz, 1901. Anopheles lutzii — Cruz, 1901. Nyssorhynchus albimanus (sinonimia) Blan- chard, 1905. Myzorhynchella nigra — Theo., 1907. Das especies brazileiras de anofelinas, são transmissores provados de impaludismo as se- guintes: Cellia albimana (Indias Ocidentais) Cellia argyrotarsis (Brazil) citadas por Ste- phens e Christophers, 3.2 edição. tung der erwachsenen Mücken durchzufüh- ren; es folgt daraus, dass dieselbe des Abends oder des Morgens in der Frühe vorgenom- men werden sollte, da diese unzweifelhaft den günstigsten Zeitraum darstellen. Die Classification der brasilianischen Ano- phelinen leidet zweifellos der Dipterologie in diesem Gebiete unter der gegenwärtig noch herrschenden Verwirrung. Bei derselben folgte ich immer den von Theobald aufge- stellten Regeln, dessen Classification ich auch beibehalte, obgleich ich deren Unzulânglich- keit täglich mehr einsehe. Der Hauptein- wand, den ich gegen dieselbe, wie sie im vierten Bande seiner Monographie enthalten ist, zu machen habe, bezieht sich auf das Ge- nus Myzorhynchella, welches Theobald auf eine brasilianische, seine Myzorhynchella ni- gra, gründete. Obgleich ich, seiner Classifi- cation folgend, das Genus acceptire, muss ich doch die Artbezeichnung beanstanden, da es sich lediglich um die bereits 1901 von Cruz als Anopheles lutzi beschriebene Art handelt. Das Kennzeichen, auf welches Theobald die Gründung des neuen Genus basirt, nâmlich die Abwesenheit von aufgerichteten und ga- belf6rmigen Schuppen, ist allen brasilianischen Anophelinen gemeinsam, mit alleiniger Aus- nahme der Stethomyia nimba und der Chagasia fajardoi. Theobald bezeichnet das Abdomen seiner Myzorhynchella als frei von Schuppen, jedoch ist wenigstens bei gut erhaltenen Exem- plaren bei den Myzorhynchellaarten lutzi, parva und nigritarsis das Genitalsegment reichlich mit Schuppen bedeckt. Um das Genus anzuerken- nen, muss ich als Hauptcharacter anführen: «Abdomen behaart, mit Ausnahme des Genital- segments, welches mit Schuppen bedeckt ist». Bei dieser Gelegenheit móchte ich noch die Synomyie der M. lufzi citiren; dieselbe ist eine äusserst confuse, námlich: (M. lutzi Cruz) Anopheles Lutzii Cruz 1901, Pyrethophorus Lutzi Bourroul 1904, Nyssorhyn- chus albimanus cx parte Blanchard (irrtümlich als Synonym angeführt) 1905, Myzorhynchella nigra. Ich gehe nun auf die Rolle über, welche die einzelnen Anophelinenarten bei der Ueber- tragung der Malaria spielen: 76 As pesquizas feitas entre nós deram o seguinte rezultado: transmitem terçã mali- gna as Cellia argyrotarsis (Gomes de Faria, Ruy Ladislao) Cellia albimana (Ruy Ladislao) Arribalzagaia pseudo-maculipes (Ruy Ladislao, Neiva) Cyclolepteron intermedium (Ruy Ladis- lao, Neiva); terçã benigna as Cellia albimana (Chagas, Ruy Ladislao) Cellia argyrotarsis (Ruy Ladislao). Estas verificações foram feitas do seguinte modo : As anofelinas eram alimentadas em impa- ludados gametoforos que, em varios e minu- dentes exames de sangue revelavam serem parazitados por uma só especie de plasmo- dio. Posteriormente, pesquizavam-se os quistos nesses mosquitos. Kennord verificou na Guiana Ingleza a transmissão do impaludismo pelo Cyclolepte- ron mediopunctatum, nada adiantando sobre a especie do plasmodio transmitido por esta anofelina. Quanto 4 transmissão pela Myzomyia lutzi, todos os fatos levam a crêr que seja uma especie perigoza, comtudo, falta ainda uma verificação exata; o ooquisto achado por Galli-Valerio numa Myzomyia lutzi conser- vada em alcool e remetida do Paraná, ape- nas aumenta a probabilidade desta anofelina transmitir impaludismo, porquanto, não ha quem possa diferenciar em um estomago de anofelina, principalmente conservado da ma- neira citada o plasmodio humano do plasmo- dio aviario. Quanto á prezença de ooquinetos, referida por Stephen e Christophers, para a M. lutzi é uma observação que facilmente pode ser feita em qualquer anofelina, alimentada em gametoforos em condições de transmissibili- dade; desta verificação não se deve concluir “que o ooquineto possa sempre evoluir até esporozoito. Especies bem suspeitas são as Cellia bra- siliensis Myzorhynchella lutzi e parva; a Ste- thomyia nimba é, por ora, incriminada, por Low, de transmitir impaludismo na Guiana. Stephens und Christophers (Practical study of Malaria, London 1908) führen als Malaria- überträger Cellia albimana aus Westindien und Cellia argyrotarsis aus Brasilien an; auf wel- che Autoritáten sie sich dabei stützen, ist uns zur Zeit unbekannt. Auf experimentellem Wege wurden hier zu Lande als Zwischenwirth festgestellt, für Tertiana maligna: Cellia argy- rotarsis (Gomes de Faria, Ruy Ladislao), Cel- lia albimana (Ruy Ladislao), Arribalzagaia pseudomaculipes (Ruy Ladislao, Neiva), Cyclo- leppteron intermedium (Ruy Ladislao, Neiva), für Tertiana benigna: Cellia albimana (Chagas, Ruy Ladislao), Cellia argyrotarsis (Ruy Ladis- lao). Die Untersuchungen wurden auf fol- gende Weise vorgenommen: Die Anophelinen wurden mit dem Blute von Individuen ernährt, welche, wie durch wiederholte Untersuchun- gen festgestellt wurde, nur eine Art von Plas- modien und diese im Gametenzustand be- herbergten. Später wurden dann in diesen Miicken die Oocysten aufgesucht. In British Guyana stellte Kennord die Transmission der Malaria durch Cycloleppteron mediopunctatum fest, ohne einen Aufschluss über die Plasmo- diumart, welche übertragen wurde, zu geben. Was die Uebertragung durch die Myzomyia lutzi anbetrifft, so deutet alles darauf hin, dass diese Art gefährlich ist, jedoch fehlt ein ge- nauer Beweis dafür, denn die von Galli-Valerio bei in Alcohol aufbewahrten Miicken gefunde- nen Cysten, die von Paraná geschickt worden waren, kônnen kaum als beweisend angesehen werden, da eine Unterscheidung zwischen vom Menschen oder von Vógeln abstammenden Haematozoen unter diesen Umstânden kaum môglich sein diirfte. Was die von Stephens und Christophers angeführte Beobachtung von Ookineten im Magen anbetrifit, so kann dieselbe leicht bei jeder Art von Anophelinen gemacht werden, wenn dieselben mit Blut von Gametenträgern genährt werden, ohne dass man daraus schlies- sen diirfte, dass der Ookinet sich auch zum Sporozoiten entwickeln wiirde. Sehr verdächtig sind auch Myzorhynchella Lutzi und parva; Stethomyia nimba wird von Low der Uebertragung der Malaria in Guyana angeschuldigt. MEMORIAS DO INSTITUTO OSWALDO CRUZ ESTAMPA Tomo | - 1909 30 FREE 20 a E o E 7 10 | 3 BU BL As GO E > dé nr Fer RO Ce 5 Ingl. Holl. Fr /x olouanant C £ EE Les , Liz Q \ 3 vortaleza ! of | ! > we 2 C- de = E Therézina ES foe 2 Maratih ao)"; ye 25 RC ada ya tad 23 MENS 399 / Va -do Norte ot lo 3 wo SS A PRE E 17 = > e E Par ahyba © a veria rba E à 74 y i er ae olRecife ; E A a Py Es LA di E no a am buco EE a À é ES oo SE so --YRFormpso Pro 0a as o E af E 5 ; Z = Dee COLO sl a “a p fio BTL, Sérgipo E Nin <A ge 4 4 Aracaju = ë A 20) 5 eo a Y L a b x Ap AT D A Le on, Pari? VS Salvador sexy pm Dic “pa O vá = 7 Y é ZA > y I E Vlararellas ee a Mad EXV erein eo CESSE O bh y | A SO Petropolis € LA e o ARGEINTIN ‘ Rio Grande Y eS Port Alegre O Lej enda: * C(velolepteron medio punctate E Transmissoras pro- iz Cellia albimana Celia argvrotarsis = | vadas do impaludisno|y y Gvelolepteron intermedium Y e Arribalzagaia pseudo maculipes E e Mvzomyia lutzt Transmissoras prova- e Arr. ibalzagaia maculipes É 2 y Cellia brasiliensis veis do impaludismo |z Myzorrhvnchella parva to Mvzorrhvnchella lutzi a S tethomy via nimba q i zorriymchella nigritarsis «1 VZOMIVTA guest vi VZOMVÍA ibia maculata # 4 anguinhosia lutzi v Chagas fa ajardol iL ot = © | 30 20 107 AAA ins ithHartmam Reichenbach S.Paulo No mapa apenso (Est. 4) damos a distri- buição, por Estados, das anofelinas brazileiras; as lacunas ainda são imensas, entretanto, uti- lizamo-nos para a sua confeção de todas as informações colhidas por nós diretamente, ou por autores e observadores dignos de todo o credito. Alguns mezes depois de prontas as notas precedentes, em Janeiro do corrente ano, ti- vemos a oportunidade de verificar nos cam- pos de Avanhandava, no noroeste de São Paulo, a maneira de se comportar da Cellia brasiliensis que, em pleno dia, ao sol, num campo dezabrigado, ataca aos enxames, ho- mens e animais; o mesmo acontecendo em dias chuvozos, quando, imediatamente apoz cessação da chuva ou até ainda chuviscando fracamente, aflue em verdadeiros enxames bem carateristicos desta especie que, neste particular em nada se parece com numerozos outros culícidas que já temos tido ocazião de estudar em identicas condições, não exce- tuando o Taeniorhynchus albicosta e os My- zorhynchella parva e lutzi que, embora afluam abundantemente, não enxameam como acon- tece com a Cellia brasiliensis. Esta especie pouza sobre qualquer parte do corpo do cavalo, sem ter logar de prefe- rencia como observámos e referimos para algumas outras anofelinas; neste ponto a C. brasiliensis procede do mesmo modo que as C. argyrotarsis e albimana. Provavelmente é uma especie transmissora do impaludismo e, o que nos leva a esta su- pozição, é a prezença de impaludismo em localidades como Avanhandava, onde esta especie existe em abundancia extraordinaria, quazi que escluzivamente. Tambem verificámos a existencia da Man- guinhosia lutzi no noroeste de S. Paulo, junto ás marjens do rio Tieté; esta especie, até então, só tinha sido encontrada em Minas e, em ambas rejiões, sempre em companhia da C. brasiliensis. 77 Auf der beigefügten Karte ersieht man die Verbreitung der Anophelinen in den verschie- denen brasilianischen Staaten; die Lücken sind noch immer sehr gross, obgleich wir bei ihrer Anfertigung alle von uns direct gemachten oder zuverlässigen Beobachtern entnommenen Angaben verwendet haben. Einige Monate nach Vollendung der vor- angehenden Beobachtungen, im Januar dieses Jahres, hatten wir Gelegenheit, auf den Cam- pos von Avanhandava, im Nordwesten von S. Paulo, die Gewohnheiten der Cellia brasi- liensis zu verfolgen, welche am hellen Tage, bei Sonnenschein und auf offenem Felde Men- schen und Tiere angreift. Auch an regneri- schen Tagen geschah dasselbe, indem unmit- telbar nach Aufhóren des Regens oder bei noch schwachem Fortdauern desselben, diese Art in fôrmlichen Schwärmen auftrat, welche für dieselbe characteristisch sind. Dadurch unterscheidet sie sich vollkommen von den zahlreichen Miickenarten, die wir unter ähn- lichen Bedingungen studiren konnten, nicht ausgenommen Taenierhynchus albicosta, My- zorhynchella parva und M. Lutzi, welche, obwohl zahlreich auftretend, doch nicht derar- tige Schwárme bilden. Unsere Art lässt sich, auf irgend einem Teile des Kórpers der Pferde nieder, ohne eine bestimmte Stelle zu bevorzugen, wie wir diess bei anderen Anophelinen beobachtet und angeführt haben. Sie verfährt hierin ebenso, wie die Cellia ar- gyrotarsis und albimana. Diese Art ist wohl zweifellos im Stande, Malaria zu übertragen, wie wir aus dem häu- figen Vorhandensein derselben an Orten, wie Avanhandava, schliessen, wo sie in ausseror- dentlicher Menge und nahezu ausschliesslich vorkommt. Ausserdem hatten wir auch Gelegenheit, das Auftreten der Manguinhosia Lutzi an den Ufern des Tietés im Nordwesten von S. Paulo zu constatiren; diese Art war friiher nur in Minas gefunden worden. In beiden Regionen kam sie immer in Gesellschaft der Cellia brasiliensis vor. HP ae sg Wiz € AP? Gar, TOMO I FACICULO II MEMORIAS DO INSTITUTO OSWALDO CRUZ COB eo RIO DE JANEIRO — MANGUINHOS AGOSTO DE 1909 (Publicado em Dezembro) SUMARIO: Pag. I — Dr. S. von PROWAZEK — Contribuição para o estudo do dezenvolvimento do “Spirochaeta galli- narum” (7 figuras no texto) . . CNAE ie ley ar RL AD IE 79 II — Dr. ALCIDES GODOY — Multiplicação os eee em Corus I. Constante de velocidade de multiplicação . . . Are 81 III — Dr. GOMES DE FARIA — ooo crotophagae, n. = ORO te ao ant azul, Croto- phaga maior. L. (Estampa 5). . PA SO Co 99 IV — Dr. S. von PROWAZEK — Duplicidade Morto leites nos trios Filiados (sinus 6) at eh LOS V — Dr. ARTHUR MOSES — Da pesquiza de antijeno e de anticorpo pela fixação de complemento . . 109 VI — Dr. ADOLPHO LUTZ — ery te para o conhecimento das ea brazileiras do genero “Simulium >” E 124 VII — Drs. S. von PROWAZEK e fa DE BEAUREPAIRE “ARAGÃO. — Estados! aa) a ini e figuras no texto e estampas 7 e 8). . : VO 147) VIII — Dr. CARLOS CHAGAS — Nova roue nan ie one a More eo HEE: evo- lutivo do Schizotrypanum cruzi n. gen., n. sb., ajente etiolojico de nova entidade morbida do homens (lO piourasmnomtextoye: estampasi0= 13) CC EN CN ee 159 SOMMAIRE: I — Dr. S. von PROWAZEK — Zur Entwicklung von “Spirochaeta gallinarum” (7 Text-Figuren) . . 79 Il — Dr. ALCIDES GODOY — Ueber die Vermehrung der Bacterien in den Culturen.- I. Die Constante ihrer Geschwindigkeit . . . put EN atl er PRE ET CEA | NR RER 81 III — Dr. GOMES DE FARIA — Eehinoetomiim lara n. sp. A new ceux of the blue anu, Crotophaga maior. L. (With plate 5) . . kp) CSS. Oo hah A 99 IV — Dr. S. von PROWAZEK — Formodimorphismus bei ciliaten faso riem (Tafel ANY Vs 105 V — Dr. ARTHUR MOSES — Ueber den Nachweis von Antigen und Antikôrper durch Roule rentable its 109 VI — Dr. ADOLPHO LUTZ — Beitrag zur Kenntniss der brasilianischen Simuliumarten. . . 124 VII — Drs. S. von PROWAZEK und H. DE BEAUREPAIRE ARAGÃO — A e Text- Figuren und Tafel 7 und 8). . . BN ei ANA LENS eal A VIII -- Dr. CARLOS CHAGAS — Ueber eine neue TE musa o ticas des a Ema über Morphologie und Entwicklungszyklus des ScArzofrvpanum cruzi n. gen., n. sp., Erreger einer neuen Krankheit destMerischen (10"Text-Figurenlund Tafelh9=13) no o a E EEE ne tl raat VON A | Y, O As «MEMORIAS» seráo publicadas em faciculos, que náo apareceráo em datas fixas e que formaráo volumes de mais ou menos 200 pajinas. No minimo, aparecerá um volume por ano. Na parte escrita em portuguez foi adotada a grafia aconselhada pela Academia de Letras do Rio de Janeiro. Toda correspondencia relativa ás « MEMORIAS» deverá ser dirijida ao “Diretor do Instituto Oswaldo Cruz - Caixa postal 926 - Manguinhos - Rio de Janeiro”. PIN T Les « MEMOIRES » seront publiés par fascicules qui ne paraitront pas en epoques determinées et qui formeront des volumes d’à peu près 200 pages. Il paraitra chaque année, au moins, un volume. La partie portugaise est écrite selon la graphie adoptée par l’Académie de Lettres de Rio de Janeiro. | Toute correspondance doit être adressée au “Directeur de l’Institut Oswaldo Cruz — Caisse postale 926 - Manguinhos - Rio de Janeiro”. Agosto 1909 Tomo | — n.º 2 Contribuição para o estudo do dezenvolvimento do “Spirochaeta Galinarun” pelo Dr. S. von Prowazek. (Com 7 figuras no texto) Zur Entwicklung von “Spirochaeta Gallinarum” von Dr. S. von Prowazek. (Mit 7 Abbildungen im Text) Durante minha permanencia, por muitos mezes, em Manguinhos pesquizei, quazi que diariamente, de Outubro de 1908 a Janeiro de 1909 carrapatos (Argas miniatus Koch) in- fetados com o Spirocheta gallinarum, em pre- parados coloridos: pelo processo de Loeffler e pude verificar o seguinte: As mais das vezes no fim do 3.0 dia, apoz | a infeção aparecem os primeiros spirochaete | no lacunoma do carrapato; para isto verificar basta incizar cuidadozamente com tezoura fina uma das pernas do argas e, assim, segura- mente se encontram no liquido turvo, rico de leucócitos, da cavidade geral, espiroquetas cujo numero aumenta mais tarde. No lacunoma tem lugar uma evolução da qual poderão ser observados os seguintes es- tádios: 1.0 Espiroquetas que se acham apostos aos leucócitos e, em parte, tambem, alguns no interior delles. Estádios de multiplicação dos espiroque- tas (Fig. 1, no 3.0 dia; Fig. 2, no 7.0 dia; Fig. 3, no 28.0 dia, etc.). Na Fig. 1, vê-se ainda entre as duas metades fendidas do corpo do espiroqueta, o periplasto distendido sob a fórma de membrana. Mais tarde, os espiroquetas tornam-se muito delgados e com espiras estreitas (Fig. 5). O estádio de mul- tiplicação figurado no dezenho 5 e que 2.0 Während meines mehrmonatlichen Aufent- haltes in Manguinhos untersuchte ich vom Oktober bis Januar 1909 fast täglich nach Léff- ler gefärbte Ausstriche von mit Spirochaeta gallinarum infizierten Zecken (Argas miniatus Koch) und konnte folgendes feststellen: Zumeist am 3. Tage nach der Infektion treten die ersten Spirochaeten im Lakunom der Zecke auf; man braucht nur vorsichtig ein Bein der Zecke mit einer kleinen Scheere an- | zuschneiden und ist sicher, in der trüben leu- kocytenhaltigen Leibeshôhlenflüssigkeit bereits | Spirochaeten zu finden, deren Zahl spáter zu- nimmt. Im Lakunom findet eine Entwicklung statt und man kann folgende Stadien beobachten: 1) Spirochaeten, die den Leukocyten anlie- gen, zum Teil kann man sie auch im Innern der Leukocytenzellen nachweisen. 2) Vermehrungszustände der Spirochaeten. (Fig. 1 am 3. Tage, Fig. 2 am 7. Tage, Fig. 3 am 28. Tage etc.). In Fig. 1 sieht man zwischen den beiden Spalthalften des Spirochaetenleibes noch den haut- artig ausgezogenen Peripalast. In der Folgezeit werden die Spirochaeten sehr zart und enggewunden (Fig. 5). Das Ver- mehrungsstadium der Fig. 5, das aus dem Lakunom der Zecke 48 Tage nach der Infektion stammt, kann man als mul- provém do lacunoma dum argas, com 48 dias de infeção, póde ser interpre- tado como um estádio de repetidas di- vizões lonjitudinais, no qual os indivi- duos orijinados dessa divizão sucessiva se desdobram como os decimetros dum desses metros articulados uzados pelos carpinteiros. 3.0 Na cavidade do corpo, encontram-se, tambem, fórmas enroladas de espiro- quetas (Fig. 4). Examinando as glandulas salivares izo- ladas verifiquei a existencia dos primeiros es- piroquetas no fim de 14 dias. Aí se acham tambem no estádio de divizão lonjitudinal (Fig. 6 — 21 dias). No intestino; os espiro- quetas aglomeram-se muito cedo, morrendo PIP o. 4 3. 4 provavelmente a maioria delles. Aí encon- tram-se mais tarde fórmas empalidecidas, ou filamentos que aprezentam intumecencias do corpo celular, emquanto que o periplasto ainda é vizivel, sob a fórma de fio delgado e on- dulozo. (Fig. 7). Nos ovos dos argas não foram encon- trados espiroquetas. Destas pesquizas re- zulta que o Spirocheta gallinarum efetua um ciclo evolutivo (multiplicação, divizão multipla, fórmas delgadas, estádio de repouzo) que se processa em certo espaço de tempo e que, em consequencia disto, é encontrado no la- cunoma intato (mais ou menos depois do 3.0 dia) e nas glandulas salivares (mais ou me- nos no 14.0 dia). O carrapato é efetivamente o hospedeiro intermediario do Spirocheta e não simples transmissor passivo, como ultimamente, por varios, tem sido considerado. 80 e tiples Lângsteilungsstadium auffassen, in- dem sukzessive die einzelnen Teilindi- viduen sich auseinanderlegten wie die Dezimeterteile eines zusammenlegbaren Zimmermannmetermasses. 3) Kommen in der Leibeshóhle auch einge- rollte Spirochaetenformen vor Fig. 4). In der herauspräparierten Speicheldrüse wurden von mir die ersten Spirochaeten nach 14 Tagen gefunden. Es kommen hier auch Lângsteilungsstadien vor (Fig. 6, 21 Tage). Im Darm agglomerieren die Spirochaeten friikzei- tig und die Hauptmasse geht wohl zu Grunde. 5 sel Man findet hier spáter abgeblasste Formen oder Spirochaetenfaden, deren Zellleib lokal Anschwellungen besitzt, wahrend der Periplast als ein zarter, gewellter Faden noch vorhan- den ist. (Fig. 7). In den Eiern wurden keine Spirochaeten gefunden. Aus den Untersuchungen geht her- vor, dass Spirochaeta gallinarum in der Zecke eine über einen gewissen Zeitraum ausge- dehnte Entwicklung (Vermehrung, multiple Teilung, zarte Formen, Ruhestadien) durch- macht und dass man demgemäss die Spiro- chaeten im unverletzten Lakunom (ca. nach 3 Tagen) und in der Speicheldriise (ca. nach 14 Tagen) findet. Die Zecke ist der tatsdchliche Zwischenwirt der Spirochaeta und nicht etwa ein passiver Uebertrager, wie in der letzten Zeit von meh- reren Seiten angenommen wird. Multiplicaçäo dos bacterios em cultura. I. Constante de velocidade de multiplicação pelo Dr. Alcides Godoy, Assistente do Instituto. Ueber die Yermehrung der Bacterien in den Culturen. I. Die Constante ihrer Geschwindigkeit von Dr. Alcides Godoy, Assistenten des Instituts. — ME — Sobre a relaçäo existente entre o numero de bacterios e o tempo de vejetaçäo num meio de cultura näo säo muitos os trabalhos experimentais. NAEGELI, por meio de uma formula deduzia | da quantidade de acido formado, em tempos | conhecidos, por um bacterio zimojenico, a quantidade total de elementos que havia no liquido em fermentação; este metodo de ava- liação é assaz interessante, especialmente por | ser um processo indireto de pesquiza, para o julgamento dos rezultados obtidos por pro- cesso direto. BUCHNER, LONGARD e RIEDLIN, partindo | da idéa aprioristica que, sendo a segmentação dos bacterios a divizão transversal, rezultando | 2 unidades de cada celula preexistente, con- clue d'aí que conhecido o numero de bacte- rios semeados (a), e os existentes no fim de certo tempo (b), se poderia determinar o nu- mero de gerações (n) pela formula TE log. b — log. a E log. 2 conhecido o valor de n, o tempo necessario para a completa faze da vejetação a partir da | divizão que orijinou a nova celula, até aquelle | Die experimentellen Arbeiten über die Be- | ziehungen zwischen der Anzahl der Bacterien | und ihrer Vegetationszeit in einem Kulturme- | dium sind keineswegs zahlreich. NAEGELI be- | rechnete mit Hilfe einer Formel aus den, von einem Gährungsbacterium in bekannten Zeit- raumen gebildeten, Sâuremengen die Totalan- zahl der in der Gahrungsfliissigkeit vorhande- nen Individuen; diese Schätzungsmethode ist, gerade weil es sich um eine indirecte Unter- suchungsmethode handelt, von bedeutendem Interesse für die Beurteilung der durch einen | directen Prozess gewonnenen Resultate. BUCHNER, LONGARD und RIEDLIN gingen von der aprioristischen Idee aus, dass die Teilung der Bacterien eine transversale ist und aus jeder urspriinglichen Zelle zwei Ein- | heiten hervorgehen und schlossen daraus, dass, wenn die Anzahl der eingesäten Bacterien (a) und diejenige der nach einer bestimmten Zeit vorhandenen gegeben ist, man die Anzahl der Generationen aus folgender Formel bestim- men kônne. : “Log. b — Log. a a Log. 2 em que esta por sua vez, se desdobra, seria o quociente do numero de minutos decor- ridos na experiencia pelo numero z de gera- ções formadas. Os autores não provam a exatidão da formula pela avaliação do nu- mero de microbios em tempos diversos; só fazem duas determinações, a da quantidade semeada e a correspondente a certo tempo de vejetação. Julgam os autores que, sendo o tempo de duração da experiencia apenas de algumas horas a influencia da diminuição de alimentos não se fará sentir na velocidade da multiplicação. Este modo de considerar a multiplicação dos bacterios é demaziado elementar e sim- ples, contrario ás leis de formação na natu- reza. Já RAULIN, em 1867, havia demons- trado que existe uma relação numerica cons- tante entre o pezo do vejetal formado e o da substancia nutritiva dezaparecida do meio de cultura. Funcionalmente podemos considerar as ce- lulas, como porções limitadas de uma sub- stancia — substancia de natureza quimica ainda desconhecida — possuindo a propriedade de aumentar de massa, desde que se lhe for- neçam: os compostos quimicos necessarios a essa sinteze, a energia preciza e condições favoraveis de meio. Seria a substancia viva, como que uma especie de catalizador capaz de aumentar a massa pela sua propria ação. Na cultura dos microbios a equação da vida elementar manifestada a+q=2a+R deverá encontrar a sua mais clara aplicaçäo. Como se sabe, nesta equacáo, a reprezenta a substancia viva, q os alimentos, 2 um coefi- ciente maior que a unidade, e R os reziduos da assimilação. Rezulta disto que a quantidade de sub- stancia a formada é função de q, cazo o coe- ficiente ) não venha ainda por seu valor ser novo elemento para o calculo. No cazo es- pecial dos bacterios e nos meios de cultura de compozição não completamente determi- nada, a avaliação direta de g é impossivel, 82 Wenn der Wert von n bekannt ist, so wäre die Zeit für die ganze Vegetationsphase, vom Momente der Teilung, welche die neue Zelle lieferte, bis zu dem, in welchem diese | sich wiederum teilt, gleich dem Quotienten aus der Anzahl der verflossenen Minuten und der Zahl n der gebildeten Generationen. Die Autoren geben keinen Beweis der Richtigkeit ihrer Formel durch Schätzung der Keimzahl zu verschiedenen Zeiten, sondern machen nur zwei Bestimmungen, diejenige der einge- säten Menge und eine solche, die einer be- stimmten Vegetationszeit entspricht. Sie sind der Ansicht, dass, bei einer Versuchsdauer von nur einigen Stunden, der Einfluss der Vermin- derung der Nährstoffe auf die Vermehrungs- geschwindigkeit nicht bemerkbar werde. Diese Auffassungsweise der Bacterienver- mehrung ist allzu elementar und im Wider- spruch zu den Bildungsgesetzen in der Natur. Schon RAULIN hat 1867 nachgewiesen, dass zwischen dem Gewichte des gebildeten Pflan- zengewebes und der aus dem Nährmedium verschwundenen Nährsubstanz ein constantes Zahlenverhältniss besteht. Functionell kônnen die Zellen als begrenzte Teile einer — ihrer chemischen Natur nach un- bekannten — Substanz aufgefasst werden, wel- che die Fahigkeit besitzen, an Masse zuzu- nehmen, sobald ihnen die zu dieser Synthese nôtigen chemischen Verbindungen, die not- wendige Energie und günstige Bedingungen des Mediums geboten werden. Es stellt so- mit die lebende Substanz eine Art Katalysa- tor dar, der im Stande ist, seine Masse durch seine eigene Tatigkeit zu vermehren. Bei der Kultur der Microben sollte die Gleichung der elementaren Lebensäusserung a — ara ihre deutlichste Anwendung finden. Wie be- kannt, bedeutet a die lebende Substanz, q die Nahrstoffe, À einen Coefficienten, der grósser ist, als die Einheit und R die Residuen der Assimilation. Es folgt daraus, dass die gebildete Quan- titat der Substanz a eine Function von q ist, falls nicht der Coefficient 2 durch seinen Wert ein neues Element in der Rechnung bildet. 83 porem a quantidade de a póde ser determi- nada pelo numero de unidades formadas. As quantidades de bacterios formados e de ali- mentos existentes são inversas, isto é essen- cial ao modo de interpretar a experiencia que segue e as concluzões que della decorrem. Procurámos indicar com precizão as con- dições de. experiencia. Evitámos as cauzas capazes de obscurecer o fenomeno, regulari- zando as necessarias e eliminando as nocivas. As medidas de volume, assim como as de temperatura comportam exatidão superior a 1°/, e, na avaliação final das colonias de cada observação o erro não excede 4º/,. Interpretados os rezultados desta expe- riencia, de acordo com o modo de ação das massas quimicas, segundo a lei de GULDBERG e WAAGE, torna-se claro que a transformação dos alimentos, num meio nutritivo, em sub- stancia viva — e, por conseguinte a formação de nóvas celulas — se faz pelo processo geral das ações quimicas. FE’, pois, calculavel em limites de tempo em que o coeficiente ) pelo seu valor não altera completamente a marcha da reação, pela formula das reações mono- moleculares: — dt _ — dx Ck O valor de k, constante de velocidade de reação é determinado com tal aproximação que põe fóra de duvida a aplicabilidade da formula. Para verificarmos experimentalmente a con- cepção expendida procurámos estudar a mul- tiplicaçäo do bacilo tifico em um caldo de carne peptonizado a 1°/,, para o que ado- támos a seguinte tecnica. Tecnica. — A cerca de 10 c.c. de caldo adicionámos, de uma cultura de 12 horas, em caldo da mesma fabricação, a quantidade ne- cessaria para se obter uma lijeira turvação; lijeira, porem bem nitida. Desta primeira diluição adicionámos 0,05 c. c. a segundo tubo com egual quantidade do mesmo caldo; da diluição assim preparada retirámos 0,05 c.c. para terceiro tubo. Naturalmente, aji- tavamos cuidadozamente a mistura de modo a se dar repartição unifórme dos germens Im speciellen Falle der Bacterien und in Náhr- medien von nicht genau definirter Zusammen- setzung, ist die directe Schätzung von q un- môglich, dagegen kann die Quantitát a aus der Zahl der gebildeten Einheiten bestimmt werden. Die Zahl der gebildeten Bacterien und die Menge der vorhandenen Nährstoffe verhalten sich umgekehrt, was fiir die Erkla- rung des nachstehenden Versuches und der daraus folgenden Schliisse wesentlich ist. Ich habe versucht, die Bedingungen des Versuches klar anzugeben und die Ursachen zu vermeiden, welche die Beobachtung zu trii- ben im Stande waren, indem ich die notwen- digen Bedingungen regelte und die hinderli- chen vermied. Die Messungen des Volumens und der Temperatur gestatten eine Genauig- keit, die mehr als ein Procent beträgt und bei der schliesslichen Schatzung der Colonien in jeder Beobachtung gehen die Irrtiimer nicht über 4°/, hinaus. Deutet man die Resultate dieses Versuches in Uebereinstimmung mit der Wirkungsweise der chemischen Massen nach dem Gesetz von GULDBERG und WAAGE, so geht deutlich daraus hervor, dass in einem Culturmedium die Umwandlung der Náhr- stoffe in lebende Substanz und dem entspre- chend auch die Bildung neuer Zellen nach dem allgemeinen Process der chemischen Vor- gange stattfindet. Sie lässt sich also innerhalb von Zeitgrenzen, zwischen welchen der Coef- ficient durch seinen Wert den Ablauf des Vor- ganges nicht gänzlich verandert, aus der For- mel der monomoleculären Reactionen dt — dx berechnen. Der Wert von k, der Constanten der Geschwindigkeit der Reaction, lässt sich mit einer derartigen Annäherung bestimmen, das die Anwendbarkeit der Formel nicht zu bezweifeln ist. Um die auseinandergesetzte Auffassung experimentell zu controlliren, versuchte ich, die Vermehrung des Typhusbacillus in Nähr- bouillon mit 1 °/, Pepton zu studiren, wobei ich mich folgender Technik bediente : Technik. Zu ca. 10 c.c. Nährbouillon wur- den von einer zwôlfstündigen, in Bouillon —Ck MRE pue D no caldo. Da ultima diluição assim ob- tida, retirámos com pipeta normal, 1,00 c. c. que colocavamos em tantos tubos quan- tas as observações que zer: eram de vidro rezistente de Ehrhardt e Metz- ger de Darmstadt, (R-Glas), e submetidos a ação do vapor d'agua como indica ABEGG, e em seguida, depois de esgotados e secos eram fechados com rolha de borracha esterilizada pela ebuliçäo e seca. Os tubos eram, entáo, levados a um termostato modelo OSTWALD, previamente regulado para a temperatura ma- xima provavel do dia da experiencia, 27,0 gráos centigrados; a agua era mantida em contante ajitação por meio de turbina. A temperatura da agua ocilava em limites de 0,05 de gráo. A temperatura do exterior era, na ocaziáo da colocacáo dos tubos no termostato, de 260, e pouco decreceu no de- curso dos 105 minutos que durou a expe- riencia. Os tubos, apezar disto, permanece- ram sempre no termostato e somente ficaram á temperatura do laboratorio o tempo estri- tamente necessario para nelles se colocar o agar e derramal-o em placas. Depois de feita a I observação — tempo 0 — analoga ás adiante descritas, retiravamos, de 15 em 15 minutos, um tubo ao qual adicionavamos 10 c.c. de agar fundido e esfriado a 440. O tubo era ajitado 5 vezes por movimento de bascula, para egual repartição dos micro- bios; o agar era então derramado em placas de Petri. Com cada tubo faziamos 2 placas: a 1.2, na qual havia uma camada de agar que se gelificára, estando a placa imovel, de modo a formar superficie horizontal, rece- bia o agar semeado. Esta 1.2 placa recebia a quazi totalidade dos germens. No tubo com o qual se tinha preparado a 1.2 placa derramava-se nova porção de agar fundido e esfriado a 440, destinado a acarretar os mi- crobios existentes na porção restante de agar aderente as paredes do tubo. Com esta nova porção de agar preparava-se a 2.4 placa pelo processo habitual. As placas assim feitas apoz completa ge- lificação — cerca de 10 minutos — eram le- vadas para estufa regulada a 370. pretendiamos fa- | Os tubos de ensaio que empregámos | No in- | derselben Herstelluug gemachten, Kultur so- viel zugesetzt, als nóthig war, um eine leichte, aber deutliche, Trúbung zu erzielen. Von die- ser ersten Verdünnung wurden 0,05 cc. einem Tubus zugesetzt, der eine gleiche Quantitát der gleichen Nahrfliissigkeit enthielt; von der so hergestellten Verdiinnung entnahm ich 0,05 cc. für einen dritten Tubus. Natürlich wurden die Mischungen sorgfáltig geschüttelt, um eine gleichmássige Verteilung der Keime in der Bouillon zu erzielen. Von der letzten so her- gestellten Verdünnung entnahm ich mit einer Normalpipette je 1 cc. fiir so viele Tuben, als ich zu den Beobachtungen gebrauchte. Die verwendeten Reagenzgläschen waren aus R.- Glas von EHRHARDT und METZGER in Darm- stadt und wurden nach der Angabe von ABEGG mit Wasserdampf behandelt und nach dem Trocknen mit einem, durch Auskochen sterili- sirten, trockenen Gummipfropfe verschlossen. Die Róhrchen wurden hierauf in einen Ther- mostaten von OSTWALD gebracht, der zuvor für die wahrscheinliche Maximaltemperatur des Versuchstages, 27” Centigrade, regulirt war, wobei das Wasser durch eine Turbine in bestándiger Bewegung erhalten wurde. Die Wärme des Wassers schwankte innerhalb ei- ner Grenze von 0,05 Graden, wáhrend die Aussentemperatur 26° betrug, als die Róhr- chen in den Thermostaten gebracht wurden und während der 105 Minuten, welche der Versuch dauerte, nur wenig abnahm. Uebri- gens blieben die Tuben doch immer im Ther- mostaten und wurden der Laboratoriumstem- peratur nur so lange ausgesetzt, als für den Zusatz von Agar und das Giessen von Platten unbedingt nótig war. Nachdem die erste Be- obachtung (Zeit — Null) nach Art der unten beschriebenen gemacht war, entnahm ich von 15 zu 15 Minuten ein Róhrchen, dem ich 10 cc. geschmolzenen und auf 44º abgekiihlten Agars zusetzte. Dasselbe wurde fünf mal durch Schaukelbewegung geschüttelt, um eine gleich- mässige Verteilung der Microbien zu erzielen und der Agar darauf in Petrischalen ausge- gossen. Mit jedem Tubus machte ich zwei Platten; die erste enthielt eine Agarschicht, welche ohne Bewegung der Platte erstarrt war, sodass sie eine horizontale Oberflache darbot terior desta o ar não era artificialmente hu- midecido, o que, favorecendo a dessecação do meio nutritivo evitava um crecimento exa- jerado e a confluencia das colonias superfi- ciais. As placas ficavam na estufa, cobertas apenas com o papel de filtro que tinha sido colocado na face interna da tampa, antes da esterilização. Depois de 24 horas de estufa eram as placas d'aí retiradas e contadas as colonias. A contajem se fazia em aparelho por nos idéado e que oferece a vantajem da vizão simultanea, em mesmo plano das colonias e das divizões de escala semelhante a de BUERKER, para contajem de globulos sangui- neos, porem 21,5 vezes maior. Sob cada placa tracavamos dois diametros perpendiculares, li- mitando, assim, os quadrantes, e contavamos em cada quadrante a superficie de 4,622 cm.’ — 4 series horizontais de quadrados formam um quadrado grande, correspondente á su- perficie acima indicada. — Depois, contavamos sobre as linhas limitadoras outras tantas uni- dades de superficie. Obtinhamos assim 8 se- ries de contajens. Cada serie é, na expe- riencia, reprezentada pela soma de 4 parcelas formadas pelo numero de colonias contidas nas series horizontais de pequenos quadrados. Nossa unidade de superficie é */, da escala de BUERKER aumentada 21,5 vezes. Todas as colonias dezenvolvidas na 2.2 placa eram contadas diretamente, sem recorrer ao aparelho, marcando-se o lugar de cada RE en Quadenten de Obsrische vow 4622 sempre ser feito visto como, nessa placa, o numero de colonias é sempre pequeno. Con- tadas as 8 series da 1.2 placa, somam-se os seus valores para determinação do valor medio da serie. Determina-se a diferença que cada serie faz com esse valor medio; somam-se estas diferenças depois de elevadas ao qua- drado. Dividindo-se o numero obtido por 56, a sua raiz quadrada dá o erro provavel para cada serie; isto, segundo a conhecida formula F=3 1 2 d?n (n— 1) 85 und wurde mit dem besáten Agar beschickt; sie enthielt nahezu die gesamte Menge der Keime. In das Róhrchen, welches zur Her- stellung der ersten Platte gedient hatte, wurde eine neue Portion geschmolzenen und auf 44° abgekühlten Agars eingegossen, um die — in der noch zurückgebliebenen, den Wänden des Tubus anhaftenden, Agarmenge vorhandenen — Keime herauszuspiilen; mit dieser neuen Agarportion wurde die zweite Platte auf ge- wohnliche Weise angefertigt. Die so herge- _ Stellten Platten wurden nach vollstándiger Ge- rinnung, d. h. nach ca. 10 Minuten, in einen auf 37º regulirten Briitschrank gebracht; die Luft im Innern des Letzteren war nicht künst- lich feucht gemacht, sodass durch Begiinsti- gung der Austrocknung des Nährbodens ein übertriebenes Wachstum und ein Zusammen- fliessen der oberflachlichen Colonien vermie- den wurde. Die Platten blieben im Briit- schrank nur mit dem Filtrirpapier bedeckt, welches vor der Sterilisirung in die Innenseite des Deckels eingelegt worden war. Nach 24 Stunden wurden die Platten aus dem Briitschranke entnommen und die Colo- nien gezáhlt. Die Zählung geschah mit Hilfe eines von mir ersonnenen Apparates, welcher den Vorzug bietet, dass man gleichzeitig in einer Ebene die Colonien und die Abteilun- gen einer Scala erblickt. Letztere gleicht der- jenigen von BÜRKER für die Zählung der Blut- kórperchen, jedoch 21,5 mal grósser. Auf je- der Platte zeichnete ich zwei senkrechte Dia- meter und zählte auf jedem der so entstan- Quadratcentimeter, was einem grossen, aus 4 horizontalen Serien kleiner Quadrate gebilde- ten, Vierecke entspricht. Dann zahlte ich auf den Begrenzungslinien ebensoviele Oberfla- cheneinheiten und erhielt so acht Zählungs- reihen. Jede Serie ist in dem Versuche durch die Summe von vier Zahlen vertreten, welche jeweilen der Anzahl der, in den Horizontal- reihen von kleinen Quadraten enthaltenen, Co- lonien entsprechen. Meine Oberflacheneinheit ist gleich einer 21,5-fachen Vergrósserung des neunten Teiles einer Biirkerschen Scala. Alle in der zweiten Platte entwickelten Colonien wurden direct gezáhlt, indem der dd PP lank Determinado assim o valor medio de cada serie e seu erro medio provavel, são elles multiplicados pelo quociente da area da placa, pela superficie contada, em cada serie. Este produto reprezenta o numero total de colo- nias da 1.4 placa e seu erro medio provavel. Adicionado á esse valor o numero de colo- nias encontradas na segunda placa, tinhamos o numero total de microbios existentes em cada tubo, na ocazião de se fazer nelle a adição de agar. Fizemos as 8 observações seguintes: Ort jeder Colonie durch einen Tintenpunkt markirt wurde, was vollständig geniigt, da die © Anzahl der Colonien auf dieser Platte immer eine geringe ist. Nachdem die acht Serien der ersten Platten gezahlt sind, summirt man die Beträge, um den Mittelwert der Serie zu bestimmen. Fiir jede Serie bestimmt man den Unterschied von disem Mittelwerte und summirt diese Differenzen, nachdem man sie ins Quadrat erhoben hat. Wenn man die Summe durch 56 dividirt, so ergiebt ihre Qua- dratwurzel den wahrscheinlichen Durchschnitts- irrtum für jedeSerie nach der bekannten Formel: EG: y 2dº Ep n(n—1) Wenn so für jede Serie der Durchschnitts- wert und der wahrscheinliche Durchschnitts- fehler bestimmt ist, wird er in jeder Serie mit den Quotienten aus der Oberflâche der Platte und der gezählten Oberfläche multiplicirt; das Product ergibt die Gesamtzahl der Colonien der ersten Platte und den wahrscheinlichen Durchschnittsfehler. Durch Addition dieses Wertes zu der Gesamtzahl der auf der zwei- ten Platte gefundenen Colonien erhielt ich die Gesamtzahl der Keime, welche in jedem Róhrchen vorhanden waren, als ihm der Agar zugesetzt wurde. Ich machte die acht folgenden Beobach- tungen: | | I OsseRVAÇÃO | BEOBACHTUNG | (0 minutos) | (0 Minuten) Area da 1.2 placa = 63,61 cm.?. Flacheninhalt der Platte — 63,61 cm?. Superficie contada em cada serie = 4,622 cm.?. | In jeder Serie gezáhlte Oberflache = 4,622 cm?. Contajem da Serie N. | Zahlung der Serien N. 1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8 EA “32 120 4860 P26: +34: 196: 025 23. 7329 +29 “SO, +26. “BA SG" 25 251 “AA: 120 "26: “26. “34. “28. “29 259) “44-129 V26: 26), “SA, 028729 por 22 +39: 29) VOS, Col, 524: 223 | 20 SEM 39: “DO, 128: 531) +24: 503 05 15 VE 281 293: 36. 198, “27 128 beso Ci MOS 2339: bebo P29 US 102 123° A 119 118 435. TIL 104. | 102 1423 124 119 113. 185: 111. 104 Series Somas d d Serien Summen d d? 1 102 14 196 1 102 14 196 2 123 7 49 2 123 7 49 3 124 8 64 3 124 8 64 + 119 3 9 4 119 3 9 5 113 3 9 5 113 3 9 6 135 19 361 6 135 19 361 7 111 5 25 7 111 5 25 8 104 Bi. 14 | 8 104 12-14 931 857 931 957 Media das series = — = 116 Mittel der Serien = = = 116 Erro medio da media = + Re. +4 | Durchschnittsfehler = + ]/S57 — +4 56 | 56 Total e erro medio 1.2 placa | Total und Durchschnittsfehler Erste Platte 116 + 4.13,76 — 1596 + 56 116+4.13,76 = 1596 + 56 Erste PRIE"... 18960550 la placa— . . . . 1596456 Zi Plate =) 5.565 EM | SRS renal hart dd HE lei Total von I und Durch- a Total I e erro medio —. 1643+5 schnittsfehler = . . . 1643 +56 88 Il OsservAçÃo | BEOBACHTUNG II (15 minutos) | (15 Minuten) Area da 1.2 placa = 66,47 cm.?. | Oberfliche der ersten Platte — 66,47 cm”. Superficie contada em cada serie = 4.622 cm.?. | In jeder Serie gezáhlte Oberfliche — 4,622 cm”. Contajem da Serie N. | Zählung der Serien N. 1 2 3 4 5 6 Tl 8 | 1 2 3 4 5 6 7 8 65: 087 p34 924 628 p81 028 [29 | 35. «37 34 ¿24 428 631. 128500 25. B30 $82 025 426 val 209 ¿23-- | 25 ¿30 132: 425 426 (41 [207583 32 125. (25 +36 (49 (122. (28 037 82 125 125 #60 49: 022) 2580 20 Ol 225 132 080 126 ¿27 431 | 20 +31 025 192 ¿80 26. c27 0081 191 129 116 117 403 120 142 120 121 129 116 417 103 120 113040 Series Somas d d? | Serien Summen d d? 1 121 4 16 | 1 121 4 16 2 129 12 144 2 129 12 144 3 116 1 1 3 116 1 1 4 117 0 0 4 117 10 190 5 103 14 196 5 103 14 196 6 120 3 9 6 120 3 9 7 112 5 25 7 112 5 25 8 120 3 9 8 120 3 e 938 400 | 938 400 | 933 Mittel der Serien = “== 117 Media das series — > == 117 | 8 E ed | Durchschnittsfehler des Mittels — Erro medio da media — + er == 400 13 56 pe SCT SRE Total e erro medio 1.4 placa Total und Durchschnittsfehler Zweite Platte 117 3. 1438 = 1632 4.43 TITE 3.1438 1682243 Erste Platte = OS2ERAS la placa— . . . . 1682+ 43 | Zweite Platte =. .. md 2aplaa=.... 41 _ | Total von Il und Durch- Total II e erro medio — . 1723 + 43 | schnittsiehler =. ..: = 17235648 HI OsseRvAÇÃO (30 minutos) Area da 1.2 placa = 59,44 cm.?. Superficie contada em cada serie = 4,622 cm.”. Contajem da Serie N. 1 2 3 4 5 6 ti 8 128 497 182 151 118 158 140 152 Series Somas d d? 1 128 ps! 121 2 137 2 4 3 132 Ti 49 4 151 12 144 5 118 21 441 6 158 19 261 fi 140 1 1 8 _152 13 _169 1116 1200 Media das series — = — 139 Erro medio da media — + = — +5 5 Total e erro medio 1.2 placa 139+5.12,86 — 1787 + 64 laplaca= . 1787 + 64 Di placa == uol ow | BS lc Total III e erro medio ==. 1870 + 64 BEOBACHTUNG III (30 Minuten) Oberfliche der ersten Platte — 59,44 cm”. In jeder Serie gezählte Oberflache — 4,622 cm?. Zahlung der Serien N. 1 2 3 4 5 6 7 8 33 80 192 +40 726 “44 280 =27 22 85 "42 "AL *26. 038 (40. 089 128 137 132 151 118 158 140. 152 Serien Summen d d? 1 128 11 121 2 137 2 4 3 132 7 49 4 151 12 144 5 118 21 441 6 158 39 361 {j 140 1 1 8) _152 13); 169 1116 1290 Mittel der Serien — == = 139 Durchschnittsfehler des Mittels = 141/4890: 4-5 56 Total und Durchschnittsfehler Dritte Platte 139 + 5 . 12,86 = 1787 + 64 Erste Platte = 1787 + 64 Zweite Platte—. . . . 83 Total von III und Durch- schnittsfehler 1870 + 64 90 IV OsservaçÃo BEOBACHTUNG IV (45 minutos) | | | | (45 Minuten) Area da 1.2 placa = 62,21 cm.?. Oberfláche der ersten Platte — 62,21 cm?. Superficie contade em cada serie — 4,622 cm.?. | In jeder Serie gezáhlte Oberfláche — 4,622 cm?. Contajem da Serie N. | Zahlung der Serien N. 1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8 2s (25 +40 397 088 (41 085 136 28 425 140. 587 (38 cal 085 Rs 83 083 326 081" 120 dO ¿28 297 | 33 033 #26 481 129 - CAN ¿38 Ban 80 (87 186: cBT Nal 035: 182 189. | 60 137 [86 187 PAT 135 28208 42. 084 039 ES6 (85 (82 122 0440 42 334 099 ¿36 135 (92 22 0H 155 000 44F 141 143 d48 127 162 | 133 120 441 141 143 148 197 MA Series Somas d d2 Serien Summen d d? 1 133 7 49 | 1 133 7 49 7 129 11 121 2 129 11 121 3 141 1 1 3 141 1 1 4 141 1 1 4 141 1 1 5 143 3 9 5 143 3 9 6 148 8 64 6 148 8 64 7 127 13 169 7 127 13 169 8 162 22 484 8 162 22 484 1124 898 1124 898 z ï 1124 Media das series — us + —110 | Mittel der Serien — 26 mA 140 QE Durchschnittsfehler des Mittels — - 17 898 | Erro medio da media + | = — + 4 | ++ Total e erro medio 1.2 placa | Total und Durchschnittsfehler Erste Platte 140 + 4 . 13,46 — 1884 + 54 | asta 138 IP Erste Platte ==" + . IAN la placa— . . . . 18841454 Zweite Platte —. - a Dear pa ei bica LAR, fds Total von IV und Durch- Total IV e erro medio —. 1971 +54 schnittsfehler . . . . 1971+54 india agia PAU ad ad Gs. Rs das OE Es V OBsERvAÇÂO (60 minutos) Area da 1.2 placa = 63,6 cm.’. Contajem da Serie N. 1 2 3 À 5 6 7 8 32:93 °03 :46 097 "98 20 (40 SE 1625 “ST 636 099 40-130 45 185 “188 149 146 “120 453 151 145 Series Somas d d? 1 135 7 49 2 138 4 16 3 149 ÿ 49 4 146 4 16 5 120 22 484 6 153 11 121 i 151 9 81 8 145 3 9 1137 825 Media das series — = — 142 Erro medio da media — + = — + 4 Total e erro medio 1.2 placa 142 + 4. 13,76 — 1954 + 55 LHplaca—.. 1954 + 55 DA placa ==" |. hen 92 ino Total V e erro medio — . 2036+ 55 BEOBACHTUNG V (60 Minuten) | Oberfläche der ersten Platte — 63,61 cm”. Superficie contada em cada serie = 4,622 cm.?. | In jeder Serie gezáhlte Oberflache — 4,622 cm. Zählung der Serien N. 135 138 149 146 120 153 151 145 Serien Summen d d? 1 135 7 49 2 138 4 16 3 149 7 49 4 146 4 16 5 120 22 484 6 153 11 121 7 151 9 81 8 145 3 9 1137 825 Mittelcder Serien = a — 142 Durchschnittsfehler des Mittels — dy pupa 56 Total und Durchschnittsfehler Erste Platte 142+4 . 13,76 = 1954 +55 Erste Platte == 1054 + 55 Zweite Platte=-. . . . 82 Total von V und Durch = — schnittsfehler — . 2036 + 55 92 VI OBsERvAÇÂO | BEOBACHTUNG VI | (75 minutos) | (75 Minuten) Area da 1.2 placa — 65,03 cm.?. | Oberflache der ersten Platte — 65,03 cm”. Superficie contada em cada serie — 4,622 cm.?. | In jeder Serie gezáhlte Oberflache — 4,622 cm?. Contajem da Serie N. 1 2 3 4 5 6 7 8 dO 030 339 (80 ¿51 34 038 123 33, MHZ 331 490 034 36 CAT 121 28° 192 189. 0380) 180 189 45 (40 143 141 138 136 157 149 150 133 Series Somas d d? 1 143 0 0 2 141 2 4 3 138 5 25 4 136 7 49 5 157 14 196 6 149 6 36 7 150 7 49 AIRE RE ae 1147 459 Media das series — a EAS Erro medio da media — +) = — +3 Total e erro medio 1.2 placa 143 +3. 14,07 = 2011 + 42 la placa = . 2011 + 42 AS DI 90 Total VI e erro medio =. 2101 + 42 Zahlung der Serien N. 1 2 3 4 5 6 7 8 40 030 89 30 “Bl 34 15:08 42 191 483 86 636 THD. 85 DB 143 141 138 136 157 149 150 133 Serien Summen d d? 1 143 0 0 72 241 2 4 3 138 5 25 4 136 7 49 5 157 14 196 6 149 6 16 7 150 7 49 e de 4 1147 459 Mittel der Serien — — = 143 Durchschnittsfehler des Mittels = + Bs 56 Total und Durchschnittsfehler Erste Platte 143553, 14,07 — 2011 42 Erste Platte = 2011 + 42 Zweite Platte =. É 90 Total von VI und Durch- schnittsfehler — . 2101 + 42 ga A VII OxssErvacAo (90 minutos) Area da 1.2 placa — 66,47 cm.?. Superficie contada em cada serie = 4,622 cm.’. Contajem da Serie N. 1 2 3 4 5 6 7 8 E 189 742 y87 385" 7933 735. 029 4 89 038 049 ¡33 142 46 ;A0 133 154 141 173. 185. 156 157 153 Series Semas d d? 1 133 17 289 2 154 + 16 a 141 9 81 4 173 23 529 5 135 15 225 6 156 6 36 7 157 a 49 8 _153 3 Sie 1202 1234 Media das series — = —15Ù Erro medio da media — + = = + 22 Total e erro medio 1.2 placa 150 + 22. 14,38 — 2157 + 316 1a placa — . 2157 + 316 y = | 4.10, - 98 Total VII e erro medio—. 2255 + 316 BEOBACHTUNG VII (90 Minuten) Oberflache der ersten Platte — 66,47 cm?. In jeder Serie gezáhlte Oberfläche — 4,622 cm?. Zahlung der Serien N. 1 2 3 4 5 6 7 8 33 (89 (22 087 1695 183 055 (0809 94 +89 138 (49 93 ¿42.146 “40 133 154 141 173 135 156 157 153 Serien Summen d dº 1 133 17 289 2 154 4 16 3 141 9 81 4 173 23 529 5 135 15 225 6 156 6 36 7 157 7 49 8 153 ag 1202 1234 Mittel der Serien — == ISO Durchschnittsfehler des Mittels — —+]/4_ 40 56 Total und Durchschnittsfehler Erste Platte 150-+ 22, 1438 — 2157 +316 Erste Platte — 2157 +316 Zweite Platte. . . . 98 Total von VII und Dark schnittsfehler = . 2255 + 316 94 — — VIII OBsERvAÇAO (105 minutos) Area da 1.2 placa = 63,61 cm.?. Superficie contada em cada serie — 4,622 cm.?. Contajem da Serie N. 1 2 3 4 5 6 7 8 899835 043 835) 280 285) 822º Mi 45 033 294 G41 2309 “mo. 44 ESS BS! AZ apo) RSS DAI MO DAM AS So 0871 699 VÃO 186.40 141 6937 155 157 67 149 155 161. 148 “159 Series Somas d a? 1 155 1 1 2 157 1 1 3 167 11 121 4 149 7 49 5 155 1 1 6 161 5 25 7 148 8 64 8 159 3 9 1251 271 Media das series — => = 156 Erro medio da media — E =+2 Total e erro medio 1.4 placa 1502 13,70 = 2141 a 27 la placa — . za placa ==" 2147 + 27 in ES Total VIII e erro medio — 2225 + 27 BEoBACHTUNG VIII (105 Minuten) Oberflache der ersten Platte — 63,61 cm?. | In jeder Serie gezáhlte Oberflache — 4,622 cm?. Zahlung der Serien N. 1 2 3 4 5 6 7 8 39 295 "43 085. 439 235 Me2 0 45 "33 “34 41 “30 046 44 Bas 38 242 451 33 041 40) FALLOS 33 147 “39 “40 136 240 “141087 155 157 167 149 155 161 148 150 Serien Summen d d? 1 155 1 1 2 157 1 1 3 167 11 121 | 4 149 7 49 | 5 155 1 1 | 6 161 5 25 fl 148 8 64 bi. © Fi. aa 1251 271 Mittel der Serien — == 156 Durchschnittsfehler des Mittels — cy SE 56 Total und Durchschnittsfehler Erste Platte 156:-2:2 « 13510 = 2147 see Erste Platte — 2147 + 27 Zweite Platte — IS Total von VIII und Durch- schnittsfehler - —+2 2225 + 27 95 Säo estes os numeros totais de colonias e | seu erro medio em cada observação, e, como é mais correto e traz simplificação ao calculo escrevemos sómente os 3 primeiros algaris- | mos, separando por um ponto a caza dos milhares: Dies sind die Totalzahlen der Colonien | und ihr Durchschnittsfehler in jeder Beobach- tung; da es richtiger ist und die Berechnun- gen vereinfacht, schreibe ich nur die drei ersten Zahlen, indem ich die Tausende durch einen Punkt abtrenne: Total de colonias e erro Totalzahl der Colonien und Observaçäo provavel I 1.64 + 0.05 II 1.72 + 0.04 HI 1.87 + 0.06 IV 1.97 + 0.05 V 2.03 + 0.05 VI 2.10 + 0.04 VII 225. + 0316 VIII 2.22 + 0.02 Dos valores acima podemos deduzir o nu- mero de microbios formados durante as fazes da experiencia. A variação para mais ou | para menos dos valores de cada observação, rezultante do erro de contajem, faz com que tenhamos, para cada observação, dois valores | um maximo e um minimo: Observação max. min. I 1.69 1.59 II 1.76 1.68 HI 1:93: 0131 IV 2.02 © 192 V 2.08 1.98 VI 2.14 2.06 VII 2.56 1.94 VIII 2.24 2.20 A quantidade de microbios será reprezen- tada pelo valor maximo, quando d'um valor maximo subtrairmos um minimo, ou por um valor minimo quando de um minimo subtrair- mos um maximo. Os numeros, rezultantes da subtração dos valores maximo ou minimo da observação VIII de um valor minimo ou maximo de uma outra observação, dão respetivamente o nu- mero maximo ou minimo de bacterios, for- mados no tempo correspondente ao numero de minutos obtidos pela subtração do nu- mero de 105, — tempo total da experiencia de minutos decorridos do inicio da experien- cia, até a observação que se estuda. São Beobachtung wahrscheinlicher Fehler I 1.64 + 0,05 Il 1.72 + 0,05 HI 1.87 + 0.06 IV 1.97 + 0,05 V 2.03 + 0,05 VI 2.10 + 0,04 VII 2.25 + 0,31 VIII 2.224 '0.02 Von den obigen Werten kann man die Zahl der wahrend der Versuchsphasen gebil- deten Keime abziehen. Das Schwanken der Versuchsfehler - nach plus und minus macht, dass wir fiir jedes Experiment einen Maximai- und einen Minimalwert haben: Beobachtung Max. Min. I 1.69 1.79 II L667 1.58 HI 193 "TSI IV 2.02 192 V 2.08 1.98 VI 2.14 2.06 VII 2.56 1.94 VIII 2242 220 Die Anzahl der Keime wird durch einen Maximalwert repräsentirt, wenn wir von einem Maximalwert ein Minimum oder durch einen Minimalwert, wenn wir einem Minimum ein Maximum subtrahiren. Die Zahlen, welche aus der Subtraction der Minimal- und Maximalwerte einer anderen Beobachtung von den Maximal- und Minimal- werten der Beobachtung VIII erhalten werden, geben jeweilen die Maximal- und Minimal- zahlen der im gegebenen Zeitraum gebildeten Bacterien; derselbe entspricht der Anzahl der Minuten, welche man durch Subtraction der Zahl von Minuten, welche seit Beginn des Versuches bis zu der betreffenden Beobach- tung vergingen, von 105, der gesamten Ver- 96 estes os valores maximos e minimos corres- | suchszeit, erhält. Es sind dies die Maximal- pondentes a cada espaço de tempo: und Minimalwerte, die jedem Zeitraum ent- : sprechen : minutos max. min. 105 0.65 0.51 Minuten Max. Min. 90 0.56 0.44 105 0.65 0.51 75 0.43 0.27 90 0.56 0.43 60 0.32 0.18 15 0.43 0.27 45 0.26 0.12 60 0.32 0.18 30 0.18 0.06 45 0.26 0.12 15 080 - 422 30 0.18 0.06 15 004 . > Vejamos a media entre os valores ma- a Ee Hier sind die Mittel aus den Maximal- und ximos e minimos de cada tempo: Minimalwerten jedes Zeitraums: minutos media 105 0.58 ee ose 90 0.50 90 0.50 15 0.36 75 0.36 60 0.25 60 0.25 45 0.19 45 0. 19 2 qna 30 0.12 A diferença entre 0.58 e 0.50 corresponde Der Unterschied zwischen 0.58 und 0.50 á quantidade de microbios formados nos 15 primeiros minutos; entre 0.58 e 0.35 nos 30 primeiros, etc., assim: | entspricht den in den 15 ersten Minuten ge- | bildeten Keimen; der zwischen 0.58 und 0.35 den in den ersten 30 Minuten etc., also: minutos quantidade Minuten AA 2 = 15 0.50 30 0.35 30 0.35 = 0.25 45 0.25 Bn 0,19 60 0.19 75 0.12 75 012 Apliquemos aos valores acima a formula Wenden wir die obigen Werte auf die EM, Formel k om OE Co REC, k — Log. Co — Log. € Ó que é a integração de —dt/—dx=Ck, e | an, welche die Integrale von — dt/ — dx =Ck calculemos a constante k: ist und berechnen wir die Constante k: minutos valores log. C, — log. C 0.4343 k Minuten Werte Log. C; — Log. C 0.4343k 0 0.58 — — 0 0.58 — — 15 0.50 0.06446 0.0430 15 0.50 0.06446 0.0430 30 0.35 0.21836 0.0728 10 0.35 0.21836 0.0728 45 0.25 0.36549 0.0812 | 45 0.25 0.36549 0.0812 60 0.19 0.48468 0.0808 60 0.19 0.48468 0.0808 75 0.12 0.68425 0.0912 75 0.12 0.68425 0.0912 valor medio de 0.4343 k= 0.0738 Mittelwert von 0.4343 k = 0.0738 El, ee 0.0738 microbios seria pois o numero for- mado por 1.64 em cada minuto, si se reti- rassem os novos microbios formados, 4 me- dida de sua formaçäo, se neutralizassem as substancias nocivas existentes e se adicio- nassem as gastas pela vejetaçäo. Conhecido assim a constante de multipli- cação do bacilo tifico, em caldo á tempera- tura de 27.0 C. vejamos qual a concordancia entre os valores encontrados nas nossas ob- | servações e os calculados com o auxilio dessa constante : 0.4343 k minutos log.C,—log.C valores 0.0738 0 = 0.58 — 15 0.1107 0.45 — 30 0.2214 0.35 — 45 0.3321 0.37 — 60 0.4428 0.21 — 75 0.5535 0.16 — 90 0.6642 0.12 — 105 0.7749 0.10 Damos agora no seguinte quadro, á co- luna 1.4, o numero de microbios da obser- vação VIII e na 2.2 coluna o numero de mi- crobios formados durante as diferentes fazes da experiencia. Subtraído dos valores da 1.a coluna os seus correspondentes da 2.8, obte- mos os da 3.2 que, como já dissemos ante- riormente, reprezentará para cada observação, o numero de colonias que se deveram en- contrar, cazo a concordancia entre os nume- ros de colonias observadas e as calculadas com o auxilio da formula das reações mo- nomoleculares fosse completo: 2.22 — 0.50 — 1.64 — — 045=1.77 — — 0.35—1.87 — — 0.27 = 1.05 — — 0.21 — 2.01 — — 0.16 — 2.06 — — 0.12 —2,10 — — 0.10 —=2.12 Ainda nas tres colunas seguintes se encon- tram: na la os valores medios de cada obser- vacáo, na 2a os calculados, na 3a os mesmos valores aumentados ou diminuidos nos limi- tes de seu erro medio provavel, com o fim 0.0738 wáre also die Anzahl der von 1.64 in jeder Minute gebildeten Keime, wenn man die neu gebildeten, in dem Maase, wie sie entstehen, entfernen wiirde, unter Neutralisi- rung der vorhandenen schádlichen Substan- zen und Ersetzung der beim Wachstum ver- brauchten. Wenn demgemáss die Constante der Ver- mehrung des Typhusbacillus in Náhrbouillon bei 27,0 bekannt ist, vergleichen wir die in | unseren Beobachtungen gefundenen Werte mit den mit Hilfe dieser Constanten berech- | neten: 0.434 k Minuten Log. C¿— Log. C Werte 0.0738 0 — 0.58 0.0738 15 0.1107 0.45 0.0738 30 0.2214 0.35 0.0738 45 0.3321 0.37 0.0738 60 0.4428 0.21 0.0738 75 0.5535 0.16 0.0738 90 0.6642 0.12 0.0738 105 0.7749 0.10 Wir geben nun in der folgenden Tafel in der ersten Columne die Anzahl der Keime der Beobachtung VIII und in der zweiten die- jenige der in den Versuchsphasen gebildeten: 2.22 — 0.50 — 1.64 2.22 — 0.45 — 1.77 2.22 — 0.35 — 1.87 2.22 — 0.27 — 1.95 2.22 — 0.21 — 2.01 2.22 — 0.16 — 2.06 2.22 — 0.12— 2.10 2.22 — 0.10 = 2,12 In der nachfolgenden Tabelle findet man in der ersten Columne die Mittelwerte jeder Beobachtung, in der zweiten die berechneten und in der dritten dieselben, aber innerhalb der Grenzen der wahrscheinlichen Versuchs- fehler vermehrt und vermindert, um die inner- halb der Fehlergrenzen bestehende Ueberein- stimmung zwischen den berechneten und beob- achteten Werten zu zeigen: CR O, o de mostrar a concordancia dentro desses li- mites, entre os valores calculados e obser- vados: obereiganO DEEE, gen) E I 1.64 1.64 1.64 Il 172 sft 1:77 Ill 1.87 1.88 1.88 IV 1.97 1.95 1.95 V 2.03 2.01 2.01 VI 2.10 2.06 2.06 VII 2.25 2.10 2:25 VIII 292 242 2.20 A concordancia é completa nas 6 primei- ras observações; a V porem, está já prova- velmente em dezacordo, pois foi necessario o maior afastamento permitido para que a concordancia fosse completa entre o valor da 2a e 3a colunas. Na VIII o afastamento é bastante grande. Esta discordancia deve ser atribuida á formação de novos microbios, dotados, como os primeiros, da faculdade de reprodução, capazes de compensarem, por | um compensiren kônnen. esta razão, o decrecimento das substancias | nutritivas, no meio de cultura. | | Devem is, á serie de analojias que | - BUS : ar ias bs he Se | pflanzlicher Zellen und derjenigen unorgani- RAULIN indicou, entre a formação dos veje- tais e a dos compostos não organizados acre- centar a seguinte: A formação de certos vejetais microscopicos se faz segundo a mesma lei que reje a dos compostos não organizados (Lei de GULDBERG- WAAGE). Beobachtung Beob. Werte Berechn. Werte Lu I 1.64 1.64 1.64 Il 172 1.77 1.77 HI 1.87 1.88 1.88 IV 1.97 1.95 1.95 V 2.03 2.01 2.01 VI 2.10 2.06 2.06 VII 2.25 2.10 2.25 VIII 292 2.12 2.20 In den ersten 6 Beobachtungen ist die | Uebereinstimmung eine vollständige ; die fiinfte jedoch stimmt wahrscheinlich bereits nicht mehr überein, da die grósste Abweichung nótig war, um die vóllige Uebereinstimmung zwischen den Werten der zweiten und dritten Columne herbeizufiihren. In Beobachtung VII und VIII ist die Abweichung ziemlich gross. Dieselbe muss der Bildung neuer Keime zu- geschrieben werden, welche, wie die ersten, reproductionsfähig sind und deshalb die Ab- nahme der Nährsubstanzen in dem Culturme- Wir müssen daher der Reihe von Analo- gien, welche RAULIN zwischen der Bildung scher Verbindungen angegeben hat, die Fol- gende hinzufügen: Die Bildung gewisser mikroscopischer Pflan- zen geht nach demselben Gesetze vor sich, wel- ches die nicht organisierten Kórper regiert (Ge- setz von GULDBERG-WAAGE). Echinostomum crotophagae, n. sp. Novo parazito do anu azul. Crotophaga maior. L. pelo Dr. Gomes de Faria. (Estampa 5) Echinostomum crotophagae, n. sp. À new parasite of the blue anú, Crotophaga maior, L. by Dr. Gomes de Faria. (With plate 5) Material: O material que serviu para a descrição desta especie foi em parte colecionado por nós, em diversos exemplares de Crotophaga maior, caçados nas marjens dos Rios Tieté e Paraná e tambem em 2 exemplares trazidos do Estado do Pará pelo Dr. A. Lurz. Habitat : Vive no intestino delgado do anú azul, — Crotophaga maior L. Caracteres externos: Dimensões: O comprimento varia entre 3 mm e 8mm e a largura maxima entre 1 mm | e 19mm. Os exemplares estudados têm as | seguintes dimensões: Largura maxima Comprimento 1. exemplar 1,2mm 6 mm Ze » 1,5 mm 7 mm J: » 1,6 mm 6 mm 4 » 1,5 mm 6,5 mm 5. » 1,0 mm 3 mm 6. » 1,9 mm 8 mm Cor: Quando vivos, são de côr branca acinzen- tada. Movimentos: Logo que são tirados do animal e exami- nados em agua fiziolojica mostram vivos mo- Source of Material: This species has ben described from se- veral specimens collected by the author while hunting on the margins of the rivers Tieté and Paraná and from two other specimens brought by Dr. LUTZ from the state of Pará. Habitat: Small intestine of the Crotophaga maior L. External caracters: Size: The parasites vary from 3 mm to 8 mm in length, and from 1 mm to 1,9 mm in maximum breadth. Six specimens gave the following measurements in millimeters: maximum breadth length 1st specimen 1,2 mm 6mm Zs > 1,5 mm 7 mm oes » 1,6 mm 6 mm 4th > 1.5 mm 6,5 mm 5th » 1,0 mm 3 mm 6th » 1,9 mm 8 mm Colour : Greyish white, when living. Movements of the worm: The living worm when taken from the animal and placed in salt solution showed Lange vimentos de alongamento e retraçäo do corpo, assim como tambem tendem a enrolar-se. Forma: O corpo é fuziforme, a extremidade ante- rior, afilada e a posterior tambem afilada ter- | mina em saliencia obtuza. Entre a ventoza bucal e ventral o corpo sofre um achata- mento, o que o torna mais delgado. Superficie: Na face dorsal, o tegumento externo até ao nivel do póro genital é revestido de espi- nhos que na face ventral chegam até o limite dos */, anteriores do parazito. Os espinhos do tegumento externo vão se tornando mais raros e menores, á proporção que se aproxi- mam da extremidade posterior. Segmento cefalico: O segmento cefalico é formado por uma orla ou gola espessa que cerca a ventoza bucal. Esta orla quazi circular é largamente chanfrada em lozango na face ventral. Na borda livre da orla inserem se os espinhos como cerca- dura, variando o numero delles nos diversos individuos, atinjindo no maximo a 36. Em um exemplar contámos 32 e em outro 33. A inserção faz-se profundamente no tegu- mento externo. Os espinhos são cilindro-co- nicos com a extremidade livre afilada. O ta- manho dos espinhos é variavel, sendo maiores aquelles que se aproximam da chanfradura ventral. Os maiores medem de 156 a 160 micra, os menores de 134 a 140. São inseridos em uma unica fileira regular, tendo as pontas voltadas para a extremidade superior do verme. Ao nivel da chanfradura ventral a cuticula externa | sofre um reviramento para baixo, de modo que, em geral, quatro espinhos ao mesmo tempo se voltam para dentro e tomam inser- ção um pouco mais acima da fileira regular, sotopondo-se aos que formam esta ultima. A ventoza bucal acha-se situada no centro do segmento cefalico. E” quazi circular, porem achatada no sentido antero-posterior. Em se- ção transversal esta ventoza mostra contorno imperfeitamente circular, notando-se as pare- des fortemente musculozas, constituidas sobre- tudo de fibras radiarias entre as quais se en- contram, as bem conhecidas celulas nervozas: brisk movements of extension and retraction, as well as a certain tendency to roll up. Shape : The specimens are canoe shaped with an attenuated oral and caudal extremity. The latter ends in a blunt protrusion. Between the oral and ventral sucker the worm is se- mewhat flattened and therewise somewhat, slender. Surface: Dorsally the external surface is provided with spines all along till the genital pore, and ventrally the spines cover */, of the surface of the worm. The spines grow smaller and rarer towards the posterior extremity. The head: The head consists of a thick expanded disc in the center of which there is the oral sucker. The almost circular disc shows ven- trally a lozenge form hollow. The margin of the disc is set with a single row of spines varying in number. The largest number we could count was 36. One specimen had 32 and an other 33 apines. The spines are cy- lindro-conical with an attenuated extremity. They are deeply inserted in the skin surface. Varying in size, the largest ones are those near the lozenge form hollow. The largest ones measure 134 to 140 mi- cra. They mantain one straight line and their extremity points to the caudal end of the worm. At the level of the ventral hollow the cuticle turns downwards so that four of the spines are inward turned and inserted at a somewhat higher level than the regular line of insertion. The almost round sucker, situa- ted in the center of the head is flattened an- tero-posteriorly. A transverse section shows that the mouth sucker is not quite round; microscopically the well developped muscles, consisting mostly of radical fibres and amongst these the well known nervous cells are to be seen. The oral sucker measures 184 micra an- ee As dimensões desta ventoza são: Exemplar de 6,5 mm: Diametro antero-posterior 184 micra, » transverso 226 > Exemplar de 6mm: Diametro antero-posterior 120 micra, > transverso 152 Ventoza ventral: Esta ventoza é bem dezenvolvida nesta especie, sendo muito maior que a bucal. Tem a fórma ovoide, cuja extremidade mais fina acha-se voltada para o polo posterior do corpo. Fica situada para o terço anterior do corpo, é saliente, fortemente musculoza, tendo a abertura mais ou menos circular voltada para o segmento cefalico: As dimensões são as seguintes: Exemplar de 7 mm.: Diametro antero-posterior 1,11 mm » transversal maximo 420 micra Exemplar de 7 mm.: Diametro antero-posterior 764 micra » transversal maximo 736 » Exemplar de 6 mm: Diametro antero-posterior 792 micra » transversal maximo 770 » A distancia entre a ventoza anterior e posterior é em um exemplar de 7 mm de 550 micra e em um outro de 8 mm de 772 micra. | Póro genital: O póro genital fica situado um pouco para | traz da ventoza ventral e imediatamente para diante da bifurcação intestinal. Anatomia interna Aparelho dijestivo: Este aparelho é formado de um muito curto prefaringe que nace no centro da ven- toza bucal. Segue-se a este um farinje bem dezenvolvido, piriforme, de paredes fortemente musculozas e cuja luz examinada em seção transversal é triangular. As dimensões são as seguintes: Exemplar de 6,5 mm.: Diametro antero-posterior 192 micra » transversal maximo 180 » Exemplar de 6,5 mm.: Diametro antero-posterior » transversal 220 micra 160 » tero-posteriorly and 226 micra transversally in | specimen 6,5 mm long and 120 micra antero- posteriorly and 152 micra transversally in spe- cimen 6 mm long. Ventral sucker : In the anterior third of the worm lies the well developped ventral sucker ovoid in form and much larger than the oral sucker, the at- tenuated extremity is turncd towards the cau- dal extremity. The muscles of the protruding ventral sucker are well developped. The more or iess circular orifice is iurned towards the cephalic extremity. The ventral sucker measures 1,11 micra | antero-posteriorly and 420 micra transversally in specimen 7 mm long, 764 micra antero-pos- _ teriorly and 736 micra transversally in speci- men 7 mm, 792 micra antero-posteriorly and 770 micra transversally in specimen 6 mm long. The space between the oral and ventral | sucker measures 550 micra in spesimen 7 mm | long and 772 micra in specimen 8 mm long. Genital pore: The genital pore is situated caudad of the ventral sucker and cephalad of the intestinal fork. . Internal anatomy. Digestive tract: Extending from the center of the oral su- | cker a very short prepharynx may be distin- guished. From the prepharynx rises a well develop- ped, musculous, pear shaped pharynx; the lu- men of the latter appears triangular in tran- verse section. The measurements in micra are the follo- wing: Specimen 6,5 mm long 192 micra antero-posteriorly 180 » transversally 6,5 mm long 220 » antero-posteriorly 160 » transversally 7 mm long 228 » antero-posteriorly 222 » transversally Exemplar de 7 mm.: Diametro antero-posterior 228 micra » transversal 222 » Do faringe nace um. ezofago curto e fino que se bifurca em U para formar os dois tubos cecais. A bifurcação se faz em !/,, mais ou menos do comprimento total da borda da extremi- dade cefalica do corpo e imediatamente para | traz da abertura genital. Os dois cecos ou ramificações intestinais se colocam nas partes laterais do corpo junto ás bordas, contornando o acetabulum, ficando em parte cobertos pelas glandulas vitelojenas ás quais excedem um pouco na parte poste- | rior do corpo, onde terminam em fundo de saco. ou anastomoze: Aparelho genital: Orgãos masculinos: Os testiculos ficam situados na metade posterior do corpo entre os tubos intestinais. São implantados mais para a superficie ventral que para a dorsal; | têm a fórma ovoide, o maior diametro sendo antero-posterior. São colocados, um logo apoz outro, sendo separados apenas por pequena | faixa de tecido conjuntivo do parenquima. O testiculo posterior é um pouco maior que o anterior; vistos em preparados ¿n-toto, o contorno é perfeitamente regular, porem nos | córtes aprecia-se uma nitida lobulaçäo. As dimensôes dos testiculos sáo as se- guintes: Exemplar de 6,5 mm.: Testiculo anterior: Diametro antero-posterior 600 micra » transverso 410 » Testiculo posterior: Diametro antero-posterior 630 micra transverso 410 » Exemplar de 7,5 mm.: Testiculo anterior: Diametro antero-posterior 680 micra » transverso 444 » Testiculo posterior: Diametro antero-posterior 790 micra » transverso 400 » De cada testiculo parte lateralmente um vazo efarente bem dezenvolvido e que se Não aprezentam sinal de ramificação | E A . | form their largest diameter is the antero-pos- | terior. 102 | | | | From the pharynx springs a short slender and thin walled esophagus. At about one tenth of the total body length the esophagus divides in two cecal tubes which at first pass outward toward the lateral margins, follow these margins and then surround the acetabu- lum. Partly covered by the vitellogene glands they terminate at the caudal extremity free from these glands. There is no sign of anas- tomosis or ramifacation. Genital system : Male organs: The testicles lie in the cau- dal half of the worm in the area included between the intestinal ceca, somewhat nearer | the ventral than the dorsal surface. Ovoid in One is directly caudad of the other; the two being separated one from the other by a narrow intervall occupied by connective tissue. The posterior testicle is somewhat larger than the anterior. In press preparations their outlines are perfectly regular, but sections show them to be so markedly indented as to amount to a very distinct lobation. The measurements of the testicles are the following : Specimen 6,5 mm long Anterior testicle 600 micra antero-posteriorly 410 » transversally Posterior testicle 630 » antero-posteriorly 410 » transversally Specimen 7,5 mm long Anterior testicle 680 micra antero-posteriorly 444 » transversally Posterior testicle 790 » antero-posteriorly 400 » transversally. A well developped vas efferens rises late- rally from each testicle. They are entirely full of spermatozoa. In spite of a large number of sections we could not follow the traject of these tubes. Near the genital pore lies a large biloba- ted vesicula seminalis externa completely full —— 103 ——— aprezenta literalmente cheio de espermatozoi- des. Não foi possivel seguir todo o trajeto destes tubos, apezar do grande numero de seções seriadas que praticámos. Proximo á abertura genital encontra-se larga vezicula seminal externa ou masculina bilobada que se juxtapõe á ventoza ventral, aprezentando-se completamente cheia de es- permatozoides e envolvida ainda em espessa | membrana que envolve todo o complexo dos | orgãos genitais externos. Esta vezicula seminal é muito bem dezenvolvida e tão grande que não hezitamos em consideral-a como cara- cteristica da especie em questão. A bolsa do cirro é bem dezenvolvida, muito espessa e contem o penis, que é cilin- dro-conico, curto e de superficie liza. Tanto a vezicula seminal como o penis são cercados de numerozas celulas glandulares fuziformes que não trepidamos em considerar como ele- mentos prostaticos. O dezenho que produzimos dá perfeita idéa da descrição destes orgãos. (Est. 5, fig. 2). Orgãos genitais femininos: O ovario fica situado para diante dos tes- ticulos, na linha mediana entre os 2 tubos intestinais e ocupa aproximadamente o meio do corpo. E” esferico, muito menor que os testiculos, tendo as seguintes dimensôes: Exemplar de 7 mm.: 200 micra de diametro » de 6mm.: 280 » » » Colocado logo para traz do ovario encon- tra-se o ootipo, bem dezenvolvido de contorno ovoide, ocupando quazi toda a largura do animal e sempre cheio de espermatozoides e ovos em varios estados de maturação. O ootipo recebe lateralmente os dois vite- lodutos e posteriormente o canal de Laurer que é muito fino, mostrando-se completamente cheio de espermatozoides. Como continuação do ootipo nace o utero que rodeia o ovario, prolongando-se para diante, descrevendo circumvoluções com- plicadas; depois, tornando-se mais simples contorna lateralmente a ventoza ventral, indo abrir-se no antro genital. As glandulas vitelojenas, são dispostas nos campos laterais e estendem-se desde a ventoza ventral até ás extremidades dos dois cécos | male organs. of spermatozoa. The vesicula seminalis lays next to the ventral sucker and is covered by a thick membrane which envelops the external The vesicula is so large that we do not hesitate in considering it characte- ristic of the specimen which we are descri- | bing. The well developped and quite thick cirr- hus pouch contains the cylindro conical smooth surfaced penis. Both the vesicula seminalis and the cirrhus pouch are surrounded by nu- merous glandular cells which we do not he- sitate to interpret as prostatic cells. (The dra- wing 2, plate 5 gives a perfect idea of the description of the male organs). Female organs: Cephalad of the testicles the interspace bet- ween the cecal tubes contains the ovary situa- ted in the median line more or less in the middle of the total body length. The ovary is a globular body much smaller than the tes- ticles and measures: Specimen 7 mm long 290 micra in diameter » 6 mm » 280 » » » Caudad of the ovary lies the well develop- ped, ovoid in form ootyp which occupies most the whole breadth of the worm. The ootyp contains always spermatozoa and ova in dif- ferent phases of maturation. The ootyp receives laterally the two vitel- loducts and posteriorly Laurier's canal extre- mely narrow and entirely filled with sperma- tozoa. From the ootyp appearing like a continua- tion there emerges the uterus which sur- rounds the ovary and then forms numerous coils; futher on, simpler, it surrounds laterally the ventral sucker and opens in the genital cavity. The vitellogene glands lie in the lateral areas, beginning at the level of the ventral sucker and extending to the extremity of the cecal tubes, not exceeding the latter. These vitellaria are composed of a large number of Rues intestinais, sem exceder estes ultimos. Estas glandulas são formadas de grande numero de foliculos de contorno poligonal e grupados irregularmente, formando uma faixa de cada | lado do corpo do animal. Ovos: Os ovos retirados do utero aprezentam-se com fórma oval e de côr amarello-parda que | lhes é dada pelo envoltorio, aliaz pouco espesso. O operculo é muito pequeno. O conteúdo é granulozo, sendo pouco nitidas as celulas que contem, que só são bem apreciadas nas costas. Estes ovos nunca contém embrião, apenas se observam as celulas destinadas a constituir o futuro miracidio. Os ovos retirados dos exemplares maiores medem na media: Diametro long. » transversal Aparelho excretor: Este aparelho em traços gerais é bem apre- ciavel no 5.º posterior do corpo e se compõe de um grosso trato mediano que se dicoto- miza 2 vezes em Y, fôrmando, depois, outras pequenas ramificações. O trato mediano fórma pequena empola, logo depois da 1.2 dicoto- mização, vindo abrir-se no exterior no pro- longamento terminal do corpo. Diagnoze especifica: Caraterizam suficientemente esta especie os seguintes dados anatomicos: 102 micra 50 » 1.0 A dispozição dos espinhos, na orla, em fi- leira unica regular, sendo alguns destes revirados para dentro, nas vizinhanças da chanfradura ventral. 2.0 O numero de espinhos, que varia de 32 á 36. 3.0 As dimensões das ventozas bucal e ven- tral, dos testiculos, ovario e ovos. 4.0 A dispoziçäo das glandulas vitelojenas, que se estendem desde a ventoza ventral até a terminaçäo do céco. 5.0 A dispozição dos orgãos genitais externos e, sobretudo, a enorme vezicula seminal bilobada cercada de glandulas prostaticas. O aparelho excretor, que forma na parte posterior do verme um duplo Y. 6.0 | testicles, ovary and ova. scattered irregularly, polygonal follicles, for- ming a band on each side of the worm. Ova: The uterine egg is oval in form owing to the membrane, in which it is inclosed and brownish yellow in colour. The egg is provided with a very small operculum and contains a granular mass; the cells are only easily distinguished in sections. | The eggs never contain embryos; one can only distingiush the cells which will form the future miracidium. The average measurements of the eggs of the largest specimens were: 102 micra in length and 50 micra in width. Excretory system: In the posterior fifth of the body the ex- cretory tract is single and median. The tract divides twice in two lateral branches, forming a double Y and further on in other smaller ramifications. After the first division the tract dilates into a cavity and opens on the external surface in the caudal extremity of the body. Specific diagnosis: Disposition of the spines on the head disc in one straight line, some of wich are inward turned near the ventral hollow. The number of spines varying from 32 to 36. The size of the oral and ventral sucker, The disposition of the vitellogene glands wich extend from the oral sucker till the terminal end of the ceca. The disposition of the external genital or- gans and principally the enormous bilobated vesicula seminalis surrounded by prostatic glands. The excretory system that forms in the caudal extremity of the worm a double Y. b c d f 8 h i a b ae A PI tis Ra WALDO | RUZ EM TV InsrifO% OSWALDO CRUZ Tomo ori 1909 a — farinje } — ezofago — póro genita — penis — ventoza.. — utero — vitelojenos | — ovario ÇA | — ootipo EL _ J — testiculos “EPA +; ‘Or — aparelho excretor = — cécos | — póro excretors — ventoza bucé | — farinje RS 7 4 L seminal. — vezicula seminal? | RR... m — celulas prostat — penis — póro genital — utero Ô — oral sucker — pharinx — esophagus — genital ae — vesicula seminalis — penis — acetabulum — uterus — vitellaria — avery — vesicula semin fis) — prostatic cells * — penis — genital pore — uterus — acetabulum rasa gu : SAC TIN t E es re NO Las te ESTAMPA 5 ESTAMPA 5 == ad. nat. del. @ ASMATea ae " E Un e Y AT 4 "e $ te : Te: A a suad oaiaw20. pe Da 2AIAOM3M | 208? - | OMOT — 2 ee ie a | ie intestinais, sem exceder estes ultimos. Estas glandúlas são formadas de grande numero de folículos de contorno poligonal e grupados irregularmente, formando uma faixa de cada lado do corpo do animal. Ovos: Os ovos retirados do utero aprezentam-se com fórma oval & HEAdSr amarello-parda que lhes é dada pelo envoltorio, aliaz pouco espesso. O operculo é muito pequend* Y é granulozo, sendo co nítidas as celulas que contem, que LS costas. Estes ovos nuncasommélmioemb#äo, apenas se observam as celultaïééldinadg a constituir o futuro miracidiewgsdqoes — 2 Os ovos retirados dossaeqnipiineg maibres medem na media: eilenimoz sludizov — 9 Diametro long. sitmicrat > transversal muludsióps — y Aparelho excretor: euistu — dl o bem apreciadas nas | only distingiush the cells wie ab thé | E; à oia sm | the largest specimens werdstingg Brain Este aparelho em traços geintdlgiver apre- | ciavel no 5.º posterior do corpaqisvo cemipõe de um grosso trato mediano aos: -diabto- miza 2 vezes em Y, fôrmandogalhitasks -sultras pequenas ramificaçõesmsiava ation cf dain a | ramifications. pequena empola, logo depodatdksosn -ito- | mização, vindo abrir-seto waters ne pro- longamento terminal do corpo. Diagnoze especStigiAl Caraterizam sifiggptemente esta especie os seguintes dados prontas 1.0 A dispozição dos espinkioe va na a em fi- leira unica regular, sendo it Er destes por at nas vizinhanças da hanfr qdura ven jan UR es ne AGA 36, 3.0 As dimeiisões | = poate bucal e ven- tral, dos testicukilgnimadoskiizge. — A 4.0 A dispozicáo das glaelladaiddtedogenas, Que se estendem desde a ventozinggntraldaté a terminação do céco910q Istinsg — A 5.0 A dispozição dos orgãos gesntaly extefhos e, sobretudo, a enorrnmuhadgieds seninal bilobada cercada de glandulas prostaticas. 6.º O aparelho excretor, que forma na parte posterior do verme um duplo Y. | the caudal extremity of the body. | in one straight line, some ina tasas ward -testilupisam gb alevinos lsmibutijgehatiO® of | gans and principally the enormous2iBHäbate® Qu i É Me E scattered irregularly, polygonal follicles, for ming a band on each side of the worm. | Ova: P Pe The uterine egg is oval in ME “ne | the membrane, in which it is inclosed and brownish yellow in colour. 8 E The egg is vB AIMATEA a very - US Seront ad contains a granular mass; the : celis are only easily distinguished in sections. ; The eggs never corltaigilembryos; one can future miracidium. ojninst — do ee 3 The average measurements oPgatospgs-of length and 50 micra in lts sluoisov — à a einoq — 1 ' Excretory system: Isinov sxoinsy — y In the posterior fifth of the bodyrole ex cretory tract is single and medémejolSlie trad “A i divides twice in two lateral branchessierming = a double Y and further on in oth@@mattell E eolwoites+ — |. 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O Leucophrys patula possue 2 formas: uma grande, de movimentos muito ativos, que cam- baleando e girando multiplas vezes em torno de seu eixo nada no infuzo em que vive; já MAUPAS estabeleceu com justeza suas carate- risticas morfolojicas. A fig. 1 mostra sua es- trutura: o citostoma é grande e provido de 2 membranulas em fórma de labios. Abaixo do citofarinje nota-se um grande alveolo alon- gado. Esta grande fórma de infuzorio de ra- pina engole em quantidades consideraveis pe- quenos infuzorios e, em pouco tempo, seu endoplasma se enche de vacuolos nutritivos, fortemente refrinjentes. Os infuzorios deglu- tidos que se movem ainda durante certo tempo no interior dos vacuolos tornam-se, no fim de 10’, um tanto refrinjentes e co- ram-se em avermelhado pelo Neutralrot; em mais ou menos 20’, paralizam-se e tomam en- tão a conhecida côr vermelha do Neutralrot que traduz a reação acida. Mais tarde, mercê da reação alcalina dos fermentos dijestivos, essa coloração muda para vermelho amare- lado. Os restos alimentares não dijeridos são eliminados para o exterior atravez um MAUPAS hat zuerst bei dem ciliaten Infu- sorium Leucophrys patula Ehrb. einen Formdi- morphismus entdeckt und brachte ihn mit den sexuellen Erscheinungen dieses interessanten Infusors in Zusammenhang. Leucophrys pa- tula besitzt 2 Formen: eine grosse, lebhaft bewegliche Form, die schwankend, vielfach um ihre Achse rotierend, in der Infusion da- hinschwimmt; ihre morphologische Eigentiim- lichkeiten sind bereits von MAUPAS zutreffend geschildert worden. Ihr Aufbau geht aus Fi- gur 1 hervor; das Cytostom ist gross und mit zwei lippenfôrmigen Membranellen ausgestat- tet. Unter dem Cytopharynx nimmt man meist eine grosse, lângliche Aveole wahr. Diese grosse, räuberische Form verschlingt in be- trâchtlicher Menge kleine Infusorien und ihr Endoplasma ist bald erfiillt von stark lichtbre- chenden Nahrungsvakuolen. Die aufgenom- menen Infusorien bewegen sich noch eine zeit- lang in der Nahrungsvakuole, werden jedoch nach etwa 10 Minuten etwas lichtbrechend und färben sich mit Neutralrot in einer rótli- chen Nüance; nach ungefähr 20 Minuten sind sie zumeist gelahmt und nehmen den bekann- ten, sauern roten Farbton des Neutralrots an. Spater schlägt diese Nüance unter Einfluss der alkalisch reagierenden Verdauungsfermente in ein Gelbrot um. Die unverdauten Nahrungs- — 106 ——— citopijio de formaçäo temporaria. Essa excre- ção se faz sob a forma de bolos, cuja côr primitiva se acha empalidecida, manifestan- do-se esta agora com uma tonalidade verme- lha lilaz. Na temperatura de cerca de 280 C. o vacuolo contratil pulsa por 10 a 14 segundos. Ao lado dum grande macronucleo rico em cromatina e que ás vezes possue um cario- zoma, (Est. 6 Fig. 2, 3) vê-se um micronu- cleo menor, compacto e que, segundo o modo comum, se divide mitozicamente (Est. 6 Fig. 2) como os pequenos nucleos dos infuzorios. O caryozoma do grande nucleo, que falta muitas vezes completamente, sofre processos cíclicos e, 6ra aprezenta-se perfeitamente for- mado, óra dezaparece por completo. (Est. 6 Fig. 2 e 3; 1) Em determinado estadio da di- vizio celular, aprezenta contornos perfeita- mente nitidos, tornando-se indistinto logo que o nucleo se estira lonjitudinalmente. O grande nucleo multiplica-se por divizão direta; por ocazião de seu estrangulamento, uma parte de cromatina, que claramente, em parte, per- tence ao cariozoma, reune-se no meio do nu- cleo em ampulheta, sob a fórma de um bo- tão e, por ocazião dos subsequentes estadios da divizão elimina-se (Est. 6 Fig. 7 a 10.) Essa massa de cromatina, que permanece ape- nas em uma das porções divididas (Est. 6 Fig. 10, 11, 12) reune-se em bola, dejenera e é finalmente eliminada. Deste modo se veri- fica que, independentemente do estrangulamento | do corpo celular, se dá em cada vez uma di- minuição da cromatina, por ocazião da divi- zão celular. riozoma das celulas dos protozoarios corres- ponde a um segundo nucleo. De acôrdo com essa concepção, as celulas dos ciliados. que possuem dous nucleos morfolojicamente dife- renciados: o macro e o micronucleo, tor- nam-se, em determinados estadios, quadri- nucleados, desde que nesses dous nucleos apareçam cariozomas. O centrozomio dos me- tazoarios corresponde filojeneticamente ao ca- riozoma dos protozoarios e, sendo assim, de- ve-se fazer corresponder o Spindelrestkoerper de Flemming ou o corpo intermediario do fuzo central ao Diminutionskoerper do cario- Em uma serie de trabalhos an- | teriores foi estabelecido o fato de que o ca- | reste werden am Hinterende des Infusors durch eine temporär entstehende Cytopyge in Ballenform nach aussen abgestossen und blas- sen über ein eigenartiges Lilarot alsbald ab. Die kontraktile Vakuole pulsiert bei einer Tem- peratur von ca. 280 C. in 10 bis 14 Sekunden. Neben dem grossen chromatinreichen Ma- cronucleus, der zuweilen ein Caryosom besitzt (Taf. 6, Fig. 2, 3), liegt ein kleiner, kompakter Micronucleus, der sich nach Art der Kleinkerne der Infusorien in der üblichen Weise mito- tisch teilt (Taf. 6, Fig. 2). Das Caryosom des Grosskerns, das oft gânzlich fehlt, unterliegt zyklischen Prozessen und ist bald deutlich ausgebildet, bald verschwindet es vollkommen (Taf. 6, Fig. 2 u. 3). Auf einem gewissen Sta- dium vor der Zellteilung ist es ziemlich scharf abgegrenzt und wird erst undeutlich, sobald sich der Kern der Lânge nach streckt. Der Grosskern teilt sich auf direkte Weise; bei der Durchschniirung desselben wird ein Teil des Chromatins, das offenbar teilweise dem Caryosom angehort, in der Mitte des hantel- formigen Kerns, in der Form eines Knotens zusammengeballt und bei der weiteren Tei- lung aus dem Kern eliminiert (Taf. 6, Fig. 7 bis 10). Bald klumpt diese Chromatinmenge, die nur in dem einen Teilspróssling liegen bleibt (Taf. 6, Fig. 10 u. 11), zu einem Bal- lenkôrper zusammen, degeneriert und wird schliesslich ausgestossen. Es findet derart un- abhängig von der Zellleibdurchschnürung eine Jedesmalige Diminution des Chromatins bei der | Zellteilung statt. In einer Reihe von friiheren Arbeiten wurde der Nachweis erbracht, dass das Caryosom der Protozoenzelle einem zwei- ten Kern entspricht. Auf Grund dieser Be- trachtungen wäre die Ciliatenzelle, die 2 mor- | phologisch differenzierte Kerne als Macro- und Micronucleus besitzt, auf gewissen Stadien vierkernig, sobald in diesen beiden Kernen Caryosome auftreten. Phylogenetisch ent- spricht dem Centrosom der Metazoenzelle das Caryosom der Protozoenzelle und daher muss man den Spindelrestkôrper FLEMMING’S oder den Zwischenkôrper der Centralspindel mit dem eben beschriebenen Diminutionskôrper des Caryosoms der ciliaten Zelle vergleichen. Bei Leucophrys fallt die Diminution des Kern- zoma das celulas dos ciliados, acima descri- tos. No Leucophrys a diminuição da croma- tina nuclear não coincide, em tempo, com o estrangulamento plasmatico, como é o cazo nas celulas dos metazoarios e metafitos. Pó- de-se comparar morfolojicamente os corpos intermediarios dos esparmatocitos da Helix diretamente com as porções de diminuição do cariozoma do Leucophrys. A outra forma do Leucophrys dimorfo (Est. 6 Fig. 4, 5, 6, 13 e 14) é essencialmente me- nor, a boca é semelhante 4 do Glaucoma py- riformis como tambem esta forma póde ser facilmente confundida com o Glaucoma. Con- trariamente á outra fórma descrita do Leuco- phrys, que devora pequenos protozoarios, ali- menta-se esta de materiais nutritivos que vêm em remoinhos impelidos pelos cilios e que são constituidos, sobretudo, de bacterios. FE’ digno de nota que nesta pequena fórma se- melhante ao Glaucoma falta muitas vezes o micronucleo, que parece ter imigrado para o interior do macronucleo. (Est. 6 Fig. 5 e 13). Que significação tem esse diformismo? MAUPAS considera a fórma pequena, em que muitas vezes falta o citostoma, como o animal sexuado. Na maioria dos cazos consegui pela adição de quinina a 1:80000 obter culturas das fórmas grandes de Leucophrys provenien- tes das pequenas e que se aprezentavam nas culturas, no fim de 3 dias, que se multiplica- vam no fim de 4 e que, mais tarde de novo davam orijem a fórmas pequenas. Nunca ve- rifiquei a existencia de conjugação e por isso, contrariamente a MAUPAS não considero como baze do dimorfismo dos infuzorios a sexuali- dade; aceito, de preferencia, a concepção ine- dita de SCHAUDINN, assim como os rezulta- dos experimentais de ENRIQUES sobre o Chi- lodon, de que os protozoarios já se acham diferencialmente sexuados, mas que apenas a sexualidade nem sempre se estampa no sen- tido morfolojico como nos hemosporidios e em varios coccidios (Cyclospora). Teorica- mente estou inclinado a aceitar que nos pro- tozoarios se observa uma geração alternante de especie primaria, que tambem se pdde se- parar em 2 modalidades diversas de proces- sos sexuais. Nos Testacios, segundo SWAR- 107 chromatins zeitlich nicht mit der Plasmadurch- schniirung zusammen, was bei den Metazoen- und Metaphytenzellen stets der Fall ist. Die Zwischenkórper der Spermatocyten von Helix kann man morphologisch direkt mit den Di- minutionsteilen des Caryosoms von Leuco- phrys vergleichen. Die andere Form der dimorphen Leuco- phrys (Taf. 6, Fig. 4, 5, 6, 13 u. 14) ist we- sentlich kleiner, ihr Mund ist dem von Glau- coma pyriformis ahnlich, wie überhaupt diese Form leicht mit Glaucoma verwechselt wer- den kann. Im Gegensatz zu den zuerst ge- schilderten Leucophrysstadium, das kleinere Protozoen verschlingt, ernährt sie sich durch Zustrudeln von Nahrung, die vorwiegend bak- terieller Natur ist. Bemerkenswert ist, dass bei dieser kleinen glaucomaähnlichen Form der Micronucleus vielfach fehlt; er scheint in das Innere des Macronucleus einzudringen (Taf. 6, Fig. 5, 13): Welche Bedeutung besitzt nun dieser Di- morphismus ? MAUPAS fasste die kleineren Formen, deren Cytostoma 6fters verschwin- det, als Sexualtiere auf. Mir gelang es in der Mehrzahl der Fálle, durch Zusatz von Chinin 1:80.000 aus den kleinen Formen die gros- sen Leucophrys zu züchten, die in.den Kultu- ren zumeist am 3. Tage auftauchten, sich am 4. Tage vermehrten und spáter wieder in die kleineren Formen umbildeten. Nie wurde von mir eine Conjugation beobachtet und ich sehe daher im Gegensatz zu MAUPAS die Sexuali- tat nicht als Grund für den Dimorphismus der Infusorien an, nehme vielmehr im Anschluss an nicht veróffentlichte Ideen von SCHAUDINN sowie an die Ergebnisse der Experimental- untersuchungen von ENRIQUES an Chilodon an, dass die Protozoen sfefs sexuell differen- ziert sind, nur dass die Sexualitát nicht im- mer derart im morphologischen Sinne ausge- prágt ist wie bei den Hámosporidien und manchen Coccidien (Cyclospora). Theoretisch bin ich geneigt anzuuehmen, dass bei den Protozoen überhaupt ein Generationswechsel primärer Art vorkommt, der sogar mit zwei Modi von sexuellen Vorgängen abschliessen kann. Bei den Testaceen tritt nach SWARC- ZEWSKY und ZÜLZER eine Chromidiogamie —— 108 —— CZEWSKI e ZUELZER ocorre a cromidiogamia ao lado da heterogamia. Conhece-se tambem no ciclo evolutivo de Trichomonas e do Bodo lacertae a heterogamia, ao lado do processo autogamico muito mais conhecido. (*) De outro lado, conhecemos em alguns protozoa- rios duplicidade de fórmas de multiplicação vejetativa: no plasmodio da malaria humana e da do macaco foi observada, ao lado de multipla esquizogonia, tambem, a simples multiplicação dos merontes (pedogomia). O mesmo parece se dar nos coccidios. Nos in- fuzorios as entidades morfolojicamente eguais de Glaucoma e Colpidium etc. separam-se fi- ziolojicamente em duas series, das quais uma é muito mais rezistente que a outra ás substan- cias ou alcaloides que ajem por osmoze Em favor de uma alternancia de geração tambem caraterizavel morfolojicamente falam ainda as observações de von LEBEDEW sobre a primi- tiva Trachelocerca ou de JOSEPH sobre o Lo- xodes. (*) Sem duvida, deve-se notar que nestes dois cazos não se verifica a dupla fecundação, porque, segundo HARTMANN, em um cazo (Cromidiogamia dos testacios) deve-se tratar, apenas, de plastogamia e, no outro (au- togamia do Bodo) de modificação da heterogamia habi- tual, isto é, partenogamia (Hartmann, Autogamie bei Protisten, Jena, 1909). neben einer Heterogamie auf; aus dem Ent- wicklungszyklus von Trichomonas und Bodo lacertae ist sowohl eine Heterogamie, als die viel häufigere Autogamie bekannt. (*) Ande- rerseits kennen wir von einigen Protozoen wiederum zwei Arten von vegetativer Vermeh- rung; bei den Malariaplasmodien des Men- schen und der Affen ist neben einer multiplen Schizogonie auch eine einfache Vermehrung der Meronten (Paedogonie) beobachtet wor- den. Auch bei den Coccidien scheinen ähn- liche Verhãltnisse vorzuliegen. Bei den Infu- sorien spalten sich die morphologisch gleich- artigen Formen von Glaucoma, Colpidium u. a. physiologisch insofern in zwei Reihen, als die einen Formen osmotisch wirksamen Substan- zen oder Alkaloiden gegeniiber viel resistenter sind. Fiir einen sogar morphologisch nach- weisbaren Generationswechsel sprechen aber die Beobachtungen von LEBEDEW an der pri- mitiven Trachelocerca oder von JOSEPH an Lo- xodes. (*) Allerdings muss bemerkt werden, dass in diesen beiden Fällen die doppelte Befruchtung nicht bewiesen ist, da es sich nach HARTMANN in dem einen Fall (Chromidiogamie der Testaceen) nur um eine Plastoga- mie, im andern (Autogamie von Bodo) um elne Modifi- kation der gewóhnlichen Heterogamie, nâmlich eine Par- thenogamie, handeln soll (Hartmann, Autogamie bei Pro- tisten, Jena 1909). ¿tt Li, e q y MEMORIAS DO INSTITUTO OswaLoo Cruz À y —— MEMORIAS 86 INSTITUTO OSWALDO Cruz ESTAMPA 6 A ESTAMPA 6 AM à + pis 5 : ENS e, Sy RE ht A ESTAMPA 6 y | grande de Leucophrys p -2. von Leucophrys pa- p a vêm-se o micronucleo tala; i ficronucleus in Teilung y À | ú rm; erste Fig, 4-6. Kleine ig. 5 ohne M cl ig. 7-12. Teilung der g | d Fig. 13-14. Teilung der kleinen Form. nest" y À | E L as > D. (©, - CZEWSKI e ZUELZER ocorre a cromidiogamia “ao lado da heterogamia. Conhece-se tambem no ciclo evolutivo de Trichomonas e do Bodo lacertae a heterogamia, ao lado do processo autogamico muito mais conhecido. (*) De outro lado, conhecemos em alguns protozoa- rios duplicidade de fórmas de multiplicação vejetativa: no plasmodio da malaria humana “e da do macaco foi observada, ao lado de multipla esquizogonia, tambem, a simpies multiplicação dos merontes (pedogomia). O mesmo parece se dar nos coccídios. Nos in- fuzoyios as entidades morfolojicamente eguais de Glaucoma e Colpidium etc. separam-se fi- tiolojicamente em duas series, das quais uma é muito mais rezistente que a outra ás substan- cias ou alcaloides que ajem por osmoze Em favor de uma alternancia de geração tambem caraterizavel mv der falam ainda as observações de von LEBEDEW sobre a primi- -naiaçiresis mov anda Sa gon sup gif o gr. ni euslounowiM £ -9f1 mi nm pe RE diem pet q bau sages vere a cundação, DM a LA TN ñ v » HARTMA 180, o stacios) oe te bi. a ‘tent oo ru Protintem dps Jay q 19b enwlisT SI-T gi «mo momisbl 19b gnulisT bI-EI .gi E. pos | den. tisten, jens. sbmgroe emo sb onsen . de $ ee bers neben einer Heterogamie auf; aus dem wicklungszyklus von Trichomonas und. lacertae ist sowohl eine Heterogamis, viel. haufigere Autogamie bekannt. An v7 rerseits kennen wir von. einigen rotozoer a wiederum zwei Arten von vegetativer Veni elo: rung; bei den Malariaplasmodien der schen und der Affen ist neben einer multip Schizogonie auch eine einfache V der Meronten (Paedogonie) beobachtet v Auch bei den Coccidien scheinen Al liche Verhältnisse vorzuliegen. Bei den In | sorien spalten sich die morphologiseh gleich: » artigen Formen von Glaucoma, Colpidium q. a Es physiologisch insofern in zwei Reihen, lr di einen Formen osmotisch wirksamen Substa zen oder Alkaloiden gegenüber viel resiste sind. Fiir einen sogar morphologisch ni weisbaren Genera SAT | sprechen aber die Beobachtungen von DEW an der pri- royo osás AS Hs ré OR APH ar “ms oslounowim o se-máv © .git Bu .smosoiso mos osbunowsm > 9 e stg ‘SATO BB, vont moo ist, da Se 3810801 AE bet RARES amie, der > MURS een) nur um ua fils tdo ein kation der RE A thenogamie, handeln s "TR -Snsupsq srmèt sb ofsiviQ | Be er MEMORIAS DO INSTITUTO OSWALDO CRUZ MOMO OO9 ESTAMPA 6 Da pesquiza de antijeno e de anticorpo pela fixação de complemento pelo Dr. Arthur Moses. Veber den Nachweis von Antigen und Antikórner durch Komplementablenkung von Dr. Arthur Moses. es — O diagnostico precizo e rapido das mo- lestias infetuosas de grande alcance para fins profilaticos e terapeuticos, outrora, dependente da verificação microscopica do germen, con- segue-se hoje, pesquizando os anticorpos es- pecificos elaborados pelos microorganismos, ajentes da infeção. A aglutinação constitue, apoz os trabalhos de GRUBER e WIDAL prova robusta de diagnos- tico, principalmente, nas infeções cauzadas pe- los germens do grupo coli-tifo; a pesquiza de bacteriolizinas no soro dos doentes entrou para a pratica clinica com os estudos de STERN e para o diagnostico da infeção stafilococica aconselham, de longa data, BRUCK, MICHAELIS e SCHULTZE a verificação no sangue da stafilo- antilizina. Tornou-se mais lata a aplicação pratica da pesquiza de anticorpos, apoz os estudos de BORDET e GENGOU que revelaram na mór parte dos soros microbianos a prezença de produ- tos de reação especifica. Não nos deteremos no estudo da natureza desses anticorpos. Na Alemanha NEUFELD que com especial cuidado estudou o assunto opina pela existencia de novo anticorpo diferente dos já descritos, creando para elle a denomi- nação de anticorpo de BORDET. Em recente revista historica e critica sobre fixação de Eine sichere und schnelle Diagnose der Infektionskrankheiten ist für prophylaktische und therapeutische Zwecke von grosser Be- deutung; während dieselbe früher vom mi- kroskopischen Nachweise des Erregers ab- hing, erreicht man sie heute durch den Nach- weis der spezifischen Antikórper, welche durch die Infektionsträger hervorgerufen werden. Seit den Arbeiten von GRUBER und WIDAL bildet die Agglutination einen wichtigen Be- weis fiir die Diagnose, besonders bei Infek- tionen, welche durch Bakterien der Coli-Ty- phusgruppe verursacht werden; der Nachweis von Bakteriolysinen im Blutserum der Kran- ken wurde durch die Studien von Stern in die klinische Praxis eingeführt und BRUCK, MICHAELIS und SCHULTZE empfahlen schon vor langer Zeit fiir die Diagnose der Staphy- locokkeninfektion das Aufsuchen des Staphy- loantilysins im Blute; die praktische Anwen- dung des Antikórpernachweises wurde jedoch erst durch die Studien von BORDET und GEN- GOU verallgemeinert, da dieselben in dem grôssten Teil der Mikrobiensera die Gegen- wart von spezifischen Reaktionsprodukten er- wiesen. Ich will mich hier nicht mit dem Stu- dium der Natur dieser Antikôrper aufhalten. In Deutschland ist NEUFELD, welcher den Gegenstand besonders sorgfältig studirte, der Ansicht, dass ein neuer Antikórper existirt, —— 110 complemento é essa opiniao contestada por BORDET que persiste em responsabilizar pelo fenomeno a que ligou o nome umanti corpo da natureza de amboceptor. Essa determinaçäo indireta do ajente da entidade morbida só é aplicavel nos cazos em | que o organismo se acha durante algum tempo sob a ação do germen de modo a poder ela- borar anticorpos, o que equivale a dizer que é limitada sua aplicação. Necessario seria possuir um metodo biolo- jico, não da demonstração de anticorpos, mas da pesquiza direta do microorganismo. Para substituir os morosos processos de verifica- ção microscopica e estudo das propriedades culturais dos germens izolados dos humores organicos deram-nos WASSERMANN e BRUCK um metodo biolojico bastante sensivel, que con- siste na pesquiza direta do ajente da infeção, ou melhor, de particulas de destruição do mesmo. E” esse metodo aplicavel nos pri- meiros dias de infeção, quando ainda não é possivel a pesquiza de anticorpos. Conhecido um dos elementos facil se torna ajuizar da prezença do outro tomando para indice a fixação de complemento. Com a modificação introduzida por WAS- SERMANN e BRUCK na primitiva tecnica de BOR- DET tornou-se a reação, hoje, geralmente de- nominada de BORDET e GENGOU um preciozo auxiliar de diagnostico. Consiste a modifi- cação no emprego de extratos bacterianos em logar das emulsões aconselhadas por Bordet. Com o fim de nos certificarmos do valor que tem a reação para o diagnostico de mo- lestias infetuosas realizámos uma serie de pes- quizas de antijeno e anticorpo, quer em cazos clinicos quer em infeções animaes esponta- neas e experimentaes. Antes de abordarmos a aplicação pratica | daremos de modo sucinto o metodo de tra- balho. O complemento era fornecido por soro normal de 24 horas, conservado durante esse | tempo no aparelho Frigo de Morgenroth, si bem que, tivessemos verificado no correr dos trabalhos? que no Frigo se mantem inaltera- vel o soro durante 48 horas. Precedia qual- welcher von den schon beschriebenen ver- schieden ist und fiir den er die Bezeichnung «Antikôrper von Bordet» aufgestellt hat. Diese Auffassung wird von BORDET in einer neuen, historischen und kritischen Bearbeitung der Komplementablenkung zuriickgewiesen, in- dem er fortfährt, die nach ihm benannte Er- scheinung auf einen Antikôrper von Ambo- ceptornatur zurückzuführen. Diese indirekte Bestimmung des Krankheits- erregers lässt sich nur in den Fällen anwen- den, in welchen der Organismus einige Zeit unter dem Einfluss desselben gestanden hat, so dass er Antikórper bilden konnte, d. h., sie findet nur eine beschrânkte Anwendung. Es wäre am Platze, eine neue biologische Metho- de zu finden, welche nicht zum Nachweise der Antikôrper, sondern zur direkten Bestimmung des Erregers dient. Als Ersatz der zeitrauben- den Prozesse, welche dem mikroskopischen Nachweise und dem Studium der Kultureigen- schaften der aus den Kôrpersäften isolirten Keime dienen, haben WASSERMANN und BRUCK eine ziemlich empfindliche biologische Metho- de angegeben; dieselbe besteht in direktem Nachweis des Krankheitserregers oder richti- ger der Zerstórungsprodukte derselben. Diese Methode lässt sich bereits in den ersten Krank- heitstagen anwenden, wenn der Nachweis des Antikôrpers noch nicht môglich ist. Wenn das eine Element bekannt ist, so lässt sich die Gegenwart des anderen leicht beurteilen, indem man die Komplementablen- kung zum Nachweise benützt. In der von WASSERMANN und BRUCK eingeführten Mo- dification der ursprünglichen BORDET'schen Technik bildet heute die, gewóhnlich nach BORDET und GENGOU benannte, Reaktion, ein wertvolles Hilfsmittel für die Diagnose. Die Modification besteht in der Anwendung von Bacterienextrakten an Stelle der von BORDET empfohlenen Emulsionen. Um mich von der Bedeutung zu überzeu- gen, welche die Reaktion fiir die Diagnose der Infektionskrankheiten besitzt, führte ich eine Reihe von Antigen- und Antikôrper-Un- tersuchungen aus und zwar sowohl in klini- schen Krankheitsfallen, als auch bei sponta- nen und experimentellen Tierinfektionen. quer ensaio a dozajem do soro hemolitico e do complemento e a verificação da quanti- dade de antijeno ou de humor organico em | que existia anticorpo que exercia sobre o sis- | tema hemolitico ação impediente de modo a não exceder nas experiencias a metade dessa quantidade. Do preparo do antijeno diremos mais por miudo a propozito de cada infeção estudada; podemos aqui adiantar que do emprego com- parativo das emulsões e dos extratos bacte- rianos concluimos que não era necessario em- pregar elevadas quantias de emulsão nos ca- zos em que fôra suficiente um minimo de extrato; a vantajem da tecnica de WASSER- MANN e BRUCK consiste na possibilidade de obter rezultados quantitativos pelo emprego de antijeno de valor quazi constante. Terminados os ensaios previos, é possi- vel investir os dois problemas que se ofere- cem na fixação de complemento: pesquiza de antijeno e de anticorpo. Eram os ensaios realizados em tubos de 5 cm. de altura e 1 de diametro colocados em suporte lastrado dentro de um termostato do tipo OSTWALD, em que um termoregulador de mercurio mantem constante a temperatura de 379, ria dos pesquizadores realizamos cada ensaio em 3 horas (1° hora de absorção e 2 de he- molize). Convencionamos traduzir pelos si- nais —, +, ++, +++ o rezultado das | experiencias; — indica auzencia de hemolize; | + denota sombra de hemolize; -++ + indica hemolize incompleta e + + hemolize total. | Rezumem-se em 9 cazos de infeção tifica, | E ; j | | mostaten gebracht, in welchem ein Quecksil- ' berregulator eine konstante Temperatur von | 37° erhielt. 38 de peste e 3 de dizenteria bacilar os ca- zos clinicos em que aplicamos a reaçäo de BORDET. Dos 9 cazos de infeçäo tifica foi quatro vezes o diagnostico confirmado pela cultura do bacilo, em um cazo izolado das fezes, em outro do sangue, em um terceiro do sangue e da urina e finalmente em um quarto do | baço em autopsia. Em duas das quatro observações citadas | . . . . | concorreu ainda para firmar o diagnostico a 111 Bevor ich auf die praktische Anwendung eingehe, beschreibe ich kurz die angewandte Methode: Das Komplement wurde von 24 Stunden altem Normalserum geliefert; dasselbe wurde, während der angegebenen Zeit, im Apparat «Frigo» von MORGENROTH aufbewahrt; übri- | gens habe ich im Laufe der Arbeit festge- stellt, dass das Serum sich im «Frigo»-Appa- rate auch während 48 Stunden unverändert erhalt. Vor jedem Versuche wurde hämolyti- sches Serum und Komplement dosirt und die Menge von Antigen oder antikôrperhaltiger Organfliissigkeit festgestellt, welche auf das hâmolytische System keine hindernde Wirkung ausübte, wobei jedoch im Versuche die Hälfte dieser Menge nicht überschritten wurde. Auf die Herstellung des Antigens werde ich bei den einzelnen untersuchten Infektio- nen näher eingehen; ich schicke nur voraus, dass die vergleichsweise Anwendung der Emul- sionen und Bakterienextrakte mich iiberzeugte, | dass man keine grossen Emulsionsmengen | anzuwenden braucht, wo ein Minimum von Consoante a tecnica seguida pela maio- Extrakt geniigt; der Wert der WASSERMANN und BRUCK’schen Technik besteht vielmehr in der Moglichkeit, quantitative Resultate durch Anwendung eines Antigens von nahezu kon- stantem Werte zu erhalten. Nach Abschluss | der Vorversuche kann man die zwei Probleme angehen, welche sich bei der Komplement- ablenkung darbieten, nahmlich das Aufsuchen des Antigens und dasjenige des Antikôrpers. Die Versuche wurden in Glasróhrchen von 1 cm. Durchmesser und 5 cm. Hohe ausge- führt; dieselben wurden in einem zweckmäs- sigen Ständer in einen OSTWALD'schen Ther- Bei der in der Mehrzahl der Falle angewandten Technik nahm jeder Ver- such drei Stunden in Anspruch (eine fiir die Absorption und zwei fiir die Hamolyse). Die Resultate der Versuche werden durch die kon- ventionellen Zeichen: —, +, ++, +++ ausgedriickt; — bedeutet Fehlen der Hamo- lyse; + eine Spur derselben, + + unvoll- stândige, + -| + totale Hamolyse. Die klinischen Fálle, bei denen ich die —— 112 — reação de WIDAL. Nos cinco observandos res- tantes confirmámos pelo rezultado pozitivo da aglutinação o diagnostico clinico. Seis vezes verificamos a prezença de anti- corpo e duas a de antijeno. Se por um lado verificámos antijeno em doente em que foi negativa a hemocultura, em dous outros em que foi pozitiva essa prova não revelou o en- saio a prezença do ajente da infeção. Sobreleva entre as observações a primeira, que mais tempo ocupará nossa atenção. A presença do anticorpo de BORDET verificada no soro na auzencia de aglutininas, embora, seja fato digno de rejistro não constitue o lado mais interessante dessa observação. HIRSCHFELD e NEUFELD em estudos an- teriores tinham já assinalado a precocidade de formação do anticorpo de BORDET. Não foi ainda o que nos chamou a aten- ção para esse cazo a prezença de antijeno no sangue cuja cultura rezultou esteril. A sen- sibilidade da reação constitue explicação su- ficiente d'este fato. Acreditamos sumamente interessante essa observação pela prezença simultanea de anti- jeno e anticorpo verificada no soro de um mesmo doente e do qual não conhecemos em literatura outro exemplo. A explicação, que pudemos encontrar para | esse fato é a não corespondencia dos anti- jenos e anticorpos pesquizados. Outra expli- cação seria o estabelecimento de equilibrio quimico no qual além da combinação antijeno + anticorpo restaria livre uma certa quanti- dade desses elementos que teriam entrado em combinação por ocazião de nova adição de antijeno ou anticorpo, permitindo assim | nova prisão de complemento. A essa observação referem-se os quadros 1562. I | | | | | | | BORDET'sche Reaktion anwandte, bestehen aus 9 Typhus-, 38 Pest- und 3 Dysenterie-Fällen (letztere von bacillärer Form). Von den 9 Ty- phusinfektionen wurde bei vieren die Diagnose _ durch Kultur des Bacillus erwiesen, welcher = == = Se A einmal aus Fãces, ein anderes Mal aus dem Blute, ein drittes Mal aus Blut und Urin und endlich ein viertes Mal bei der Autopsie aus der Milz isolirt wurde. In 2 dieser 4 Fälle trug auch die WIDAL’sche Reaktion zur Bestatigung der Diagnose bei. In den übrigen 5 Beobach- tungen wurde die klinische Diagnose durch positives Ausfallen der Agglutination bestätigt. Sechsmal konstatirte ich das Vorkommen des Antikôrpers und zweimal die Gegenwart von Antigen. Während ich bei einem Kranken, bei welchem die Hämokultur negativ blieb, Antigen nachwies, war diese in zwei anderen Fallen positiv, obwohl die Untersuchung die Gegenwart des Krankheitserregers nicht an- zeigte; von diesen Beobachtungen fällt die erste besonders auf und soll unsere Aufmerksamkeit etwas länger beschaftigen. Der Nachweis des Vorkommens des Antikôrpers von BORDET im Serum bei fehlendem Agglutinin ist zwar er- wahnenswert, bildet jedoch nicht die interes- | santeste Seite der Beobachtung. HIRSCHFELD und NEUFELD hatten schon bei früheren Un- tersuchungen die friihzeitige Bildung des Anti- kórpers von BORDET angegeben. Auch die Gegenwart des Antigens im Blute, dessen Kul- | tur steril blieb, fiel mir nicht besonders auf, da die Empfindlichkeit der Reaktion dies geniigend | erklart. Was ich dagegen bei dieser Beobach- tung für besonders interessant halte, ist das gleichzeitige Vorkommen von Antigen und An- tikôrper bei der Untersuchnng des Blutes von einem und demselben Patienten, wovon ich in der Litteratur kein anderes Beispiel kenne. Die Erklarung dieser Tatsache kann man da- rin suchen, dass die gefundenen Antigene und Antikôrper sich nicht entsprechen. Eine andere Erklärung ware die Herstellung eines chemi- schen Gleichgewichtes, bei welchem neben der Verbindung Antigen + Antikôrper eine ge- wisse Menge dieser Elemente frei bliebe, wel- che sich bei einem neuen Zusatze von Antigen oder Antikôrper verbinden und so eine neue Komplementbindung ermóglichen kónnen. — 113 ——— ja earths HH OHHHUE 010$ ap 0)2.19x3 v yo) E mms | DEAD I pensant | DDT | DES o E AI OU . = E Spa retas 5 Ur diana o RA RASA À À RR RRR ALR RA À wsyoTedioayniq 9 Aa À A A A A À RA A RRA = -¡9unuey % Ss = Hu os | — 2 o o | o S uInJas}n[qjaut gee ae ND ria MÁ DRE iw Ba sr pos 11.195)]q]9u1 pelo À A . 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MERO RAD ATA RR A A AMA A A Am RETRATA og e OATIUIBS a a A & Raton A OK ap sonqo|D = ap sojnqgo(o Ea is | 4 PARU | o SR RRR AR RARA A À À À RIOR À À A RARA À R AURA A > tiques ap o1og | © 5 *1qY) BP 010$ | a BIQLI ap Olog o CA om | E TIQLI Ip 010$ = a E E 5 | q :ouamajduoy | SO ~ - : 5 : oras jduroo | © o - - © — =i] 2 opraneur 10 Elo opraneur 10 ™ : . es ap | ‘oueuny [11111838238 | laio als] “wm | || ||| |-83358 | ial | 3 [euou 0106 ASAS o a [BULIOU 0109 See > es ; N aq 10 Le & opeaneut «a a8 ps opeaneut A | © . . | | © . . 8 | E [suopapows| 322223 [El sk TE Sta a pe [E] S | É |'oquoopopoxos 2322828 Lila 44 el RE = —— + - — Q _— S = & Mee ake | BERR eee Sha oe | à ao CHR OP | 1, , à à à à a «DEl = S | | | =) © Em 3 doentes do Hospicio Nacional de Alienados, cujo diagnostico clinico foi em um cazo confirmado pela cultura de fezes, que nos forneceram um bacilo dizenterico do tipo Shiga-Kruse e em dous outros pela aglutina- ção, aplicamos a reação de BORDET. Empregando em um cazo uma emulsão de bacilos do tipo Shiga-Kruse foi positva a re- ação; nos dous outros utilizamos-nos de uma emulsão de bacilos do tipo Flexner, sendo em um cazo positivo e em outro negativa a reação. Dada a pequena quantidade de sangue que pudemos colher não nos foi possivel verifi- car a questão controversa da especificidade dos anticorpos para cada qual dos escanti- lhões de bacilo dizenterico. dadozo por DOPTER publicado em 1905 é essa especificidade negada. Ao diagnostico clínico da peste procurá- mos aplicar a reação que vimos estudando, aproveitando uma serie de cazos recolhidos 114 Ich versuchte die BORDET'sche Reaktion bei 3 Patienten der hiesigen Irrenanstalt, bei welchen die klinische Diagnose einmal durch Isolirung eines Dysenteriebacillus vom Typus SHIGA-KRUSE aus den Fãces und zweimal durch die Agglutination bestatigt wurde. In einem Falle erhielt ich ein positives Resultat der Reaktion bei Anwendung einer Emulsion von SHIGA-KRUSE'schen Bacillen; in den bei- den anderen benutzte ich Bacillen vom Typus FLEXNER, wobei die Reaktion einmal positiv und das andere mal negativ ausfiel. Bei der geringen Blutmenge, die ich ent- nehmen konnte, war es mir nicht môglich, die Streitfrage über die Specifitát der Anti- | kôrper für die beiden Dysenteriebacillenfor- ao Hospital de Izolamento de S. Sebastiäo. | Além dos primitivos estudos de BORDET que verificou no soro antipestozo de cavalo a pre- zença de sensibilizadora especifica só conhe- cemos neste assunto os trabalhos de STRONG | diesen Gegenstand die Arbeit von STRONG, que, em Manilha, lançou mão da fixação de | ger in Manilla die Komplementablenkung an- complemento para avaliar do gráo de imuni- | dade conferida pela vacina antipestoza e de G. FORNARIO que, no Instituto Pasteur de Pa- ris, verificou a prezença de anticorpo no soro de cobaias vacinadas por via retal e em ou- tros que tinham ingerido per os bacilos mor- tos pelo aquecimento a 600. Esses anticorpos | ainda eram pesquizaveis cinco mezes apoz a inoculação. Em larga serie de 38 cazos clinicamente | diagnosticados, dos quais 32 confirmados ba- cteriolojicamente duas vezes assinalámos a prezença de antijeno e 25 a de anticorpo. | Em onze cazos foi negativa a reação. Nos dous doentes em que conseguimos pesquizar antijeno no soro a hemocultura nos deu a indicação de tratar-se de cazos de septicemia | pestoza. Na pesquiza de anticorpos empre- gámos como antijeno a emulsão bacilar que serve para preparo da vacina antipestoza de Em trabalho cui. | Men zu unterscheiden. In einer sorgfältigen, im Jahre 1905 veróffentlichten Arbeit von DOPTER wird die Spezifität in Abrede gestellt. Die von mir studirte Reaktion suchte ich auch auf die klinische Diagnose anzuwenden, wobei ich eine Serie von Fällen aus dem hie- sigen Isolirhospital (S. Sebastiäo) benutzte. Abgesehen von den ursprünglichen Unter- suchungen von BORDET, welcher in antipes- tôsem Pferdeserum die Gegenwart eines spe- zifischen Antikórpers nachwies, kenne ich über wandte, um den durch die antipestôse Im- pfung bewirkten Immunitätsgrad festzustellen. Dazu kommt noch die Arbeit von FORNARIO aus dem «Institut Pasteur» in Paris, wel- cher den Antikôrper im Blutserum von Meer- schweinchen nachwies; letztere waren teils per rectum geimpft, teils hatten sie per os durch Erhitzung auf 60° abgetótete Bacillen aufge- nommen. In einer Serie von 38 klinisch diag- nostizirten Fällen, unter welchen 32 mit bak- teriologischem Nachweis des Erregers, er- kannte ich zweimal die Gegenwart von Anti- gen und 25 mal die des Antikôrpers. In 11 Fällen war das Resultat der Reaktion ein ne- gatives. Bei 2 Patienten, deren Serum Anti- gen erkennen liess, zeigte die Blutkultur, dass es sich um septikämische Pest handelte. Bei der Untersuchung auf Antikôrper verwandte ich als Antigen die Bacillenemulsion, welche in Manguinhos zur Herstellung der antipes- 115 Manguinhos cujo preparo vem descrita em trabalho desse Instituto por A. Fontes em 1903. Na maioria das observações retiramos san- gue no 5.0 dia de molestia; fornecerem al- guns material no 8.0 e 9.0 dia de enfermidade. Cumpre assinalar, entretanto, quatro doentes que no terceiro dia de molestia nos deram rezultado pozitivo. Ainda assim não é difi- cil explicar esses rezultados para quem co- nhece o tempo de incubação da molestia que é na media de 3-5 dias. Este periodo póde variar dentro de grandes limites, desde algu- mas horas (peste fulminante) até cerca 5 a 15 dias. Na impossibilidade de aqui reproduzir os quadros referentes a todas as observações da- remos uma pesquiza de antijeno e outra de anticorpo, sendo essa de um doente no 7.º dia de molestia. (Quadros 3 e 4). Quadro 3 2 horas a 37º tósen Vaccine dient, wie sie 1903 in einer Arbeit dieses Institutes von A. FONTES be- schrieben wurde. In der Mehrzahl der Be- obachtungen entnahm ich das Blut am fiinften Krankheitstage, bei einigen anderen stammte das Material vom achten bis neunten Tage der Erkrankung; doch miissen auch 4 Patien- ten erwahnt werden, welche am dritten Krank- heitstage mit positivem Resultate untersucht wurden. Im übrigen sind diese Ergebnisse nicht schwer zu verstehen, wenn man die In- cubation der Krankheit, im Mittel 3 bis 5 Tage, berticksichtigt. Letztere Periode schwankt in- nerhalb weiter Grenzen, von einigen Stunden (bei fulminirenden Fallen), bis zu einer Frist von 5 bis 15 Tagen. Da es mir nicht môg- lich ist, die auf samtliche Beobachtungen be- | züglichen Tabellen zu reproduziren, gebe ich eine Untersuchung auf Antigen und eine auf | Antikôrper wieder, wobei die letztere von ei- | nem Patienten am 7. Krankheitstage stammt. (Tabellen 3 und 4). Tafel 3 2 Stunden auf 37° €; — —— 1 hora a 37° 1 Stunde auf 37° | S If (a (881% ge E lol lggE 28.845] BE SaSE| vê |[FES| Do |oXD| EL E 20 | 25 (Eu (232 (9 Es] EE E aoe) 2 a tose] ao = Vet as 3 LOL | de |S2E/FEs See] MO 2 S El o E | 525) Eo |lo 293 x ES | Es | £56 5951005 É ex E 8 n SSIS o E 2 gZ EZ |XZ |Z05 cs 0,2 | 0,2 — | 0,15 | 0,01 | 1 cc == 0,2 | 0,2 | — | 0,15 | 0,01 | 1 cc | — > 0,1 — > » » == » 0,1 — » » » — 0,05 | — + se DUO, ELA ans stone ai lobe ANNEE EE » V. 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A complexa tecnica do metodo biolojico de que se trata não per- mitirá, sem duvida, que ella venha, por ora, | substituir a hemocultura e a prova de WIDAL. Abandonando as infeções bacterianas in- teressou-nos estudar a aplicação que poderia | ter essa nova aquizição dos modernos estu- dos de imunidade em infeções cauzadas por espiroquetas e clamidozoarios. Em vasto numero de cazos de sifilis, pa- ralizia geral e tabes verificámos a reação de WASSERMANN. Não se tratando nessa infe- ção de pesquiza de anticorpo e sim de rea- | ção quimica de natureza ainda não desven- | dada não nos deteremos aqui no estudo do assunto. Melhor campo nos oferecia, sem duvida, a espiroquetose das galinhas onde, ao con- | trario do que se observa na sifilis, o virus | existe em abundancia no sangue. Datam de 1908 os estudos de MANTEUFEL ; até então só eram conhecidos no soro de ga- Ueber die klinische Verwendbarkeit der Komplementablenkung bei den 3 verschiede- nen von mir studirten Infektionen mache ich mir keine Illusionen. Die komplizirte Technik der betreffenden biologischen Methoden wird sicherlich nicht gestatten, dass sie zur Zeit die Blutkultur und den WIDAL’schen Versuch ersetzen kônnten. Abgesehen von Bakterieninfektionen, schien mir von Interesse zu untersuchen, inwiefern sich diese neue Errungenschaft der Immuni- tätsstudien auch bei den durch Spirochäten und Chlamydozoen hervorgerufenen Infektionen anwenden liesse. Ich habe die WASSERMANN'sche Reaktion bei sehr zahlreichen Fällen von Syphilis, allge- meiner Paralyse und Tabes untersucht. Da es sich dabei nicht um den Nachweis eines | Antikôrpers, sondern um eine, in ihrer Natur noch nicht erklarte, chemische Reaktion han- delt, will ich mich hier nicht mit dem Studium dieses Gegenstandes aufhalten. Ein besseres Beobachtungsfeld diirfte zwei- fellos die Spirochätose der Hiihner bieten, PRES SAA linhas imunes: aglutininas e anticorpos para- ziticidas. MANTEUFEL empregou como antijeno san- gue seco pulverizado em suspensäo em soluçäo fiziolojica, extratos de orgäos e de sangue de galinhas varias vezes inoculadas com espiro- quetas. Veríficou assim a prezença de anti- corpos especificos no soro de galinhas imu- nes em todas as experiencias em que traba- lhava com extrato sanguineo. Encetando os estudos sobre antijeno e an- ticorpo na espiroquetoze das galinhas prepa- rámos o imunisoro como o fizera MANTEU- FEL, fazendo repetidas inoculações de sangue rico em espiroquetas em galinhas que tinham rezistido á infeção experimental; diverjimos, entretanto, desse pesquizador no modo de preparar o antijeno. Substituimos o extrato sanguineo pelo soro de galinha no 3.º ou 4.º dia de infeção, oca- zião em que aumenta o numero de espiro- quetas na circulação geral. Inativamos o imunisoro e o soro de gali- nha infetada e assim conseguimos pesquizar é antijeno no soro emquanto o exame micros- copico revelava a presença do microorganismo no sangue. Ao dezaparecer o germen da circulação periferica tornou-se possivel a pesquiza de anticorpos que, então, se mantem no soro du- rante largo espaço de tempo. (Quadros 5 e 6). Entre as infeções cauzadas por clamido- | zoarios ocuparam nossa atenção as infeções | vacinica, variolica, rabica, tracomatoza, o epi- tioma contajiozo dos pombos e a peste das galinhas. Compreendendo o grande alcance que po- derá ter para a imunidade conferida pela va- cida, assim como para o diagnostico da va- riola, com grande empenho pesquizámos nes- sas duas infeções a formação de anticorpos. Na vacina como na variola é questão de não pequena importancia a da circulação do virus no organismo. Longamente debatida ainda não concordaram sobre esse assunto os pesquizadores. Admitida por PFEIFFER, REITER, FROSCH, FREYER, SIEGEL, v. WASIELEWSKI e | Gebiete noch nicht geeinigt. bei welcher im Gegensatze zur Syphilis das Virus reichlich im Blute gefunden wird. Bis zu den Studien von MANTEUFEL (1908) kannte man im Serum der immunisirten Hiihner nur Agglutinine und parasitizide Antikôrper. MAN- TEUFEL verwandte als Antigen getrocknetes, zerriebenes und in physiologischer Salzlósung suspendirtes Blut, ausserdem Extrakte aus den Organen und dem Blute von Hühnern, die mehrmals mit Spirochäten geimpft waren. Auf diese Weise konstatirte er die Gegenwart von spezifischen Antikôrpern im Blute von immu- nisirten Hiihnern bei allen Versuchen, in wel- chen Blutextrakt angewandt wurde. Bei mei- nen Versuchen über Antigene und Antikôrper bei Spirochätose der Hühner stellte ich das Immunserum auf dieselbe Weise her, indem ich wiederholt an Spirochäten reiches Blut auf Hühner verimpíte, welche der experimentellen Infektion widerstanden hatten; dagegen wich ich von MANTEUFEL bei der Herstellung des Antigens ab. Ich ersetzte nähmlich das Blut- extrakt durch Hiihnerserum vom dritten und vierten Infektionstage, an welchen die Zahl der Spirochäten in zirkulirendem Blute zu- nimmt. Ich inaktivirte das Immunserum und das Serum von infizirten Hühnern und es ge- lang mir so, Antigen im Serum nachzuweisen, solange die mikroskopische Untersúchung die Gegenwart der Parasiten im Blute ergab. Nach Verschwinden derselben aus der peripheri- schen Circulation war es móglich, die Anti- kórper nachzuweisen, welche sich dann wáh- rend langer Zeitrâume im Serum erhalten. (Tabellen 5 und 6). ; Von den Infektionen durch Chlamydozoen dienten mir zur Untersuchung Vaccine, Va- riola, Hydrophobie, Trachom, Epithelioma contagiosum der Tauben und Hühnerpest. In Beriicksichtigung der grossen Bedeu- tung, welche die Bildung der Antikôrper fiir die Vaccinimmunität und die Diagnose der Pocken haben kônnte, forschte ich bei beiden Infektionen sehr eifrig nach derselben. Bei der Vaccine und Variola ist die Frage der Circulation des Virus im Organismus von nicht geringer Bedeutung. Trotz langer De- batte haben sich die Forscher auf diesem Wahrend die- 118 — — Quadro 5 2 Stunden auf 37º 2 horas a 37º Peymsaa | fs See ee | pd a Pe + o SEAN aaa eee) à reins | E spas SRE EE le + HH ++ u9uy219d10%}n1q os IN ae Oe u9219d10%}n1q Er | FIST de ada A -RuueH 9% S a -RuueH % Ss — y 001:1 uni o EA 001:I wna Q : -359/9u1 ue y 9 a À À À À À À en -2SIn|qjomnre y Vac (o Mess Brad “USUI = = “USUI | vet OL: I wmnsasuays oO 3 OL: [ uWnJosuago o -UIDMUISI99W Gun a a A A A = -UIDMUISI99W 9 x à AAA A A RARA | o quam (duo = o ¿jua ma duo = 5 UNI9SI9UYNH vos E o U1INIISISUYNH muor-3 S Sd] BULION | It) a "5000 | | A n S S2]EULION | [Beco] “55565 | | a | 3 ssss S q q SIS SO S = (uonxaqu] 3 = I E 10 T (sSISIIY 19p 10 So PATA Bese lait || lat © S | we ater 7) | -S8SS//11i/iial | | D | -yny sayzyuy SSSSS S A co | wnissiauynH eee S = Eu = mr S (3t]sU0pA9JU] €) UNnI9SUNEUUUT o* A R à à | | 5 un.139S13u oS RO A LADA Ra AIR a | ( | | | “UNH SoxutiM fea ear TEA PF sp Pee Plier ett et | ronda Slo] dia TEST IS] | + HH O eee een © 0% G OJIDUIBI a A SEL SA eZ “o S OJUIRO PRE) Hee E Si RAR SA SR ap sojngojo = Se ES E ie & oi ap sojngoro qua À E ees ad a ; e | 001 *I 001 =I € Ogu) X O AAA A = o1au1r9 X Oe | Weel ot gata #0) OU[209 ap 010$S| ™ De) OuI209 ap 010$ || OL:L q > OL:L o eIeqo) 3p 010$ OR A RRR AR RIA A A a] a e1eqo) ap 010$ eR Gas AP AR A a BHO ae A RR a | | : 0ju9ma¡duoo = 5 : Ojuauia duos ua o dd ele Sere 1 hes lol lee lod | patea I a eUUI|ES ap 0108 dese os = vyule3 ap oJos: OSSO = S || (ogsaqui ap vip 10 © Ss (az119 ep 10 ja É L La ! 2 | oe) ep | 38358 || || lla ll! 2 S | siodapsepz) | «SSSS | ||| | lal | = PUUIES op 010S oooo S È 3 BYU ap 0.105 S9000 © = (ogsayu1 ap erp O10SIUNLUT S * AMADA BR: JA AA a.) [e Ef al © o'£) ayus0p Ss A MARÉES ADA a & | | | EUUI|ES Ip OJOS ALDERSHOFF que registram a formaçäo de pus- tulas vacinicas em creanças vacinadas com sangue e extrato organico de vitelos imuni- zados é ella negada por CALMETTE e GUERIN, v. PROWAZEK, PASCHEN, HAALAND, HAUSER, | JÜRGENS, MÜHLENS, e HARTMANN, NOBL, HALBERSTAEDTER e ZÚPFLE. Si na vacina ainda existem duvidas a este | respeito, na variola duvida não pode haver | sobre a pasajem do virus na circulação geral. LA Parece, entretanto, que é em quantidade | relativamente pequena que o virus variolico passa no sangue, depozitando-se rapidamente nas celulas. Nem outra concluzão se poderá tirar do grande numero de vacinações nega- tivas em dorso e cornea de coelho com san- gue e extrato de baço, rim e figado de doen- ente. (v. PROWAZEK e H. ARAGÃO). Na vacina JOBLING e CASAGRANDI regis- tram rezultados positivos e HELLER TOMAR- KIN e BERMBACH rezultados negativos nos en- saios de fixação de complemento. Merecem especial menção os recentes es- tudos de BERMBACH que alem dos ensaios em cobaias e coelhos vacinados e submetidos | a inoculações subcutaneas de linfa glicerinada | ° 7 1 | schweinchen und Kaninchen, die nach der Im- tambem se ocupou da pesquiza in anima no- bili. Em 18 individuos vacinados e revacina- de anticorpos para virus vacinico. Não se limi- | tou esse autor a pesquizar no soro o produto de reação especifica, estendeu aos extratos splenico e hepatico seu campo de ação. Em coelhos e em um vitelo fizemos nos- sos estudos. lhida de vitelo vacinado no Instituto de Man- guinhos. As inoculações eram separadas por intervalos de sete dias e, oito dias apoz a ul- | tima inoculação, procedemos á sangria. zemos uma inoculação por via subcutanea de linfa colhida no quinto dia e 3 outras intra- venosas de 1, 3 e 4cc de linfa glicerinada. Oito dias apoz a ultima inoculação sangra- mos o animal na veia jugular. Foram os coelhos tres vezes | auch Milz- und Leberextract in das Gebiet inoculados com 1 cc de linfa glicerinada co- | 119: === selbe von PFEIFFER, REITER, FROSCH, FREYER, SIEGEL, v. WASIELEWSKI und ALDERSHOFF zugegeben wird (unter Anfúhrung der Bildung von Vaccinepusteln bei Kindern, die mit Blut und Organextrakt von immunisirten Kálbern geimpit waren), wird dieselbe von CALMETTE und GUÉRIN, v. PROWAZEK, PASCHEN, HAA- LAND, HAUSER, JÚRGENS, MÜHLENS und HART- MANN, NOBL, HALBERSTÁDTER und ZÚPFLE verneint. Wenn hierüber bei der Vaccine noch Zweifel herrschen, so kann bei der Variola das Vorkommen des Virus in der allgemeinen | Circulation nicht bezweifelt werden. Es scheint jedoch, dass das Variolavirus in verháltnismássig kleiner Menge ins Blut übertritt und sich rasch in den Zellen abla- gert. Die zahlreichen negativen Impfungen E 3 E | auf Rücken und Cornea des Kaninchens mit tes falecidos de variola hemorajica e conflu- | Blut, sowie mit Milz- und Leberextrakt von an hämorrhagischer und confluirender Variola Gestorbenen (v. PROWAZEK und H. ARAGÃO) gestatten keinen anderen Schluss. Bei Versuchen über Komplementablenkung | geben JOBLING und CASAGRANDI positive, HELLER, TOMARKIN und BERMBACH negative Resultate an. Besondere Erwahnung verdienen die neuerdings gemachten Studien von BERM- BACH, welcher ausser Versuchen mit Meer- pfung mit subkutanen Injektionen von Glyce- dos nem uma vez revelou no soro a prezenca | rinlymphe behandelt wurden, auch Untersu- chungen in anima nobili vornahm. Bei 18 Ge- impften und Revaccinirten endeckte er auch nicht einmal im Serum Antikôrper gegen das Vaccinevirus. Auch beschränkte dieser Autor sich nicht auf das Aufsuchen des spezifischen Reaktionsproduktes im Serum, sondern zog seiner Forschungen. Ich machte meine Studien bei Kaninchen und einen Kalbe. Erstere wurden dreimal mit Glycerinlymphe geimpft, welche von einem | im Institut von Manguinhos geimpften Kalbe Quanto ao vitelo depois de imunizado fi- | herrührte. Die einzelnen Impfungen waren durch einen Zeitraum von 7 Tagen getrennt und 8 Tage nach der letzten fand die Blut- entnahme statt. Beim Kalbe machte ich nach der Immunisi- rung eine subkutane Einspritzung von Lymphe —— 120 —— Para preparo do antijeno empregámos a seguinte tecnica: em gral de porcelana tri- turamos durante 20-30 minutos linfa recente; depois de 10-12 horas de ajitaçäo levamol-a a centrifugo de grande velocidade; desse modo obtivemos um liquido claro sem cor- pusculo em suspensáo e que devia conter vi- rus vacinico. Em todos os ensaios, quer fosse o com- plemente de cobaia, coelho, cabra ou vitelo, foram negativos os rezultados. Náo foram outros os rezultados colhidos na variola. Ao contrario de CASAGRANDI, BEINTKER e SUGAI que assinalaram no soro de variolozos anticorpos para virus da vacina e para o da variola não chegámos na maio- ria dos cazos a essa concluzão. Em cazos de variola e varicela registra NICOLAU BETTEN- COURT a impossibilidade de pesquizar pela reação de BORDET, anticorpos especificos. Procurámos variar o mais possivel as con- dições de experiencia, empregando como an- tijeno o liquido claro retirado da vesicula de um doente de variola confluente no 3.º dia de molestia, soro de um doente de variola hemorajica no segundo dia de enfermidade, conteudo de pustulas variolozas em dias di- ferentes de evolução clinica, ora filtrado em papel grosso, ora em vela BERKEFELD, ex- | trato de figado de variolozo da forma con- | fluente e hemorajica e do baço de um vario- lozo da forma gangrenoza. pos no soro de coelhos inoculados com va- cina, puz de variolozo, extrato de baço e em soro de variolozos no 11.0, 12.0, 14.0, 15.0, 17.0, 20.0, 25.0 e 40.0 dia de molestia. Empregámos, como já o fizemos, na infe- ção vacinica complementos de soros diversos (cobaia, coelho, cabra e vitelo) porque atenta a pluralidade de complementos poder-se ia explicar pela falta de um complemento que - se adaptase ao anticorpo o rezultado negativo da experiencia. Do quadro n.º 7 é facil verificar que só em um cazo para o qual nenhuma explicação aventamos o soro de um doente no 18.0 dia vom 5. Tage und drei andere intravenôse von 1,3 und 4 ccm. Glycerinlymphe. Acht Tage nach der letzten Impfung machte ich bei dem Tiere einen Aderlass an der Jugularis. Zur Herstellung des Antigens diente fol- gende Technik: In einer Reibschale wurde während 20 bis 30 Minuten frische Glycerin- lymphe zerrieben; nach 10 bis 12-stiindigem Schiitteln wurde dieselbe auf eine Centrifuge von grosser Umlaufsgeschwindigkeit gebracht und auf diese Weise eine klare Flüssigkeit ohne suspendirte Partikel gewonnen, welche das Vaccinevirus enthalten musste. Bei allen Versuchen waren die Resultate negativ, sei es nun, dass das Komplement von Meerschwein- chen, Kaninchen, Ziegen oder Kälbern her- rührte. Auch bei der Variola erhielt ich dasselbe Resultat. Im Gegensatz zu (CASAGRANDI, BEINTKER und SUGAI, welche im Serum von Pockenkranken Antikôrper für Vaccine- und Variolavirus fanden, kam ich in der Mehrzahl der Falle zu einem negativen Resultate. Bei Variola- und Varizella-Fallen konstatirte NICO- LAU BETTENCOURT die Unmoglichkeit, spezi- fische Kôrper durch die BORDET’sche Reaktion nachzuweisen, Ich versuchte die Bedingungen der Expe- rimente môglichst mannigfaltig zu gestalten, indem ich als Antigen die, aus einem Bláschen eines Kranken mit confluirender Variola am 3. Krankheitstage entnommene, klare Flüssig- | keit, das Blutserum eines Falles von Variola Para esses antijenos procurámos anticor- | hämorrhagica am 2. Krankheitstage oder den | Inhalt von Pockenpusteln (an verschiedenen Krankheitstagen entnommen und durch dickes Filtrirpapier oder BERKEFELD - Filter filtrirt) | anwandte, ferner Leberextrakt von Fallen der | confluirenden und hâmorrhagischen Form und Milzextrakt von gangraenósen Pocken. Fiir diese Antigene suchte ich Antikórper im Serum von Kaninchen, die mit Vaccine, Variola-Eiter, Milzextrakt geimpft waren, und im Serum von Pockenkranken am 11., 12., 14., | 15., 17., 20., 25. und 40. Krankheitstage. Wie schon bei der Vaccineinfektion ver- wandte ich Komplemente verschiedener Sera (von Meerschweinchen, Kaninchen, Kálbern und von Ziegen), weil man, in Hinsicht auf —— 121 de molestia impedia hemolise quando em prezença de puz variolozo. V. PROWAZEK e ARAGÃO, que na mesma | conjuntura estudaram a ação paralizante que sobre o virus vacinico excercia o soro do va- riolozo não a assinalaram nesse caso, registran- do-a, entretanto, no soro de um doente no 21.0 dia de molestia. De estudos serolojicos anteriormente rea- lizados: pesquiza de lisinas e antitoxinas (HUG- UENIN e v. PIRQUET) assim como da serie de fatos acima relatados licito é concluir que não é o soro e sim a celula o depositario da imu- nidade duradoura conferida pela vacina. Quadro 7 2 horas a 37º 1 hora a 37º = O O |— 33 = v Y 20.3 lol EE co ES [32 | en o Og ail Teel Ee loti Vg glo |» T = a SoHlOES|EVS ES | Oo 3 SERloNg le s>|doTlus—| Bs = > S QE ESlgon|tsu| 5s 3 SEAS IL3 Ele Ca = PS 7) = Ep E o o = E Vu = c/o ad E apd [4 3 SW DE = os al = Va Io = 0,1 |01